中图版选修一 微生物的分离与纯培养 作业 (2).docx

微生物的分离和纯培养一、单选题1下列对灭菌和消毒的理解不正确的是()a灭菌是指杀灭环境中的一切微生物的细胞、芽孢和孢子b消毒和灭菌实质上是完全相同的c接种环用灼烧法灭菌d常用灭菌方法有灼烧法、干热灭菌法、高压蒸汽灭菌法【答案】b【解析】灭菌与消毒是两个概念。灭菌是指杀灭一定环境中的所有微生物，包括芽孢和孢子。根据不同的材料选用不同的灭菌方法，如接种环用火焰烧灼法，培养基用高压蒸汽灭菌法等。消毒是指杀死物体表面或内部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)，使用的是较为温和的物理或化学方法；故选b。考点：本题考查灭菌和消毒的相关知识。点评：本题意在考查考生的识记能力和比较区分能力，属于中等难度题。2下列有关物质的提取和分离的说法，错误的是（ ）a提取香蕉dna时，需用洗涤剂溶解细胞膜b直接用差速离心法可分离动物细胞内的各种物质c可用电泳法将蛋白质、dna、rna等生物大分子分离d用以纤维素为唯一碳源的培养基来分离纤维素分解菌【答案】b【解析】提取香蕉dna时，需用洗涤剂溶解细胞膜，分离动物细胞内的各种物质，先让细胞吸水胀破再分离，用电泳法将蛋白质、dna、rna等生物大分子分离，用以纤维素为唯一碳源的培养基来分离纤维素分解菌，所以b选项错误。3将酵母菌培养在由硝酸铵、硫酸镁、氯化钙、磷酸二氢钾、必需的微量元素和水配成的营养液中，右图中能表示在一段时间内酵母菌数量变化的曲线是a.a b. b c.c d.d【答案】d【解析】试题分析：酵母菌为异养型生物，培养基中必须有有机碳源，而该培养基中不含有机物，故酵母菌只能不断死亡。故选d。考点：本题考查了微生物的培养和酵母菌的代谢类型，意在考查考生能识记并理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力。4在含硫热泉或深海火山口中生活的极端嗜热嗜酸菌，作为唯一的碳源进行硫的代谢的是（）a. 甲烷 b. 二氧化碳 c. 氨基酸 d. 甲醛【答案】b【解析】深海热泉中有一种极端嗜热嗜酸菌，在氧化硫的过程中，细菌提取了化学能，将二氧化碳固定形成有机物，所以在含硫热泉或深海火山口中生活的极端嗜热嗜酸菌，作为唯一的碳源进行硫的代谢的是二氧化碳，故选b。5下列有关细菌培养的叙述，正确的是a. 在琼脂固体培养基上长出的单个菌落含有多种细菌b. 在培养基中加入青霉素可抑制真菌而促进细菌生长c. 向液体培养基中通入氧气能促进破伤风杆菌的生长d. 用固体培养基可对微生物进行分离【答案】d【解析】本题考查细菌的培养，要求考生明确培养基对微生物的选择作用，利用固体培养基可对微生物进行分离培养。细菌培养时，在琼脂固体培养基上长出的单个菌落仅含有一种细菌，a错误；细菌对抗生素敏感，在培养基中加入青霉素可抑制细菌而促进真菌生长，b错误；破伤风杆菌是严格厌氧型细菌，向液体培养基中通入氧气能抑制破伤风杆菌的生长，c错误；用固体培养基可对微生物进行分离培养，d正确。【点睛】在培养基全部营养成分具备的前提下，依据某些微生物对某些物质的抗性，在培养基中加入某些物质，以抑制不需要的微生物，促进所需要的微生物生长；如在培养基中加入青霉素时可抑制细菌、放线菌的生长，从而分离得到酵母菌和霉菌。6关于纤维素分解菌选择培养正确的是（ ）a可以增加纤维素分解菌的浓度 b可以减少纤维素分解菌的浓度c所用培养基是固体培养基 d选择培养可以省略，但不可以重复操作【答案】a【解析】试题分析：ab在将样品稀释涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基之前，可以通过选择培养增加纤维素分解菌的浓度，a正确，b错误；c这里选择培养的目的是增加纤维素分解菌的浓度，所用培养基是液体培养基，以便于下一步的稀释涂布操作，c错误；d选择培养可以省略，若进行选择培养，可以重复操作，d错误。考点：微生物的分离和培养；培养基对微生物的选择利用【名师点睛】纤维素分解菌分离的实验流程土壤取样：富含纤维素的环境选择培养：用选择培养基培养，以增加纤维素分解菌的浓度（可以省略）梯度稀释：制备系列稀释液涂布平板：将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上挑选产生透明圈的菌落7下表是关于几种微生物所利用的碳源和氮源的描述，正确的是abcd硝化细菌根瘤菌尿素分解菌乳酸菌碳源co2co2葡萄糖葡萄糖氮源hno3n2尿素n2【答案】c【解析】硝化细菌的氮源是nh3，要瘤菌的碳源是有机物，乳酸菌的氮源是氨基酸，c选项正确。