平邑甜茶幼苗NO3-吸收及利用特对供磷水平的响应.doc

平邑甜茶幼苗NO3-吸收及利用特性对供磷水平的响应季萌萌1，陈汝2，安欣1，文炤1，姜远茂1*（1.山东农业大学园艺科学与工程学院，作物生物学国家重点实验室，山东泰安 271018 ；2.山东省果树研究所，山东泰安 271000 ）摘要：【目的】研究平邑甜茶幼苗NO3-N吸收和利用特性对不同供磷水平的响应机制，旨在从氮素吸收的角度挖掘影响氮肥利用率低的关键因素，从而为果园科学、高效利用养分提供理论依据，进而提高氮肥利用效率；【方法】本试验运用15N示踪技术，并借助非损伤扫描离子选择电极，测定了不同供磷水平下平邑甜茶的氮素吸收和利用情况；【结果】在低磷水平（0-1.0mmolL-1）时，平邑甜茶根系长度、根系总表面积较小，且根尖数较少，此时平邑甜茶各器官Ndff均处于较低水平；随着供磷水平的增加，在2.0-4.0mmolL-1时，平邑甜茶根系生长迅速，其根系长度、表面积及根尖数量均有显著增加，且达到最高水平，各器官Ndff较之前也有明显增加；随后，在6.0-16.0mmolL-1时，由于过量供磷抑制了根系的生长，使平邑甜茶幼苗根系长度、表面积均有大幅降低，根尖数量骤降，平邑甜茶各器官Ndff值维持在一个略低于最大值的水平。当磷浓度在3.0 mmolL-1 时平邑甜茶对NO3-有强烈吸收，在16.0 mmolL-1时有明显外排。平邑甜茶幼苗对硝态氮的利用效率在磷亏缺处理时较低，而后随着供磷水平的增加，平邑甜茶幼苗的氮肥利用率显著增加，在4.0mmolL-1磷水平时其氮肥利用率达到最大值，但持续过量供磷反而使平邑甜茶幼苗的氮肥利用率骤然降低；【结论】平邑甜茶对氮素的吸收受供磷水平影响显著，其主要是通过影响根系的生长发挥作用。磷亏缺时氮素吸收和利用受到抑制，适当供磷能够刺激幼苗根系生长，从而促进平邑甜茶对氮素的获取，然而过量供磷会抑制平邑甜茶根系的生长，使氮素吸收受到限制。关键词：苹果；砧木；磷水平；氮素；吸收；利用Characteristics on the NO3- absorption and utilization of Malus hupehensis Rehd. seedlings on different phosphorus levelJI Meng-meng1, CHEN Ru2, AN Xin1, WEN Zhao1, JIANG Yuan-mao1*（1.College of Horticulture Science and Engineering, Shandong Agricultural University/ State Key Laboratory of Crop Biology, Tai an, Shandong 271018, China；2.Shandong Institute of Pomology, Taian,Shandong 271000, China） Abstract: 【Objective】 In this study, we focused on the NO3-N absorption and utilization of Malus hupehensis Rehd. seedlings on different phosphorus level, aiming to excavate the key factors influencing nitrogen utilization ratio, which provide theoretical basis for scientific and efficient utilization of the fertilizer in apple orchard.【Method】The 15N tracer technique and non-invasive micro-test technique(NMT) were used to determine the nitrogen absorption and utilization ratio of Malus hupehensis Rehd. seedlings on different phosphorus level.【Results】The root length, root surface area and quantity of root tips as well as the Ndff value were very low when the seedlings were grown in phosphorus deficiency environment(0-1.0mmolL-1), and with the addition of phosphorus application(2.0-4.0mmolL-1), obvious growth of the seedlings can be seen thus the parameters determined above increased significantly. Whereas the root growth was restrained when the seedlings were in excess phosphorus application(6.0-16.0mmolL-1), and the absorption of nitrogen decreased in consequence. The utilization of nitrogen varied on different phosphorus level: the utilization ratio of phosphorus deficiency treatment was lower than that on normal phosphorus environment, while the nitrogen utilization decreased violently when the phosphorus application was overdose.