中图版选修一 测定微生物的数量 学案.doc

第三节 测定微生物的数量课前预习（10分钟）凡事预则立，不预则废。一、教学目标1、掌握测定土壤微生物数量的方法。2、掌握测定土壤微生物数量工具的使用。3、德育目标：(1)树立热爱大自然，关爱地球生命的观念。(2)树立生物适应环境，环境影响生物的生物学辨证观点。二、自主学习1.测定微生物数量的方法可分为两类： 、 。2.直接计数法：常用的是 ，过程是先将待测样品制成 ，然后去一定量的悬液放在 下进行计数。根据 来计算出单位体积内的微生物总数。该方法的优点是：所需 ，可 得到结果，而且在计数的同时能 ，缺点是：难以计数 的细菌。3.间接计数法：最常用的是 ，又称活菌计数法，是根据 而设计的计数方法。这种方法在样品中含菌数 的情形下，也可以完成计数。4.稀释平板计数法的过程：需要将待测样品制成均匀的 ，尽量使样品中的 ，再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的 ；或是将一定量的 ，与 培养基混合，倾入 中，摇匀、静置待凝。经过培养后，就由 生长繁殖形成 ，这样的一个菌落就代表着 。统计培养基中出现的 ，即可推算出检测样品中的 。课堂互动学习情境导入：学导结合：一、显微镜直接计数法1、细菌或血球计数板是一种在特定平面上划有格子的特殊载片。在划有格子的区域中，有分别用粗线和细线分隔而成的方格。其中有以粗线为界划成的方格 25 （或 16 ）格，这种以粗线为界的格子称为中格。其内有以细线为界的 16 （或 25 ）小格。因此，用于细胞计数的区域的总小格数为： 2516 = 400 ，该 400 个小格排成一正方形的大方格，此大方格的每条边的边长为 lmm ，故 400 个小格的总面积为 lmm2。在进行细胞计数前，先取盖玻片盖于计数方格之上，盖玻片的下平面与刻有方格的血球计数板平面之间留有0.1 mm 高度的空隙。含有细胞的待测样品液被加注在此空隙中。加注在 400 个小格（ lmm2 ）之上与盖玻片之间的空隙中的液体总体积应为： 1.0 mm1.0mm0.1lmm =0.1 mm3 。一般表示样品细胞浓度的单位为个 ml 。因此，在计数后，获得在 400个小格中的细胞总数，再乘以 104 ，以换算成每毫升所含细胞数。其计算公式如下：菌液的含菌数 ml=每小格平均菌数40010000稀释倍数。2、在进行具体操作时，一般取五个中格进行计数，取格的方法一般有两种： 取计数板斜角线相连的 5 个中格； 取计数板 4 个角上的 4 个中格和计数板正中央的 1 个中格。对横跨位于方格边线上的细胞，在计数时，只计一个方格（ 4 条边）中的 2 条边线上的细胞，而另两条边线上的细胞则不计；取边的原则是每个方格均取上边线与右边线或下边线与左边线。二、稀释平板计数法缺点：由于死亡的细菌不能繁殖产生菌落，所以稀释平板计数法只计数 。注意1、 设置重复组，增强实验的说服力与准确性。将待测样品经一系列 10 倍稀释，然后选择三个稀释度的菌液，分别取0.lml接种到已制备好的平板上，然后用无菌涂布器将菌液涂布在整个平板表面，放在适宜的温度下培养计数菌落数。为使结果接近真实值，可将同一稀释度菌液加到三个或三个以上的平板上，经涂布、培养，计算出菌落平均数。2、为了保证结果准确，一般选择菌落数在 30 300 的平板进行计数，若设置的重复组中结果相差太远，意味着操作有误，需重新实验。三、实践案例：土壤中好气性细菌的计数制备土壤稀释液 取 的土样；制备系列稀释液取样及倒平板 该实验的接种方法是 。 培养 观察记录 实验设计原则：平行重复原则、对照实验原则 结果分析：1.选取具有 菌落数的稀释倍数并计数。（1）选择的原则是：细菌、放线菌、酵母菌以每个培养皿内有 个菌落为宜，霉菌以每个培养皿内有 个菌落为宜。（2）同一稀释倍数各个重复的菌落数 。2.每克土壤样品菌数= 。探究深化：在做土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验时，出现如下问题，请给予解答： （1）一位同学用稀释倍数为106的稀释液在培养基中涂布了3个平板，统计的菌数数为21、212和256，该同学以这3个平板上菌落数的平均值163作为统计结果。你认为这一结果是否接近真实值？ ，如果需要改进，如何改进？ 。 （2）a同学筛选出的菌落为150个，其他同学只选择出50个，并且他在设计实验时并没有设置对照。