新苏教版选修1 第一章　第1课时 微生物的分离和培养 学案.docx

第1课时微生物的分离和培养学习导航1.简述高压蒸汽灭菌锅的使用方法及注意事项。2.掌握制备细菌培养基的方法。3.学会利用无菌操作技术接种与培养大肠杆菌。重难点击1.培养基的配制方法及常见种类。2.大肠杆菌的接种与分离培养。一、微生物分离和培养的基本理论1无菌操作技术实验室常利用高温处理达到灭菌效果，包括采用干热灭菌或湿热灭菌等方法。(1)干热灭菌方法是将拟灭菌的物品放在干热灭菌箱内，在160170 温度下加热12 h以达到灭菌的目的。(2)湿热灭菌方法常采用高压蒸汽灭菌锅进行，如手提式高压蒸汽灭菌锅就是实验室常用的灭菌仪器之一。高压蒸汽灭菌锅的使用包括加水、装锅、加热排气、保温保压、出锅等步骤。2配制培养基(1)培养基概念：为人工培养微生物而制备的适合微生物生长、繁殖或积累代谢产物的营养基质。(2)培养基类型天然培养基：采用动植物组织或微生物细胞以及它们的提取物或粗消化物配制而成，如牛肉膏蛋白胨培养基。优点：取材便利、营养丰富、配制简便；缺点：营养成分难以控制、实验结果的重复性较差。合成培养基：由准确称量的分析纯等级别的高纯度化学试剂加蒸馏水配制而成，如葡萄糖铵盐培养基。优点：化学成分及其含量明确、实验的可重复性好；缺点：配制繁琐、成本较高。(3)培养基成分：一般都含有水、碳源(提供碳元素的物质)、氮源(提供氮元素的物质)和无机盐等最基本的物质。(4)培养基的配制原则：在配制培养基时，根据拟培养的微生物的不同需要，有时还要加入维生素等特殊的营养物质，并要调节培养基的ph使之满足微生物生长的需要。3接种微生物(1)接种的概念：在无菌条件下将微生物接入培养基的操作过程。(2)常用的接种工具：玻璃涂布器、接种针、接种环等。(3)接种方法用接种针进行穿刺接种。用接种环进行斜面接种或在固体培养基平板上进行划线接种。用玻璃涂布器进行涂布平板接种等。1“无菌操作”与人们的生活休戚相关，无时无处不在。在日常生活、生产实践、自身健康防护中，有哪些“无菌操作”的例子？答案日常生活、生产实践、自身健康防护中“无菌操作”的例子分别有：(1)被褥、鞋袜要常晒；肉制品储存时用盐腌等。(2)家畜阉割后，要在其伤口处涂抹一些酒精或白酒；初冬杨树树干涂刷生石灰水等。(3)打针时，注射部位要用酒精棉球擦洗，一般要在其伤口处涂抹一些碘酒。2实验室常利用高温处理达到灭菌效果，包括采用干热灭菌或湿热灭菌等方法。以下图高压蒸汽灭菌锅的使用为例，探究无菌技术的方法。(1)高压蒸汽灭菌的使用原理是什么？答案使用原理：将待灭菌物品放在盛有适量水的高压蒸汽灭菌锅内；把锅内的水加热煮沸，并把其中原有的冷空气彻底驱尽后将锅密闭；再继续加热就会使锅内的蒸汽压逐渐上升，从而温度也随之上升到100 以上。(2)简述手提式高压蒸汽灭菌锅的使用步骤。答案加水、装锅、加热排气、保温保压、出锅等。(3)消毒和灭菌的原理是什么？消毒和灭菌都能杀死所有的微生物吗？是否适用于所有的生物和物品？答案都是使微生物的蛋白质变性，借此杀死微生物。灭菌可杀死处理材料中的全部微生物(包括芽孢和孢子)，而消毒仅能杀死物体表面或内部的部分微生物(一般不包括芽孢和孢子)。不是，无菌技术既要考虑效果，又要考虑操作对象的承受能力。例如，活体生物材料、操作者的双手等只能消毒，而不能灭菌。(4)无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？答案还能有效避免污染环境以及操作者自身被微生物感染。3微生物的培养离不开培养基，根据下面某微生物培养基的配方回答下列问题：成分含量nano33 gk2hpo41 gkcl0.5 gmgso47h2o0.5 gfeso40.01 gc6h12o630 gh2o1 000 ml青霉素0.1万单位(1)该培养基的碳源、氮源分别是什么？答案碳源：c6h12o6；氮源：nano3。(2)依据物理性质、用途划分，该培养基分别属于什么培养基？答案依据物理性质划分，该培养基属于液体培养基；依据用途划分，则属于选择培养基。(3)用该培养基培养的微生物可能是什么？答案根据培养基的原料，所培养微生物的同化作用的类型是异养型，培养的微生物可能是酵母菌或霉菌。(4)在固体培养基中加入的琼脂能为微生物提供营养吗？为什么？