【Conclusion】The absorption and utilization capacity were restrained when the seedlings were in phosphorus deficiency environment, while the root growth and nitrogen absorption was promoted with appropriate phosphorus application, whereas with the overdose application of phosphorus, the root growth and nitrogen utilization decreased.Keywords: apple; rootstock; phosphorus level; nitrogen; absorption; utilization1 引言【研究意义】随着农民肥料投入量的迅速提高，在促进了土壤有机质的增长和土壤肥力提高的同时，由于过量施肥造成的地下水硝酸盐超标和湖泊水体富营养化问题也日趋严重1,2。氮、磷肥的过量施用，不仅给环境造成威胁，也大大影响了土壤质量，导致土壤矿质养分失调，加速了土壤有机质的分解，造成土壤板结和地力下降等严重问题3,4。因此，如何科学、合理地利用养分，提高肥料的吸收和利用效率，是现代果树产业可持续发展的关键所在。【前人研究进展】磷能够促进根系对氮素的吸收，丁宁5等研究表明，适当施用磷肥可促进作物对土壤中氮素的吸收，而低磷胁迫显著降低了作物对于氮素的吸收和积累6,7。袁新民8等研究表明，施用磷肥后，刺激了小麦根系的发育，进而促进氮素的吸收，另一方面，施磷的增产作用提高了作物对氮素的需求，使作物吸氮量增加，最终降低了土壤中硝酸盐的累积。Corina Graciano9等研究表明，施磷能够促进巨桉树体的干物质积累及其对氮、硫的吸收，且施磷处理后树体吸氮能力增强，器官含氮量较施氮处理明显增多。磷在植物的氮代谢过程中发挥重要的作用，研究表明，硝酸还原酶发挥作用需要NADP+/NADPH作为其电子受体，催化NO3-还原为NO2-10,11，此过程是NO3-还原的限速步骤。非损伤微测技术（Non-invasive Micro-test Technique, NMT）作为一种新型的电生理技术，能够在真实生理环境状态下，测定各种进出样品的分子和离子的浓度、流速和三维运动方向的信息，已广泛应用于植物生理和发育的各项研究12,13。骆翔14等利用NMT技术研究了柽柳根不同区域的氮素吸收特性发现，柽柳的根尖、分生区、伸长区等部位对NO3-离子有明显的内流趋势，而对NH4+表现出外排趋势。【本研究切入点】目前有关供磷水平对植物氮素吸收、利用的影响的研究主要集中于供磷对氮素吸收以及其向各器官的分配6,7,15，主要侧重于对结果的阐述，在植物氮素吸收对不同供磷水平的响应机理的研究甚少，且在苹果砧木上的研究未有报道。【拟解决的关键问题】本试验借助非损伤扫描离子选择电极，研究了平邑甜茶幼苗NO3-N吸收和利用特性对不同供磷水平的响应机制，旨在从氮素吸收的角度挖掘不同供磷水平对氮肥利用率的影响机制，从而为果园科学、高效利用养分提供理论依据，进而提高氮肥利用效率。2 材料与方法2.1 试验时间、地点本试验于2014年在山东农业大学园艺试验站完成，室内实验在国家苹果工程技术研究中心实验室进行。2.2 植物材料以一年生平邑甜茶为试材，于3月上旬将层积好的种子播于穴盘中，正常温度湿度管理，至幼苗长出45片真叶时，移栽至装满石英砂的花盆中，石英砂用前洗净晾干，移栽后缓苗1周，期间浇灌去离子水，缓苗后先用1/2浓度Hoagland营养液浇灌一周，随后3天浇一次Hoagland营养液（含H2PO4- 1mmolL-1）。2.3 试验设计试验设置P0、P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8九个磷浓度处理，分别相当于0、1.0、2.0、3.0、4.0、6.0、8.0、12.0、16.0mmolL-1 KH2PO4，其它营养元素浓度与正常Hoagland营养液相同，待长至7-8片真叶时，每次浇灌营养液时另外加入0.1g Ca15NO3（共施入1g，分10次）用于15N标记。2.4 样品采集与分析每个处理选取长势基本一致，无病虫害的幼苗60株，分成4份。随机选取15株平邑甜茶幼苗，运用非损伤扫描离子选择电极测定根尖NO3-离子的吸收/外排速率，试验在旭月（北京）科技有限公司进行。选取15株幼苗，采集根系和叶片，用于硝酸还原酶活性测定。另外随机选取15株，将根系和叶片组织磨成匀浆，沸水浴提取30min，定容至25ml容量瓶，脱色过滤后，测定游离NO3-含量，3次重复。