8关于倒平板操作，叙述错误的是a. 将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞b. 右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰c. 用左手将培养皿打开，右手将锥形瓶中的培养基倒入培养皿，左手缓慢盖上皿盖d. 等待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置【答案】c【解析】将过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，防止培养皿被污染，a正确；使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰，对锥形瓶的口径处进行灼烧灭菌，防止空气中的杂菌污染，b正确；用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基（约1020ml）倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖，而不能打开皿盖，c错误；倒平板后冷却需要倒过来放置，防止皿盖上的水珠滴落到培养基上，d正确。【点睛】倒平板操作，培养皿盖不能完全打开，否则会有微生物污染，培养皿应该是打开一条稍大于瓶口的缝隙，进行到平板操作。9如果发酵产品是产物，可采用下列方法分离提纯蒸馏 萃取 过滤 离子交换 沉淀a b c d【答案】a【解析】10用来判断选择培养基是否起到了选择作用和培养基是否被污染需要设置的对照分别是未接种的该选择培养基 接种了的该选择培养基接种了的牛肉膏蛋白胨培养基 未接种的牛肉膏蛋白胨培养基a. b. c. d. 【答案】a【解析】用来判断选择培养基是否起到了选择作用，自变量是培养基的不同，对照组应为没有选择作用的接种了的牛肉膏蛋白胨培养基，实验组为接种了的该选择培养基；若判断选择培养基是否被污染，自变量为是否接种培养物，对照组应为未接种的该选择培养基，实验组为接种了的该选择培养基。综上分析，a项正确，b、c、d三项均错误。11以下操作用到接种环的是（ ）a平板划线操作 b系列稀释操作c涂布平板操作 d倒平板操作【答案】a【解析】平板划线法需要接种环，故a正确。系列稀释操作是用滴管和试管进行的，故b错误。涂布平板法是用涂布器操作的，故c错误。倒平板只需要培养基和培养皿，故d错误。【考点】本题考查微生物的培养相关知识，意在考察考生对知识点的识记理解掌握程度12分别将四份等量的接种有乳酸菌的牛奶分别装入四个容量不同的烧瓶中，甲烧瓶为500ml，乙烧瓶为250 ml，丙烧瓶为150ml，丁烧瓶为100ml。密封保存，其中发酵得最好的是a甲瓶 b乙瓶 c丙瓶 d丁瓶【答案】d【解析】略13微生物的实验室培养有较高的技术要求，下列操作不符合规范的是a. 溶化琼脂时，需要用玻璃棒不断搅拌以防止糊底b. 新配置的培养基可以用高压蒸汽灭菌或干热灭菌的方法灭菌c. 倒平板操作时，待平板凝固后，需要将其倒过来放置d. 用平板划线法分离大肠杆菌时，需要多次灼烧接种环【答案】b【解析】试题分析：琼脂熔化时，容易糊底，所以熔化琼脂时，需要用玻璃棒不断搅拌以防止糊底，a正确；培养基的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，不是干热灭菌，b错误；倒平板操作时，待平板凝固后，需要将其倒过来放置，防止水珠落到培养基上，c正确；用平板划线法分离大肠杆菌时，第一次划线前和每次划线后，都要对接种环进行灼烧灭菌，d正确。考点：本题主要考查微生物的分离的相关知识，意在考查考生对所学知识的理解，把握知识间内在联系的能力。14下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是a用蒸馏水配置牛肉膏蛋白胨培养基，经高温，高压灭菌后倒平板b取104,105,106倍的土壤稀释液和无菌水各01mol分别涂布于各组平板上c将实验组和对照组平板倒置，37恒温培养2428小时d确定对照组无菌后选择菌落数在3以上的实验组平板进行计数【答案】d【解析】试题分析：首先要进行培养基的制备、用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板，a正确；然后进行对土壤稀释液进行涂布于各组平板上，b正确；将实验组和对照组平板倒置，37恒温培养2448小时，c正确；确定对照组无菌后，选择菌落数在30300的进行记数，求平均值，再通过计算得出土壤中细菌总数，d错误。