答案不能，微生物不能分解琼脂。(5)普通培养基能培养病毒吗？为什么？答案不能，因为病毒只能在活细胞中营寄生生活。整合提升(1)消毒与灭菌的区别项目条件结果常用的方法消毒较为温和的物理学方法或化学方法仅杀死物体上绝大多数微生物(包括病原微生物和有害微生物的营养细胞)煮沸消毒法(在100 下56 min可以杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢)、巴氏消毒法、化学药剂消毒法灭菌强烈的物理学或化学方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子干热灭菌、高压蒸汽灭菌、灼烧灭菌(2)培养基的成分及功能营养要素含义作用主要来源碳源凡能提供所需碳元素的物质构成生物体细胞的物质和一些代谢产物，有些是异养生物的能源物质无机碳源：co2、nahco3等；有机碳源：糖类、脂肪酸、花生饼粉、石油等氮源凡能提供所需氮元素的物质合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物无机氮源：nh3、铵盐、硝酸盐等；有机氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨等生长因子(特殊营养物质)生长必不可少的微量有机物酶和核酸的组成成分维生素、氨基酸、碱基等水在生物体内含量很高，在低等生物体内含量更高不仅是优良的溶剂，而且可维持生物大分子结构的稳定培养基、大气、代谢产物等无机盐为微生物提供除碳、氮元素以外的各种重要元素，包括某些大量元素细胞内的组成成分；生理调节物质；某些化能自养菌的能源；酶的激活剂培养基、大气等环境1下列常用的无菌操作中，错误的是()a无菌操作不要求杀死培养基中的一切细菌b用酒精擦拭双手的方法是对操作者进行消毒c实验操作过程应在酒精灯火焰附近进行d玻璃器皿(吸管、培养皿)可用酒精擦拭答案d解析无菌技术是用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染，而不是杀死培养基中的一切细菌；对操作者应用较温和的方法进行消毒，如酒精擦拭；实验操作过程应在酒精灯火焰附近进行，防止杂菌污染；对无菌操作用到的玻璃器皿要用干热灭菌的方法彻底消灭其中的微生物，用酒精擦拭不能达到目的。2下列关于培养基的说法正确的是()a培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质b培养基只有两类：液体培养基和固体培养基c除水以外的无机物只能提供无机盐d无机氮源不可能提供能量答案a解析根据培养基的物理性质，可分为液体培养基、半固体培养基和固体培养基，在液体培养基中加入不同量的凝固剂如琼脂可形成半固体或固体培养基；除水以外的无机物如nh4hco3，既可以是碳源，也可以是氮源，不仅仅提供无机盐；无机氮源有时也能提供能量，如nh3可以为硝化细菌提供能量。方法链接培养基的种类分类标准培养基种类培养基特点作用物理性质固体培养基外观呈固态微生物的分离、计数等半固体培养基容器放倒不致流出，剧烈振动则破散观察微生物的运动、鉴定菌种等液体培养基呈液态常用于工业生产功能选择培养基允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他微生物生长选择、分离鉴别培养基根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品鉴定成分来源天然培养基化学成分还不清楚工业上大规模的微生物发酵生产合成培养基化学成分完全了解在实验室用来对微生物分析二、大肠杆菌的接种与分离培养1配制牛肉膏蛋白胨培养基2斜面接种和培养大肠杆菌斜面接种大肠杆菌的主要目的有菌种转移、扩大培养和保存纯净菌种等。具体操作步骤：3平板划线分离和培养大肠杆菌在实验室中，平板常常被用来培养、分离细菌等微生物。(1)牛肉膏蛋白胨固体培养基的平板制作配制好的培养基装瓶灭菌倒平板(a.打开瓶塞b.灼烧瓶口灭菌c.倒培养基d.倒置平板)。(2)平板划线分离与培养大肠杆菌平板划线法的含义：用带有微生物的接种环在平板培养基表面通过分区划线而纯化分离微生物的一种方法。注意事项：接种和划线操作时需要在酒精灯火焰附近进行。