剩余样品整株取样，每个重复5株，分出根、茎、叶三部分，经清水冲洗后用WinRHIZO 根系分析软件进行根总表面积、根系总长度分析，然后置于 105 杀青30 min，80 烘干至恒重，称量各器官的干物质量，随后用不锈钢电磨粉碎，过0.25 mm筛后测定各器官15N丰度和器官全氮量。全氮用凯氏定氮法测定，15N丰度在中国农业科学院原子能利用研究所用MAT-251质谱仪测定。2.5 数据处理Ndff =（植物样品中15N丰度%自然丰度%）/（肥料中15N丰度%自然丰度%）100%氮肥利用率=Ndff器官全氮量（g）/施肥量（g）100%用Microsoft Excel 2007进行数据处理，用DPS数据处理系统单因素试验统计分析方法进行显著性和相关性分析，多重比较采用LSD法。3 结果与分析3.1 不同供磷水平下平邑甜茶的生物量由表1可知，不同供磷处理，平邑甜茶各器官生物量均呈现出叶根茎的趋势，在磷亏缺处理时生物量最低，其根、茎、叶生物量分别为0.17g、0.12g、0.28g；且在1.0-3.0mmolL-1磷水平时，平邑甜茶根、茎、叶生物量以及总生物量均随着磷浓度增加显著增大，至3.0mmolL-1处理时最大（根、茎、叶生物量分别为0.93g、0.60g、1.47g），之后随着磷浓度的递增，呈现出缓慢下降的趋势，在6.0-16.0mmolL-1磷水平下，其生物量基本维持在一个比较稳定的水平。表1 不同供磷水平下平邑甜茶的各器官生物量Table 1 Biomass of Malus hupehensis Rehd. seedlings on different phosphorus levelH2PO4-mmolL-1根生物量（g）Biomass of root（g）茎生物量（g）Biomass of stem（g）叶生物量（g）Biomass of leaf（g）总生物量（g）Total biomass（g）00.170.02g0.120.03f0.280.02h0.570.03g1.00.640.01de0.320.02d0.710.02g1.660.02f2.00.900.03ab0.550.04b1.170.02c2.630.06b3.00.930.04a0.600.03a1.470.01a3.000.02a4.00.880.01b0.520.02b1.280.02b2.680.01b6.00.660.02d0.340.01d0.850.03ef1.860.04d8.00.740.04c0.420.02c0.990.03d2.150.04c12.00.560.03f0.250.01e0.830.05f1.640.08f16.00.590.03ef0.260.02e0.890.03e1.740.05e注（Note）：同一列小写字母表示差异达0.05显著水平Values followed by a lowercase within the same column are significantly different at the 0.05 level.3.2 平邑甜茶NO3-吸收特性对供磷水平的响应3.2.1 不同供磷水平下NO3-的吸收速率平邑甜茶幼苗根系对NO3-的吸收受供磷水平影响较大，不同磷水平下其吸收能力差异显著。非损伤扫描离子选择电极测试表明，当磷浓度在3.0-6.0 mmolL-1时，平邑甜茶对NO3-有吸收作用，在3.0 mmolL-1时有强烈吸收，此时吸收平均速率约为39.66 pmolcm-2s-1。过低或过高的磷浓度下，平邑甜茶幼苗对NO3-有外排作用，在16.0 mmolL-1时有明显外排（吸收速率-91.01pmolcm-2s-1）。正值表示NO3-外排，负值表示NO3-吸收 values which are positive indicate the efflux of NO3-, while the negative values indicate the absorption of NO3-.图1 不同供磷水平下平邑甜茶幼苗根系NO3-的吸收速率Fig.1 The NO3- absorption rate of Malus hupehensis Rehd. seedlings on different phosphorus level图2 3mmolL-1H2PO4-处理下平邑甜茶根系对NO3-的吸收速率Fig.2 The NO3- absorption rate of Malus hupehensis Rehd. seedlings on 3mmolL-1 H2PO4-3.2.2 不同供磷水平下平邑甜茶的根系形态指标平邑甜茶幼苗根系总长度、根系总表面积及根尖个数受供磷水平的影响较为显著，其中在低磷水平（0-1.0mmolL-1）时，其根系长度、根系总表面积较小，且根尖数较少；随着供磷水平的增加，在2.0-4.0mmolL-1时，平邑甜茶根系生长迅速，其根系长度、表面积及根尖数量均有显著增加，且达到最高水平；随后，在6.0-16.0mmolL-1时，由于过量供磷抑制了根系的生长，使平邑甜茶幼苗根系长度、表面积均有大幅降低，根尖数量骤降。3.2.3 不同供磷水平下平邑甜茶各器官Ndff值如表3所示，不同供磷水平下平邑甜茶幼苗根、茎、叶的Ndff变化显著。其中，当H2PO4-浓度为0-1.0mmolL-1时，平邑甜茶各器官Ndff均处于较低水平，且茎Ndff%根Ndff%叶Ndff%；此时生长介质中磷浓度较低，平邑甜茶根系生长较弱，根部的吸收能力有限，加之根部需氮较少，促使氮素向地上部转运。