考点：微生物的分离和培养15倒平板时需将培养基冷却至 （ ）a室温 b0左右c50左右 d100左右【答案】c【解析】倒平板时需将培养基冷却至50左右，因为通常要在培养基中加抗生素，过高的温度会使抗生素失活，说以铺平板的培养基温度不能太高。另外，培养基的琼脂在温度太低时会凝固，所以普平板的培养基温度也不能太低，故选c。【考点定位】倒平板16下列操作与消毒灭菌无关的是（ ）a培养基在50左右时倒平板b接种前用火焰灼烧接种针（环）c接种前用肥皂洗双手，再用酒精擦试双手d在酒精灯的火焰旁完成倒平板的操作【答案】a【解析】试题分析：培养基在50时搁置斜面属于接种后的培养，与灭菌和消毒无关，a正确；接种前用火焰灼烧接种环属于灭菌，b错误；接种前用酒精擦拭双手属于消毒，c错误；接种在酒精灯的火焰旁完成属于灭菌，防止杂菌污染，d错误。考点：本题考查消毒灭菌的相关知识，意在考查考生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系，形成知识网络的能力。17流感病毒分为a、b及c三型，其中a型流感病毒寄主域最广，可感染多种动物，禽流感病毒是a型病毒。a型流感病毒的表面有两种棘蛋白：血凝素(以h代表)有15个亚型，令病毒进入细胞，具有专一性；神经胺酸酶(以n代表)有9个亚型，协助子病毒破细胞而出。造成2003年底亚洲禽流感的病毒是h5n1型病毒，即具有第五亚型血凝素和第一亚型神经胺酸酶的a型流感病毒。依照这种表示法，下列属于a型流感病毒的有( )hlon8 hl6n8 h8n10 hl6n16 h9n9a、 b、 c、 d、【答案】b【解析】试题分析：由题意可知，血凝素(以h代表)有15个亚型，所以h是115，错误，神经胺酸酶(以n代表)有9个亚型，所以n是19，错误，所以正确，b正确考点：本题考查病毒的相关知识，意在考查考生能从课外材料中获取相关的生物学信息，并能运用这些信息，结合所学知识解决相关的生物学问题的能力。18若将某种细菌置于有营养的物体上，它会繁殖并形成细胞群。有什么适当的实验可以用来检验两种抗生素的杀菌效用？（ ）【答案】c【解析】试题分析：要证明某抗生素有无杀菌作用，必须让抗生素与细菌一起培养。若抗生素确有杀菌作用，则细菌不能形成菌落。利用对比性原则，才能检验有抗生素和无抗生素的情况下细菌的生长状况。c正确。考点：本题考查微生物培养及利用的知识。意在考查能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系，能用文字、图表以及数学方式等多种表达形式准确地描述生物学方面的内容。的能力。19细菌在14n培养基中繁殖数代后，使细菌dna的含氮碱基皆含有14n，然后再移入15n培养基中培养，抽取其子代的dna经高速离心分离，下图为可能的结果，下列叙述中不正确的是（ ）a. 第二次分裂的子代dna应为 b. 第三次分裂的子代dna应为c. 第一次分裂的子代dna应为 d. 亲代的dna应为【答案】a【解析】试题分析：dna复制是半保留复制，转移到15n培养基中复制一次的话应是每个dna都是处于中带，故c正确。如果复制两次应有中带和重带，比例是1:1，应是，故a错误。第三次分裂的子代也是应有重带和中带，此时重带比例较大，应是，故b正确。亲代的dna应是轻带，应是，故d正确。考点：本题考查dna复制相关知识，意在考察考生对知识点的理解和对图形分析。20酵母菌是一种工业发酵常用的工程菌，某制药厂引入转基因的酵母菌后对其生长情况进行分析，下表表示在一固定容积及培养基的发酵罐内培养该酵母菌，并定时取样测定菌体数量（万个/ml）所得的结果，下列叙述正确的是（ ）取样（阶段）abcdefgh菌体数量（万个/ml）3260121334762821819824a在接种前如需要扩大培养可采用调低培养基碳源和氮源比值的方法bae阶段，酵母菌进行二分裂并以等比数列的形式增加c采用ae阶段的细菌作菌种可以缩短生产周期，采用连续培养法可以延长fh阶段df h阶段积累的产物都是次级代谢产物，在h阶段后有些细胞解体并释放代谢产物，如需要酵母菌的单细胞蛋白可利用过滤和沉淀的方法来分离提纯【答案】c【解析】21微生物培养过程中，肉眼鉴别金黄色葡萄球菌和枯草杆菌的重要依据是（ ）a. 