你认为a同学结果产生的原因可能有哪些？ 。如何设计对照实验排除可能影响实验结果的因素？四、探究活动：测定样品中的微生物数量1 检测天然水源中细菌总数和大肠菌群数 （1）细菌总数通常是指 检测样品中所含 的总数。（2）大肠菌群数通常是指 检测样品中所含 的实际数值。（3）大肠杆菌使 emb 培养基发出 光泽。2 检测某种食品中的菌落总数和大肠菌群数一般说来， 总数越多，说明食品的卫生质量 。3土壤中分解尿素细菌的计数某些细菌中含有 ，能将培养基中的 分解成 ，该物质溶于水变成氢氧化铵，导致培养基变成 性，使 指示剂呈现 。总结反思：巩固提高一、选择题1用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的是（ ）a涂布了一个平板，统计的菌落数是230b涂布了两个平板，统计的菌落数是215和260，取平均值238c涂布了三个平板，统计的菌落数分别是21、240和250，取平均值163d涂布了三个平板，统计的菌落数分别是210、240和250，取平均值2332在做分离分解尿素的细菌实验时，a同学从对应106培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。a同学的结果产生原因可能有（ ）由于土样不同由于培养基污染由于操作失误没有设置对照a b c d3请选出下列正确的操作步骤（ ）土壤取样 称取10g土壤取出加入盛有90ml无菌水的锥形瓶中 吸取0.1ml进行平板涂布 依次稀释至101、102、103、104、105、106、107稀释度 . . . 4某同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均值为234，那么每克样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1ml）（ ）a2.34108 b2.34109 c234 d23.45进行系列稀释时，按怎样的顺序进行（ ）a稀释度递增 b稀释度递减 c不论稀释度大小 da、b两项均可6可以鉴定出分解尿素的细菌的方法是（ ）a以尿素为唯一氮源的培养基中加酚红指示剂b以尿素为唯一氮源的培养基中加二苯胺试剂c以尿素为唯一氮源的培养基中加苏丹试剂d以尿素为唯一氮源的培养基中加双缩脲试剂7用稀释涂布混合平板法来统计样品中活细菌的数目，其结果与实际值相比（ ）a比实际值高 b比实际值低c和实际值一致 d比实际值可能高也可能低8测定土壤中细菌的数量一般选104、105和106倍的稀释液进行平板培养；而真菌的数量，一般选用102、103和104倍稀释，其原因是（ ）a细菌个体小，真菌个体大 b细菌易稀释真菌不易稀释c细菌在土壤中含量比真菌高 d随机的，没有原因二、非选择题1统计菌落数目一般用稀释涂布平板法，当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个 ，来源于样品稀释液中的一个 。统计的菌落数往往比活菌的实际数目 ，原因是当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是 个菌落数。2将10ml酵母菌培养液在适宜温度下培养，并于不同时间等量均匀取样4次，分别测定样品中酵母菌的数量和ph值，结果如下。请分析回答：样品酵母菌数量（个/mm3）ph 1121048282054 31210374100050（1）表中样品的取样先后次序为 。（2）对酵母菌而言，10ml该培养液的环境负荷量为 。（3）若第五次均匀取样时，样品中的酵母菌数量为760个/mm3，产生这种结果的原因是： 。测定微生物的数量答案实践案例：土壤表层3-5cm处 稀释混合平板法 结果分析：1.合适 （1）30-300 10-100 （2）相差不太悬殊2. 某稀释倍数的菌落平均数稀释倍数/涂布平板时所用稀释液的体积探究深化：（1）不接近真实值 接种前将菌液摇匀后重新实验 （2）可能是土样不同，也可能是培养基污染或操作失误；方案有二：一是由其他同学用与a同学一样的土壤进行实验，如果与a同学一致，则证明无误，如果结果不同，则证明a同学存在操作失误或培养基配制有问题。另一种方案是将a同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证