但H2PO4-浓度为2.0-4.0mmolL-1时，各器官Ndff较之前明显增加，且根Ndff%茎Ndff%叶Ndff%；供磷显著促进了根系生长，使根部吸氮能力明显增强，同时根部为了维持其较大的生长量，需要更多的氮素供应，因此向地上部转移的氮素相对较少。随着供磷水平的继续增加，当H2PO4-浓度为6.0-16.0mmolL-1时，平邑甜茶各器官Ndff值并未持续增加，而是维持在一个略低于最大值的相对较高的水平，此时供磷对根部生长的促进作用逐渐不明显，根系的生长受到抑制，因而使根系对氮素的吸收能力减弱。表2 不同供磷水平下平邑甜茶的根系形态指标Table 2 Root architecture parameters of Malus hupehensis Rehd. seedlings on different phosphorus levelH2PO4-mmolL-1Concentration 根系长度（cm）Length（cm）根系总表面积（cm2）Surface area（cm2）根尖数（个）Quantity of tips0368.638.74d 63.732.67g2390.33144.46e 1.0512.419.31c64.102.47g3073.67291.75e2.01074.41130.92a182.837.51a7243.33472.23ab3.0998.6818.10a154.254.48c7879.33759.36a4.01061.8537.89a173.133.80b6920.67890.22abc6.0776.1714.36b 120.701.42ef4798.33504.80d8.0849.2526.49b131.404.21d6116.00202.72c12.0807.015.47b125.343.27de 6319.67592.11bc 16.0838.486.93b115.677.17f4305.33685.83d注（Note）：同一列小写字母表示差异达0.05显著水平Values followed by a lowercase within the same column are significantly different at the 0.05 level.表3 不同供磷水平下平邑甜茶的各器官Ndff值Table 3 Ndff value of Malus hupehensis Rehd. seedlings on different phosphorus levelH2PO4-浓度mmolL-1Concentration 根Ndff%Ndff%of root茎Ndff%Ndff% of stem叶Ndff%Ndff% of leaf03.190.04i 4.090.07g 3.370.05g 1.04.990.08f5.170.01d5.000.02a2.06.540.07b6.240.02a4.570.03c3.06.920.01a6.300.02a4.680.06b4.05.950.01c5.880.02b4.990.08a6.04.560.02h4.710.03f4.210.04d8.05.550.04d5.350.09c3.770.07f12.05.250.07e5.240.03d4.040.01e16.04.700.02g4.820.05e3.810.00f注（Note）：同一列小写字母表示差异达0.05显著水平Values followed by a lowercase within the same column are significantly different at the 0.05 level.3.3 平邑甜茶NO3-利用特性对供磷水平的响应3.3.1 不同供磷水平下平邑甜茶叶片NO3-积累量及硝酸还原酶（NR）活性由表4可知，不同供磷处理平邑甜茶幼苗叶片NO3-积累各不相同，除16.0mmolL-1处理较低外，其余磷水平处理NO3-积累量均维持在300-500gg-1，其中，4.0mmolL-1处理NO3-积累量相对较低，为311.79gg-1。叶片硝酸还原酶活性数据表明，磷亏缺时叶片NR较低，但1.0-3.0mmolL-1处理时，叶片NR活性明显升高，均维持在30gg-1h-1以上，此时由根部运送来的NO3-能够在硝酸还原酶的作用下迅速还原成NO2-，进而参与叶片的氮代谢过程；而4.0-16.0mmolL-1处理时，硝酸还原酶活性较低，氮代谢水平较弱，平邑甜茶幼苗对氮素的利用水平较低。表4 不同供磷水平下平邑甜茶叶片NO3-积累量及硝酸还原酶（NR）活性Table 4 The accumulation of NO3- and the Nitrate Reductase activity in leaves of Malus hupehensis Rehd. seedlings on different phosphorus levelH2PO4-mmolL-1Concentration 叶片NO3-积累量（gg-1）The accumulation of NO3-硝酸还原酶活性（gg-1h-1）Nitrate Reductase activity0402.7310.90ab 13.980.92c 1.0466.287.76a34.061.33a2.0375.7910.23bc34.760.95a3.0407.0418.39ab35.460.82a4.0311.7911.07cd16.380.54b6.0431.52130.34ab7.830.91d8.0415.388.25ab16.870.43b12.0411.136.01ab18.480.73b16.0275.0713.08d11.973.05c注（Note）：同一列小写字母表示差异达0.05显著水平Values