细菌的大小、形状、颜色 b. 菌落的大小、形状、颜色c. 有无鞭毛 d. 培养基的不同【答案】b【解析】试题分析：肉眼观察不到细菌的大小、形状、颜色，a错误；鉴别金黄色葡萄球菌和枯草杆菌的重要依据是菌落形态，如菌落的大小、形态、颜色，b正确；肉眼无法观察到细菌的鞭毛，c错误；培养基不同不是鉴别金黄色葡萄球菌和枯草杆菌的重要依据，d错误。考点：微生物的实验室培养、细菌的鉴定【名师点睛】本题关键在于抓住题干的“肉眼”一词，要求学生明确肉眼无法观察到细菌的特征，只能观察菌落的特征。22对两种不同营养缺陷型大肠杆菌进行如下图所示的培养：下列对“基本培养基中只涂布菌株a或b，不出现菌落。”最恰当的解释是（ ）a细菌在基本培养基中吸收不到足够的营养 b细菌不能利用吸收到的营养合成某些必需的物质c基本培养基所含营养物质不全面，不能满足细菌生长的需要d基本培养基成分与完全培养基比较，成分差异太大，细菌不能适应【答案】b【解析】23通常用来作为菌种鉴定的重要依据是a. 细菌形态 b. 菌落 c. 细菌大小 d. 细菌结构【答案】b【解析】试题分析：根据不同的菌落的形状、大小和颜色、即凹凸情况不同，通常将菌落的形状、大小、颜色等特征作为鉴定菌种的依据，综上所述，b正确。点睛：了解菌落的相关知识：（1）菌落是指一个细菌或真菌在适宜的培养基上繁殖后形成的肉眼可见的集合体（细菌或真菌集团）。（2）细菌的菌落特征：菌落较小，形状：表面或光滑黏稠，或粗糙干燥，易挑起，多为白色；（3）真菌的菌落特征：菌落较大，比细菌菌落大几倍到几十倍、形状：菌丝细长，菌落疏松，呈绒毛状、蜘蛛网状、棉絮状，无固定大小，多有光泽，不易挑，有时还呈现红色、褐色、绿色、黑色、黄色等颜色（孢子的颜色）。24在做分离分解尿素的细菌实验时，a同学从对应106培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落下列有关叙述，出现科学性错误的是（ ）a. 甲同学出现这种结果的原因可能是由于土样不同，也可能是操作过程出了问题b. 可以将甲同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养作为空白对照，以证明培养基是否受到污染c. 将其他同学用与甲同学一样的土壤进行实验，如果结果与甲同学一致，则可以证明甲同学无误d. b、c选项的实验思路都遵循了实验的对照原则【答案】d【解析】试题分析：阅读题干可知，本题是对实验的分析与评价，先结合题意分析出实验结果出现较大差异的可能原因，然后根据选项描述分析判断解：a、甲同学获得的菌落远大于其他同学，可能是由于所取的土样不同，也可能操作过程被污染；a正确b、污染可能是培养基灭菌不彻底，或操作过程没有保证无菌操作，将甲同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养作为空白对照，以证明培养基是否受到污染；b正确c、若是土样不同造成的，让其他同学用与甲同学一样的土壤进行实验，如果结果与甲同学一致，则可以证明甲同学操作正确；c正确d、b选项的实验思路都遵循了实验的对照原则，c选项的实验思路都遵循了实验的重复性原则；d错误故应选d点评：本题的知识点是对实验过程可能出现的错误操作的分析及验证，主要考查学生分析错因并设计实验验证错因、进行纠正的能力25能够测定样品活菌数的方法是()a. 稀释涂布平板法 b. 直接计数法c. 平板划线法 d. 比浊法【答案】a【解析】稀释涂布平板法能推测出样品中大约含有多少活菌，a正确；直接计数法不能区分死菌与活菌，b错误；平板划线法不能对微生物进行计数，c错误；比浊法不能对微生物进行计数，d错误。26下图为“土壤中分解尿素的细菌的分离和计数”实验中样品稀释示意图。据图分析正确的是a. 3号试管的稀释倍数为103倍b. 4号试管中稀释液进行平板培养得到的菌落平均数可能为5号试管的10倍c. 5号试管的结果表明每克土壤中的菌株数为1.7109个d. 该实验方法统计得到的结果往往会比实际活菌数目要高【答案】b【解析】3号试管中样品液的稀释倍数为104倍，a错误；4号中稀释液进行平板培养，稀释倍数比5号的低10倍，如果稀释倍数适当，得到的菌落平均数可能是5号的10倍，b错误；5号试管进行稀释涂布平板法计数的结果表明每克土壤中的菌株数为（168+175+167）310106=17109（个），c正确；稀释涂布平板得到的菌落可能存在两个或多个细菌细胞长成一个菌落，使该实验方法统计得到的结果往往会比实际活菌数目要低，d错误。