1利用培养基培养微生物时，首先要把微生物接种到培养基上。以牛肉膏蛋白胨培养基的配制为例，完成下列有关问题：(1)以下为细菌培养基的配制的流程，若将分装步骤与调节ph步骤颠倒过来是否可行？答案不行。若分装后再调节ph，会使培养基的ph调节不均匀；还可能将培养基弄到试管口，易被污染。(2)从防止杂菌污染的角度思考，平板冷凝后将平板倒置的原因是什么？答案平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染。2斜面接种和培养大肠杆菌(1)下图接种方法分别是什么？答案图1是穿刺接种、图2是斜面接种、图3是平板划线接种。(2)下表是关于接种操作步骤及其目的或分析说明，请完善下表。顺序接种操作步骤分析说明或目的将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红将接种环灭菌，避免污染菌种在火焰旁冷却接种环，拔去试管棉塞避免杂菌污染菌种将试管口通过火焰灼烧灭菌，防止试管口菌体污染培养基将灭过菌的接种环伸入菌种管，先将环部接触斜面顶端使接种环冷却，避免杀死菌种抽出接种环时，带菌部分不要触及管壁或通过火焰防止菌种沾于管壁，防止菌种被杀死在培养基斜面上由底部向上轻轻划“s”型曲线，但不要将培养基表面划破初步接种。划破培养基不利于后续的继续划线，长出的菌落不标准将试管口与试管塞通过火焰23次，迅速塞紧试管防止杂菌污染将接过种的试管，放在恒温箱(37 )中培养24 h培养细菌，观察接种和培养的结果3.平板划线分离和培养大肠杆菌在实验室中，平板常常被用来培养、分离细菌等微生物。思考回答下列相关问题：(1)平板划线法接种菌种时，哪些操作可防止杂菌污染？答案接种前将接种环放在酒精灯火焰上灼烧。划完一个区域后，将接种环灼烧，冷却后再划下一区域。接种环沾取菌液时，要将试管口、棉塞等通过火焰。划线时将培养皿打开一条缝隙，将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内。(2)在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？答案避免接种环温度太高，杀死菌种。(3)为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？答案操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物。每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，是为了保证菌落是由单一的细菌繁殖而成。(4)在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？答案需要。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。(5)在做第二次划线以及其后的操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？答案划线后末端含有的细菌数目较少，每次从上一次的末端开始划线能够使细菌的数目随划线次数的增加而逐渐减少，最终分散成单个的细菌。(6)为何最后一次划线不能与第一次划线相连？答案最后一次划线已经将细菌稀释成单个的细胞，如果与第一次划线相连则增加了细菌的数目，达不到纯化的效果。3关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述中，不正确的是()a配制固体培养基时一般要加适量的琼脂b分装到试管中的液体培养基的高度约为试管高度的1/2c待培养基冷却至50 左右时进行搁置斜面d搁置斜面时，斜面长度不超过试管总长的1/2答案b解析在配制固体培养基时，琼脂是最常用的凝固剂，a项正确；分装到试管中的液体培养基的高度约为试管长度的1/5，b项错误；待培养基冷却至50 左右时进行搁置斜面，以防培养基因温度过高而烫手，也要防止培养基因温度过低而凝固不能形成平板，c项正确；搁置斜面时，将试管口部枕在高约1 cm的木条或其他合适高度的物体上，使其自然倾斜，斜面长度不超过试管总长的1/2，d项正确。