followed by a lowercase within the same column are significantly different at the 0.05 level.3.3.2 不同供磷水平下平邑甜茶幼苗对NO3-的利用率平邑甜茶幼苗对硝态氮的利用效率受供磷水平的影响显著，其中磷亏缺处理时，其氮肥利用率极低，仅为7.22%，而后随着供磷水平的增加，平邑甜茶幼苗的氮肥利用率显著增加，在4.0mmolL-1磷水平时其氮肥利用率达到最大值（42.24%），但持续过量供磷反而使平邑甜茶幼苗的氮肥利用率骤然降低，在6.0-16.0mmolL-1处理时，其氮肥利用率基本维持在20-30%的水平。图3 不同供磷水平下平邑甜茶幼苗对NO3-的利用效率Fig.3 The NO3- utilization rate of Malus hupehensis Rehd. seedlings on different phosphorus level4 讨论根尖是整个根部氮素吸收和分泌最活跃的部位，距离根尖越远的部位，根组织的年龄越大，老的组织会产生一个纤维层，阻碍氮素的吸收16。另外，根系成熟区生有大量根毛，大大增加了根系的吸收表面积，在氮素吸收中也发挥重要的作用17。在本试验中，低磷水平下平邑甜茶幼苗根系生长较弱，根系表面积和根长较小，根尖数较少，因而植株对氮素的吸收能力较弱；随着供磷水平的增加，充足的养分能够满足根系生长的需要，其根系生长迅速，根系长度、表面积及根尖数量均有显著增加，此时植株吸氮水平随之上升；然而过量供磷抑制了平邑甜茶根系的生长，其根尖数量骤降，根系对氮素的吸收能力也随之减弱。对根系生长具有抑制作用的信号来自叶片NO3-的含量，其可以调节地上部和地下部之间的物质分配，当植物体内氮素积累到一定程度时，植物根系生长往往受到抑制18-20，过量供磷时平邑甜茶叶片有较高的氮素积累，更加抑制了根系的生长。硝态氮进入植物细胞后，可以作为一种信号分子诱导硝酸还原酶的产生21，硝酸还原酶是硝酸盐同化过程中的限速酶，可直接调节NO3-的还原，从而调节氮代谢11。磷是NADPH的组成成分，而NADP+/NADPH作为硝酸还原酶的电子载体，将电子从FAD逐步转移到NO3-，使其还原为NO2-10。同时磷是ATP的重要组分，而ATP是细胞生命活动不可或缺的能量供应22。本研究认为，磷亏缺处理时由于缺乏充足的电子载体和能量的供应，使平邑甜茶叶片硝酸还原酶活性较低，根系吸收的氮素不能够在短时间内完成同化，因此此时平邑甜茶的氮肥利用率较低；充足供磷能够保证ATP和电子载体的活性和数量，叶片硝酸还原酶活性明显高于低磷处理，NO3-的同化作用加速，因而此时植株氮肥利用率也较高；而过量供磷时，叶片硝酸还原酶活性也明显降低，导致平邑甜茶幼苗的氮肥利用率偏低，但有关过量供磷对硝酸还原酶活性的影响未见报道。同时，本研究运用非损伤微测技术，活体测定了不同供磷水平下平邑甜茶根系对NO3-的吸收速率，在磷亏缺和磷过量时NO3-均呈现强烈的外排趋势，此时平邑甜茶幼苗对氮素的吸收受到严重抑制，而适量供磷处理平邑甜茶幼苗对NO3-的吸收速率较大，能够促进根系对氮素的吸收，为探讨氮素吸收机理提供了可靠依据。5 结论本研究证明了氮、磷相互作用对平邑甜茶幼苗生长的影响，不同供磷水平通过影响根系的生长和扩散从而影响氮素的吸收。磷亏缺时，由于根系生长受限，其氮素吸收和利用受到限制，适当充足的供磷刺激了幼苗根系生长，从而促进平邑甜茶对氮素的获取，然而过量供磷促进了叶片氮素的积累，过量的NO3-作为信号抑制了平邑甜茶根系的生长，使氮素吸收受到抑制。References1 Moll R H,et al . Analysis and interpretation of factors which contribute to efficiency of nitrogen utilization. Agronomy Journal,1982,74: 562-564. 2 张福锁. 测土配方施肥技术M. 中国农业大学出版社, 2011,7-9. Zhang F S. Soil testing and fertilization recommendationM. China Agricultural University Press, 2011,7-9.3 李强, 赵秀兰, 胡彩荣. ISO 10390:2005土壤质量pH测定J.污染防治技术,2006,19(1):53-55. Li Q, Zhao X L, Hu C R. ISO 10390:2005 Soil quality -determination of pHJ. Pollution Control Technology, 2006,19(1):53-55.4 李庆军, 田利光, 刘庆花, 李俊良, 刘成连, 原永兵. 山东省果园土壤酸化状况及酸化原因分析J. 山东农业科学, 2011,10:57-59. Li Q J, Tian L G, Liu Q H, et al. Soil acidification condition and cause analysis of Shandong orchardJ. Shandong Agricultural Sciences, 2011,10:57-59.5 丁宁, 姜远茂, 陈倩, 彭福田. 