27微生物的接种技术最常用的有（ ）平板划线法 稀释涂布平板法 斜面接种 穿刺接种a. b. c. d.【答案】b【解析】试题分析：稀微生物接种常用的方法有稀释混合倒平板法、稀释涂布平板法、平板划线分离法等，这两种方法不需要特殊的仪器设，分离纯化效果好。考点：考查菌种接种技术，意在考查学生能运用所学知识与观点，通过比较、分析与综合等方法对某些生物学问题进行解释、推理，做出合理的判断或得出正确的结论。28下图是从葡萄果实上获取酵母菌菌种的简要操作步骤。在下列相关叙述中不正确的是（ ）a. 图中接种的方法有平板划线法和稀释涂布平板法b. 图中、步骤都必须确保是无菌操作c. 图中选择培养基为固体，而扩大培养的培养基为液体d. 扩大培养酵母菌过程中为加快酵母菌繁殖需要通入空气【答案】d【解析】微生物培养中常用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法，a项正确；微生物培养过程必须保证无菌操作以防止杂菌污染，b项正确；在进行酵母菌筛选时用ms固体培养基，而进行扩大培养时用的是液体培养基，c项正确；酵母菌为兼性厌氧菌，所以在扩大培养酵母菌过程中为加快酵母菌繁殖需要通入无菌空气，否则会造成杂菌污染，d项错误。29用稀释涂抹平板法来统计样品中活菌的数目，其结果与实际值相比（ ）a. 比实际值高b. 比实际值低c. 和实际值一致d. 可能比实际值高，也可能比实际值低【答案】b【解析】试题分析：用稀释涂布平板法对样品中活菌数目进行统计，只是一种估测，根据此方法的实验过程可知，在某一稀释度下涂布的平板菌体数具有一定的偶然性，并不是绝对均匀的，所以取若干个平板菌落数量的平均值比较接近样品中菌体数的真实值用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目有可能几个细菌同时在一起，当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，而样品稀释度无论多高都很难使其中的细菌都单个分布于培养基上，故计数结果比实际值低故选：b30关于制备ms固体培养基的过程,正确的是（ ）a将花药培养成单倍体幼苗的过程中无需添加有机碳源b配制母液时,无机物中大量元素浓缩100倍,微量元素浓缩10倍c在使用提前配制的母液时,可直接用移液管从母液中获取d培养基中细胞分裂素和生长素比值高时可促进芽的分化【答案】d【解析】植物组织培养时，外植体细胞不能自己制造有机物，只能从培养基中摄取现成的有机物维持生活，所以将花药培养成单倍体幼苗的过程中需要添加有机碳源，a项错误；配制母液时,无机物中大量元素浓缩10倍，微量元素浓缩100倍，b项错误；在使用提前配制的母液时，应在量取各种母液之前轻轻摇动盛放的瓶子，如发现瓶中有沉淀、悬浮物或被微生物污染，应立即淘汰，重新配制，c项错误；细胞分裂素有利于芽的分化，而生长素则促进根的分化，所以培养基中细胞分裂素和生长素比值高时可促进芽的分化，d项正确。【考点定位】植物的组织培养【名师点睛】植物组织培养过程中生长素和细胞分裂素发挥重要作用，两种植物激素的使用顺序及用量比例会对细胞分裂和分化产生影响。（1）使用先后顺序与细胞分裂和分化的关系使用顺序实验结果先生长素，后分裂素有利于分裂但不分化先分裂素，后生长素细胞既分裂也分化同时使用分化频率提高（2）用量比例与根、芽的分化生长素和细胞分裂素比值结果比值高时促进根的分化，抑制芽的形成比值低时促进芽的分化，抑制根的形成比值适中促进愈伤组织的生长二、非选择题31艾滋病是由人类免疫缺陷病毒（hiv）引起的获得性免疫缺陷综合症，下图是该病毒的结构模式图。（1）图中标号1是 。（2）hiv在非寄生时，不能进行 活动，而感染人体后，主要侵染 细胞。（3）hiv的感染和繁殖过程大致可分为吸附、侵入、复制、 和释放。在侵入的过程中，进入寄主细胞的是 。（4）下列能正确表示病毒在寄主内的繁殖曲线的是（ ）（5）hiv经反复感染寄主细胞，最终将导致 功能减弱以至丧失。此时患者如被细菌感染，易出现并发症。从结构上说，hiv属于 生物，细菌属于 生物。常用于治疗细菌感染的药物如 等，对杀灭hiv无效。（6）试举两例说明艾滋病的主要传播途径。【答案】（1）衣壳蛋白 （2）独立的代谢 t淋巴（3）组装 rna （4）b （5）免疫 非细胞结构 原核 抗生素 （6）血液传播如不洁输血等；体液传播如随意性行为等【解析】hiv呈袋状球形，是单链rna病毒，外有衣壳蛋白。