4在接种操作的过程中，不正确的是()a要将接种环灼烧灭菌b取下棉塞后要将试管口灼烧灭菌c将接种环伸入试管内，先接触长菌多的部位d接种后还要将管口灭菌加塞答案c解析接种环伸入试管内，先接触培养基斜面顶端或其他无菌体的培养基部位，待接种环冷却后再接触长菌部位。5下图是微生物平板划线示意图，划线的顺序为1、2、3、4、5。下列操作方法正确的是()a操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌b划线操作须在火焰上进行c在5区域中才可以得到所需菌落d在1、2、3、4、5区域中划线前后都要对接种环灭菌答案d解析在每次划线前后都要对接种环进行灭菌，接种环的灭菌方法应是在火焰上灼烧，接种时划线操作在火焰边进行；在5个区域中，只要有单个活细菌，通过培养即可获得所需菌落。一题多变(1)平板划线法所用培养基属于什么培养基？答案琼脂固体培养基。(2)如何确认制备的培养基是否合格？答案将一个未接种的培养基同接种培养基一起培养，若未接种的培养基无菌落生长，说明制备的培养基合格，否则需要重新制备。(3)如果培养基上长出的菌落相互重叠，则说明存在什么问题？答案说明划线不充分，应该重新操作。(4)在第二区域内划线时，接种环上的菌种直接来源于哪里？答案接种环上的菌种直接来源于上次(第一区中)划线的末端。1下图是灭菌锅及其局部剖面示意图，其中甲、乙、丙依次指()a安全阀、排气阀、压力表b排气阀、安全阀、压力表c安全阀、排气阀、温度表d排气阀、安全阀、温度表答案a解析根据教材p8图高压蒸汽灭菌锅结构示意图，可判断甲、乙、丙分别为安全阀、排气阀、压力表。2在培养基的配制过程中，具有如下步骤，其正确的顺序为()溶化调ph加棉塞包扎分装称量a bc d答案b解析培养基的配制顺序为称量溶化调ph分装加棉塞包扎。3下列有关平板划线操作的叙述，不正确的是()a第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物b每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种c在第二区域内划线时，接种环上的菌种直接来源于菌液d划线结束后，灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者答案c解析平板划线操作中，接种环挑取菌种前灼烧的目的是避免接种环上可能存在的微生物污染培养物，以后每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线后残留的菌种；划线结束仍需灼烧接种环，是为了能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者；从第二次划线开始，每次划线时接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端。4下列依次表示倒平板、接种的位置，以及划线法接种的路径示意图，其中错误的是()答案d解析倒平板时，用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖，防止空气中的杂菌污染，故a项正确；接种时，左手将培养皿打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，故b项正确；划线时要从上一次划线的末端开始进行，让菌种来源于上一次划线末端，故c项正确，d项错误。5下表所示为某微生物培养基的配方，请回答下列问题：成分含量nano33 gk2hpo41 gkcl0.5 gmgso47h2o0.5 gfeso40.01 gc6h12o630 gh2o1 000 ml青霉素0.1万单位(1)按照物理性质，该培养基属于 培养基。(2)该培养基中的碳源是 。不论何种培养基，在各成分都溶化后分装前，要进行的是调整ph和 ，倒平板时，一般需冷却至 左右，在 附近操作。答案(1)液体(2)c6h12o6灭菌50 酒精灯火焰解析(1)该培养基中没有加入琼脂，属于液体培养基。(2)c6h12o6为微生物提供碳源，培养基在分装前要调整ph和灭菌，倒平板时，一般需冷却至50 左右，在酒精灯火焰附近操作。基础过关1在微生物的实验室培养中，下列各项操作不需要在无菌条件下进行的是()a配制培养基 b倒平板c接种 d培养答案a解析配制培养基时不需要无菌操作，因为配制后的培养基需要进行高压蒸汽灭菌。