黄曲霉毒素M1操作规程.doc

黄曲霉毒素M1操作规程一、 样品的前处理将适量的液态奶于12000r/min下离心10min,取下层奶样直接检测即可。二、 溶液的配制1、 标品稀释液：用去离子水将AFM1浓缩标品稀释液按1：3体积比进行稀释，即1份AFM1浓缩标品稀释液加3份去离子水。用于提取样本的稀释，标品稀释液在4环境可保存一个月。2、 洗涤工作液：用去离子水将浓缩洗涤液（10）按1:9体积比进行稀释，即1份浓缩洗涤液（10）加9份去离子水。用于酶标板的洗涤，洗涤工作液在4环境可保存一个月3、 6个不同浓度的标准液：取6个1.5ml离心管，标为1到6号，分别加入995l,400l, 400l,400l, 400l, 400l标品稀释液,按照下表配制标准品。如取5l高浓度黄曲霉毒素M1标准品（810ppb）加入1号管，与995l标品稀释液混匀，制备成4.05 ppb黄曲霉毒素M1标准液。取200l配好的4.05ppb黄曲霉毒素M1标准液，加入2号管，与400l标品稀释液混匀，制备成1.35ppb黄曲霉毒素M1标准液。取200l配好的1.35ppb黄曲霉毒素M1标准液，加入3号管，与400l标品稀释液混匀，制备成0.45ppb黄曲霉毒素M1标准液。依次稀释，制备成1.35ppb、0.45ppb、0.15ppb、0.05ppb、0ppb的标准液，（见下表）。标准品现配现用。配制好的标准液请在一周内用完（4存放）。 管号样品稀释液（l）加入黄曲霉毒素M1标准液浓度（ng/ml）19955l高浓度标准品4.052400200l l号液1.353400200l 2号液0.454400200l 3号液0.155400200l 4号液0.0564000三、 检测步骤 1.、测前须知：（1）、使用之前将所有试剂和需用板条的温度回升至室温（2025）。（2）、使用之后立即将所有试剂放回28。（3）、黄曲霉毒素M1可致癌，应戴手套操作。2、操作步骤： （1）、将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（2025）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均需摇匀。 （2）、取出需要数量的微孔板，将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封，保存于28。不要冷冻。 （3）、洗涤工作液在使用前也需回温。 （4）、编号：将样品和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。一般标准品的两个平行样上下位置放置，样品的两个平行样左右位置放置。 （5）、加标准品/样本：加标准品/样本50l到对应的微孔中，加入AFM1酶标物50l/孔，再加入AFM1抗试剂50l/孔，轻轻震荡混匀，用盖板膜盖板后置室温避光环境中反应30min. (6)、洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤工作液300l/孔，充分洗涤5次，每次间隔30s，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破）。 （7）、显色：加入底物液A液50l/孔，再加底物液B液50l/孔，轻轻震荡混匀，用盖板膜盖板后置室温避光环境反应1520min。 （8）、测定：加入终止液50l/孔，轻轻震荡混匀，设定酶标仪于450nm处（已设置好，请在5min内读完数据），测定每孔OD值。（若无酶标仪，