hiv由皮肤破口或黏膜进入人体血液，主要攻击和破坏t淋巴细胞，使t淋巴细胞失去原有的正常免疫功能。已经证实的艾滋病传播途径主要是通过性传播和血液传播。性接触传播：包括同性及异性之间的性接触；血液传播包括：输入 污染了hiv的血液或血液制品；使用受hiv污染的、未消毒的针头及注射器；共用其他医疗器械或生活用具（如与感染者共用牙刷、剃须刀）也可能经破损处传染；注射器和针头消毒不彻底或不消毒等。32海洋中的发光细菌具独特的生理特性，可作为环境监测的指标生物。i.（1）使用 法（答二种），可在固体培养基上获得单菌落，纯化发光菌株。（2）细菌这类微生物在基因工程中有重要应用，试列举其中一项。ii现利用发光细菌对海水重金属污染程度进行生物毒性监测，请完善下列实验设计并回答问题：实验原理：细菌代谢正常时，发光强度稳定；当重金属影响到其代谢时，发光会受到抑制，抑制程度用抑光率（发光被抑制的百分率）表示。实验材料：发光菌悬液、可能受重金属污染的待测海水水样、3%nacl溶液、荧光分光光度计（用于测定细菌发光强度）、试管等。（1）实验步骤：按下表配制待测海水样品稀释液。组 别123453%nacl溶（ml）4.744.494.243.99海水样品（ml）0.250.500.751.00发光菌悬液（ml）0.010.010.010.01混合液中海水浓度（%）0.050.100.150.20请完善实验步骤：1号试管中应加入：3nacl溶液、海水样品、发光菌悬液分别为 ml（3分）。各试管静置15min后， 。（2）计算相对抑光率：按照公式t= 计算各组相对抑光率。（3）如果测得上述各组相对抑光率如下：组别12345相对抑光率（%）06131723请绘制海水浓度对相对抑光率影响的曲线（3分）。根据结果可以判断待测海水样品 。【答案】i.（1）平板划线法、稀释涂布平板法； （2）提供工具酶、提供目的基因、提供目的基因的载体、作为受体细胞、提供用于发酵的工程菌（答对其中一项即可）。ii.（1）4.99、0、0.01（每项1分，共3分）利用荧光分光光度计测定各试管发光强度（2）（对照组发光强度实验组发光强度）/对照组发光强度100%（3）下图（3分）；受到重金属污染【解析】试题分析：i.要在培养基中看到菌落，所以应是固定培养基，固体培养基的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法； 细菌在基因工程中可以提供工具酶、提供目的基因、提供目的基因的载体、作为受体细胞、提供用于发酵的工程菌等；ii.由2345组可知3nacl溶液、海水样品、发光菌悬液加在一起是10ml，海水样品一每组0.25递增，发光菌悬液0.01ml不变，所以1号试管中应加入：3nacl溶液、海水样品、发光菌悬液分别为4.99 ml、0 ml、0.01ml；一段时间后利用荧光分光光度计测定各试管发光强度，计算其相对抑光率。1组没有加入海水样品，则其为空白对照，抑光率=（对照组发光强度实验组发光强度）/对照组发光强度100%，通过计算抑光率绘制曲线，发现当混合液中海水浓度为1时计算，抑光率是120%，则为重度污染。考点：本题考查了微生物的培养、实验探究的相关知识，意在考查考生能理解所学知识的要点，具有对一些生物学问题进行初步探究、并能对实验现象和结果进行解释、分析和处理的能力。33孔雀石绿(c23h25n2cl)常用作纺织业的染料，也可用作水产养殖业的杀菌驱虫剂。但它具有高毒性、高残留的危害，因此对孔雀石绿废水的处理已成为环境科学领域关注的热点。科研人员从某化工厂污水池中分离获得了能降解孔雀石绿的细菌菌株a。主要步骤如图所示。请分析并回答：（1）从到的培养过程中培养液应加入 作为唯一碳源，此过程的目的是 和 。（2）使用 法可以在上获得单个菌落。试验中使用的培养基可以用 灭菌法进行灭菌。（3）从某化工厂污水池中分离获得了能降解孔雀石绿的细菌菌株a，从生物进化的角度分析，这是 的结果。菌株a在生态系统成分中属于 。（4）研究人员进一步研究了不同金属离子对菌株a降解孔雀石绿的影响，实验结果如下图。由上述结果可以看出，与不加金属离子的对照组相比，多数金属离子对菌株a降解孔雀石绿有 作用，唯有pb2+的作用相反。若要排除pb2+本身对孔雀石绿有降解作用，则应设置 的培养基样本作为对照。