2下列关于灭菌和消毒的叙述中，不正确的是()a灭菌是指杀灭环境中的一切微生物的细胞、芽孢和孢子b消毒和灭菌实质上是相同的c接种环用灼烧法灭菌d常用的灭菌方法有加热法、过滤法、紫外线法、化学药品法答案b解析消毒是指用较为温和的物理学或化学方法杀灭物体上绝大多数微生物的方法，而灭菌则是指采用强烈的物理学或化学方法使物体内外所有的微生物永远丧失生长和繁殖能力的方法，二者实质上不同。3将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37 恒温箱的目的是()a对比观察培养基有没有被微生物利用b对比分析培养基上是否生有杂菌c没必要放入未接种的培养基d为了下次接种时再使用答案b解析设计对照实验的目的是为了检测培养基制备是否成功，即是否生有杂菌。4下列有关倒平板操作错误的是()a将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上b使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰c将培养皿打开，培养皿盖倒放在桌面上d等待平板冷却凝固后需要倒过来放置答案c解析倒平板时，培养皿的盖不能完全打开。5在微生物的实验室培养过程中，获得纯净培养物的关键是()a将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌b接种纯种细菌c在适宜条件下培养d防止外来杂菌的入侵答案d解析将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌只是无菌技术的一个方面，不代表无菌技术的全部，a项错误；接种纯种细菌是获得纯净培养物的前提，b项错误；接种方法和培养条件不能防止杂菌的污染，c项错误；防止外来杂菌的入侵是获得纯净培养物的关键，d项正确。6在平板划线操作中，错误的是()a将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红b将烧红的接种环在火焰旁边冷却c接种环在平板上的划线位置是随机的d在挑取菌种前和接种完毕后均要将试管口通过火焰答案c解析接种环灼烧及接种前后试管口要通过火焰，其目的是为了防止杂菌污染，将接种环先冷却再接种可以避免高温烫死菌种，因此a、b、d都是正确的；在平板上划线时，要划三至五条平行线，而不是随机划线，因此c项错误。能力提升7防止杂菌入侵，获得纯净的培养物，是研究和应用微生物的前提。下列叙述错误的是()a实验室里可以用紫外线或化学药物进行消毒b接种环、接种针等金属用具，直接在酒精灯火焰的内焰部位灼烧灭菌c在实验室中，切不可吃东西、喝水，离开实验室时一定要洗手，以防止被微生物感染d使用后的培养基丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境答案b解析为防止杂菌污染，研究和应用微生物时应进行消毒和灭菌，实验室可以用紫外线或化学药物进行消毒，接种环、接种针等金属用具，直接在酒精灯火焰的充分燃烧层即外焰部位灼烧灭菌，a项正确，b项错误；在实验室中，切不可吃东西、喝水，离开实验室时一定要洗手，以防止被微生物感染，c项正确；使用后的培养基丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境，d项正确。8下列关于平板划线操作正确的是()a使用已灭菌的接种针、培养皿，在操作过程中不再灭菌b打开含菌种的试管，需通过火焰灭菌，取出菌种后，需马上塞上棉塞c将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线即可d最后将平板倒置，放在培养箱中答案d解析在平板划线时，已灭过菌的接种针在每次划线后，都必须用灼烧灭菌法灭菌，a项错误；盛有菌种的试管在打开或重新塞棉塞前，都需通过火焰灼烧灭菌，b项错误；接种时用带有微生物的接种环在平板培养基表面分区划线，不能将沾有菌种的接种环伸入平板内，c项错误；划线接种后，须将平板倒置放在培养箱中，d项正确。