不同供磷水平对平邑甜茶生长及15N-尿素吸收和利用的影响J.山东农业大学学报（自然科学版）, 2012,43(2):223-226. Ding N, Jiang Y M, Chen Q, Peng F T. Effect of phosphorus on growth and 15N absorption and utilization of Malus hupehensis J. Journal of Shandong Agricultural University (Natural Science), 2012, 43(2):223-226.6 何鹏, 吴敏, 韦家少, 等. 不同磷水平对橡胶树幼苗氮钾吸收、分配与利用的影响J.中国农学通报,2011,27(16): 1-6. He P, Wu M, Wei J S et al. Influence of different phosphorus levels on absorption, utilization and partition of N, K on Hevea brasiliensis Seedlings J.Chinese Agricultural Science Bulletin, 2011, 27(16): 1-6.7 李绍长, 胡昌浩, 龚江, 杨管印. 供磷水平对不同磷效率玉米氮、钾素吸收和分配的影响J. 植物营养与肥料学报,2004,10(3): 237-240. Li S C, Hu C H, Gong J, Yang G Y. Effects of phosphorus supply on nitrogen and potassium absorption and distribution of maize with different phosphorus efficiency J. Journal of Plant Nutrition and Fertilizer, 2004,10(3):237-240.8 袁新民, 同延安, 杨学云, 李晓林, 张福锁. 施用磷肥对土壤NO3-N累积的影响J. 植物营养与肥料学报, 2000, 6(4): 397-403. Yuan X M, Tong Y A, Yang X Y, et al. Effect of phosphate application on soil nitrate nitrogen accumulationJ.Journal of Plant Nutrition and Fertilizer, 2000, 6(4): 397-403.9 Corina Graciano, Juan F.Goya, Jorge L.Frangi, Juan J.Guiamet. Fertilization with phosphorus increases soil nitrogen absorption in young plants of Eucalyptus grandis.J. Forest Ecology and Management, 2006,236:202-210.10 Campbell W.H., Redinbaugh M.G. Ferric-citrate reductase activity of nitrate reductase and its role in iron assimilation by plantsJ. Journal of Plant Nutrition, 1984,7:799-806.11 刘丽, 甘志军, 王宪泽. 植物氮代谢硝酸还原酶水平调控机制的研究进展J. 西北植物学报, 2004, 24 (7): 1355-1361. Liu L, Gan Z J, Wang X Z. Advances of studies on the regulation of nitrate metabolism of plants at nitrate reductase levelJ. Acta Botanica Boreali-Occidentalia Sinica,2004, 24 (7): 1355-1361.12 吕杰, 苗璐, 蔡蕊, 武慧, 徐洪伟, 周晓馥. 非损伤微测技术在植物根系生长发育研究中的应用J. 生物技术, 2013,23(1): 89-93. Lu J, Miao L, Cai R, et al. Application of non-invasive micro-test technique in study of plant roots growth and developmentJ. Biotechnology,2013,23(1): 89-93.13 尹晓明, 贾莉君, 范晓荣, 沈其荣. 离子选择微电极技术及其在植物营养学研究中的应用J. 植物营养与肥料学报,2011,17(3): 744-754. Yin X M, Jia L J, Fan X R, Shen Q R. The application of ion selective micro electrode in the study of plant nutritionJ.Journal of Plant Nutrition and Fertilizer,2011,17(3):744-754.14 骆翔, 朱艳霞, 杜友, 郭玉海. 柽柳根不同区域吸氮特性研究J. 中国农学通报, 2011,27(22): 66-69. Luo X,