【答案】（1）孔雀石绿 筛选出菌株a （1分） 增加菌株a的浓度（扩大培养）（1分）（2）稀释涂布平板（或平板划线） 高压蒸汽（3）自然选择 分解者（4）抑制 含等量的pb2+但不接种菌株a【解析】试题分析：（1）从污水池中要想分离获得能降解孔雀石绿的细菌菌株a，采用的培养基只能以孔雀石绿作为唯一的碳源，并且要采用多次稀释培养，来获取高浓度的菌株。(2) 培养基制备好后常用高压蒸汽灭菌法进行灭菌；微生物分离、纯化常用的方法：稀释涂布平板法， 平板划线法。（3）经过分离所获得的菌株a，从生物进化的角度来分析，这是自然选择的结果，适者生存，不适者被淘汰；在生态系统成分中属于分解者。（4）由柱状图显示的结果可知，pb2+对菌株a降解孔雀石绿有促进作用外，多数金属离子有抑制作用，但是pb2+本身对孔雀石绿是否有降解作用，需要设置一组实验来排除，即设置含等量的pb2+但不接种菌株a的培养基样本作为对照组，来测得菌株a的降解率，进行对比。考点：本题考查微生物的培养、生物进化和生态系统的相关知识，意在考查考生理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力。34生物技术实践：酵母菌等微生物在人类的日常生活中发挥着越来越大的作用，如面包、馒头等食品以及果汁、果酒等饮料的作用都离不开酵母菌，请根据所学知识回答下列问题：（1）土壤中富含各种微生物，将土壤浸出液接种到 培养基上可得到酵母菌，这一步骤叫做 。（2）在平板培养基上接种酵母菌使用的方法是 ，培养基中的葡萄糖所起的作用是 。（3）在果酒酿造过程中，如果果汁灭菌不严格，含有醋酸杆菌，在酒精发酵旺盛进，醋酸杆菌能否将果汁中的糖发酵为醋酸？请说明理由。 。（4）食品加工中为了让酵母菌发挥应有的作用，又能使之很好的与产物分离以提高产品的质量，应该采用 技术；因细胞比酶分子大，所以该技术中多采用 法。【答案】（1）选择 （酵母菌的）分离 （2）平板划线（稀释涂布平板法或稀释混合平板法） 提供碳源 （3）不能，因为醋酸杆菌是好氧型细菌，而果酒发酵旺盛时是无氧环境（2分）（4）固定化细胞 包埋【解析】35某实验小组欲从豆油污染的土壤中筛选出高效降解脂肪的菌株。请回答：（1）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以 为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于 培养基。（2）为避免培养基污染，需将培养皿呈 状态放置。为避免培养液中菌体浓度过高，需将培养液进行 处理。为了排除 ，需设置接种等量无菌水的培养基作为空白对照。（3）为了筛选出菌株，可将适量的 试剂滴加在平板中的菌落周围，洗去浮色后，如果菌落周围的现象是 ，则说明此种菌能够分泌脂肪酶。（4）纯化菌种时，为了得到菌落，可采用 法接种于新的培养基平板上。（5）试验操作应在酒精灯火焰附近进行的原因是 。【答案】（1）豆油 选择（2）倒置 梯度稀释 实验组中非测试因素对实验结果的影响（培养基被污染）（3）苏丹（或苏丹） 出现透明圈（不出现橘黄色圈或红色圈）（4）平板划线（5）避免周围环境中微生物的污染【解析】（1）由题意可知，欲从豆油污染的土壤中筛选出能高效降解脂肪的菌株，所以应将土壤样品稀释液接种于以豆油为唯一碳源的固体培养基上；从功能上讲，该培养基属于选择培养基。（2）为避免培养皿污染，需将培养皿呈倒置状态放置；为避免培养液中菌体浓度过高，需将培养液进行系列稀释（或“梯度稀释”） 处理；设置接种等量无菌水的培养基作为空白对照，其目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响（培养基被污染），提高实验结果的可信度。（3）脂肪可以被苏丹染液染成橘黄色（或被苏丹染液染成红色）。而能高效降解脂肪的菌株所分泌的脂肪酶能够催化脂肪水解，在培养基中的该菌落的周围就会出现透明圈。因此，为了筛选出能高效降解脂肪的菌株，可将适量的苏丹（或“苏丹”）试剂滴加在平板中的菌落周围，洗去浮色后，如果菌落周围出现透明圈（不出现红色圈或橘黄色圈），则说明此种菌能够分泌脂肪酶。（4）在固体培养基上纯化菌种时，为了得到单菌落，可采用平板划线法。（5）试验操作应在酒精灯火焰附近进行的原因是避免周围环境中微生物的污染。【考点定位】微生物的分离和培养、培养基对微生物的选择利用36【加试题】回答下列（一）、（二）小题：（一）炭疽杆菌能引起人畜患炭疽病。对炭疽病疑似患者，可通过甲图所示鉴定炭疽杆菌的实验进行确诊，其中实验组中的噬菌体能特异性地侵染炭疽杆菌。