9下图为实验室培养和纯化大肠杆菌过程中的部分操作步骤，下列说法错误的是()a步骤操作时需要在酒精灯火焰旁进行b步骤中，待倒入的培养基冷却后盖上培养皿的皿盖c步骤中，每次划线前后都需对接种环进行灼烧处理d划线接种结束后，将图平板倒置后放入培养箱中培养答案b解析培养与纯化大肠杆菌的过程需要在酒精灯的火焰旁进行，故a项正确；步骤中倒入培养基后应立即盖上培养皿的皿盖，故b项错误；步骤接种时，每次划线前后都要对接种环进行灼烧处理，故c项正确；划线接种结束后，将平板倒置后放入培养箱培养，防止冷凝水污染培养基，故d项正确。10接种是微生物培养和微生物选择的必要步骤之一。下列关于接种的叙述中，不正确的是()a接种通常在酒精灯火焰附近进行b接种之前要对接种环进行灼烧灭菌c接种指无菌条件下将微生物接入培养基的操作d接种时接种环要将培养基的表面划破答案d解析接种时接种环不能划破培养基的表面，故d错误。11下表是某种微生物培养基的配方表，请据表回答下面的问题：牛肉膏蛋白胨nacl琼脂蒸馏水0.5 g1 g0.5 g1 g200 ml(1)此培养基的营养成分有五类，其中蛋白胨提供的营养物质是 。(2)在培养基制备过程中，各种成分溶化后分装前，必须的操作是 。(3)在农业生产研究上，常需要进行微生物的培养和计数。如图是利用 法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步 分散到培养基的表面。为达到这一目的，操作上应注意： (至少答两项)。答案(1)碳源、氮源、维生素(2)调节ph(3)平板划线稀释每次划线前要灼烧接种环；冷却后从上一区划线末端开始划；首尾区不重叠(任选两项)解析微生物培养基含有碳源、氮源、水和无机盐等营养物质，培养基制备过程中各种成分溶化后分装前，必须调节ph。12在实验室培养微生物，一方面需要为培养的微生物提供合适的营养和环境条件，另一方面需要确保无处不在的其他微生物无法混入。请回答下列相关问题：(1)培养基能为培养的微生物提供营养。各种培养基的具体配方不同，但一般都含有 、 、 、 ；另外，培养基还需要满足微生物生长对 、 、 的要求。(2)获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。对实验操作的空间、操作者的衣着和手，需进行清洁和 (填“消毒”或“灭菌”)；对用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等需进行 (填“消毒”或“灭菌”)。(3)微生物接种的方法很多，其核心都是要防止杂菌的污染，保证培养物的纯度。微生物接种最常用的方法是 和 。答案(1)水碳源氮源无机盐ph特殊营养物质氧气(2)消毒灭菌(3)平板划线法涂布平板法13请回答与大肠杆菌纯化培养有关的问题：(1)制备培养基：配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须进行 ，培养基在接种前要进行 灭菌。(2)纯化大肠杆菌：通过接种在琼脂固体培养基的表面进行连续划线操作，将聚集的菌种逐步分散到培养基的表面，在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这种方法称为 。用该方法统计样本菌落数时 (填“是”或“否”)需要设置对照组？为什么？ 。(3)讨论分析：纯化大肠杆菌时， (填“可”或“不可”)用加入抗生素的方法防止杂菌感染。用该方法分离大肠杆菌时，从第二次划线操作起，每次总是要从上一次划线的末端开始划线，并划线数次，其原因是 。大肠杆菌与酵母菌的最本质区别是 。答案(1)调节ph高压蒸汽(2)平板划线法是需要判断培养基是否被污染(3)不可线条末端的细菌数量少，最终可得到由单个细菌繁殖而形成的菌落大肠杆菌无成形的细胞核解析(1)配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须进行调节ph，培养基在接种前要进行高压蒸汽灭菌。(2)通过接种在琼脂固体培养基的表面进行连续划线操作，将聚集的菌种逐步分散到培养基的表面，在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这种方法称为平板划线法。因需要判断培养基是否被污染，故需要设置对照。(3)纯化大肠杆菌时，不可