（1）若要从炭疽病疑似患者体内分离出炭疽杆菌，可将患者皮肤脓胞渗出物稀释后滴于培养基表面，用无菌玻璃刮刀涂匀，该接种方法称为_。乙图所示的四种菌落分布图中，该接种方法不能得到的是_。（2）制备甲图中的液体培养基时需采取_法灭菌。接种可疑菌后，需将三角瓶置于35下的摇床上_培养24小时，可疑菌会大量繁殖，液体培养基变浑浊。（3）甲图中，对照组与实验组试管同时培养6小时后，若实验组液体培养基的浑浊度比对照组_（高/低），则可明确疑似患者被炭疽杆菌感染；反之则排除。此判断的依据是_。（二）印度沙漠猫是一种珍稀猫科动物，通过胚胎工程技术，可以让家猫代孕而繁育，主要步骤如下图所示。（1）步骤甲、乙分别是指 _、_。（2）卵巢经超数排卵处理后，要使用超声监视器确定_的位置，插入穿刺针吸取其液体，取出_，在体外进行人工培养得到成熟的卵细胞。（3）若在早期细胞培养过程中，发现某个细胞出现变异性状，科研人员提取这个细胞进行单独培养，此种培养方法称为_。培养过程中,下列哪种细胞比较难以克隆？_ a.有限细胞系 b.无限细胞系 c.转化细胞系 d.肿瘤细胞系【答案】 涂布分离法 d 高压蒸汽灭菌 震荡 低 噬菌体侵染炭疽杆菌，炭疽杆菌数量下降 体外受精或受精作用 胚胎移植 卵泡 卵母细胞（或次级卵母细胞） 克隆培养法或细胞克隆 a【解析】分析题图：(一）微生物实验室分离中配制培养基的操作步骤：计算称量溶解调ph灭菌步骤；(二）步骤甲为受精作用，步骤乙为胚胎移植，其中诱导超数排卵用的是促性腺激素，受精过程使用的培养液是获能溶液或专用受精溶液，早期胚胎培养的培养液成分，除了一些无机盐和有机盐类外，还需添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸以及血清等。(一）(1)稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分布涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养由图中四种菌落分布情况可知，a、b和c是采用稀释涂布平板法得到的，而d是采用平板划线法得到的。(2) 制备图1中的液体培养基时应该用高压蒸汽灭菌 法进行灭菌，以杀死微生物及芽孢接种可疑菌后，35培养24小时，细菌大量繁殖，液体培养基变浑浊。(3) 对照组试管中应加入等量生理盐水，与实验组同时培养6小时后，若实验组液体培养基的浑浊度比对照组低，则可明确疑似患者被炭疽杆菌感染；反之则排除。此实验依据的原理是实验组中的噬菌体能特异性地侵染炭疽杆菌，使细菌死亡，溶液变澄清。(二）(1) 步骤甲为受精作用，步骤乙为胚胎移植；(2) 卵巢经超数排卵处理后，要使用超声监视器确定卵泡的位置，插入穿刺针吸取其液体，取出卵母细胞（或次级卵母细胞）。(3) 提取这个细胞进行单独培养，此种培养方法称为克隆培养法或细胞克隆。有限细胞系由于增殖能力有限（10-50代），转化细胞具有较强的适应能力，容易克隆。37微生物强化采油（meor）是利用某些微生物能降解石油，增大石油的乳化度，降低石油粘度的原理，通过向油井中注入含微生物的水来提高采油率的新技术。以下是人们筛选、纯化和扩大培养该类微生物的实验操作。请分析回答：(1)土壤有_之称，该类微生物应取自_的土壤。(2)用于筛选和纯化该类微生物的培养基从功能上讲属于_培养基。对培养基进行灭菌，常用的方法是_。(3)接种后，必须密封培养，其原因是_。培养一段时间后，在培养基上形成降油圈，此时选取降油圈_的菌落作为高效菌株。(4)扩大培养过程中需要对微生物进行计数，取0.2ml样品，用固体培养基对其培养，最后统计三个平板，菌落数分别是200、180、220，则样品中微生物的数量为_个/ml。该统计结果_（低于/高于）实际值。【答案】 微生物的天然培养基 长期被石油污染（含石油多的） 选择 高压蒸汽灭菌法 该类微生物是厌氧型微生物 最大 1000 低于【解析】试题分析：熟记并理解微生物的实验室培养、微生物的分离与计数的相关知识、形成清晰的知识网络。在此基础上从题意中提取信息并结合题意作答。(1) 土壤有“微生物的天然培养基”之称。筛选能降解石油的目的菌，应取自长期被石油污染（含石油多的）的土壤。(2) 配制以石油为唯一碳源的培养基，用以筛选出能降解石油的菌株，则此培养基从功能上看为选择培养基。常采用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌。(3) 接种后，必须密封培养的原因是：该类微生物是厌氧型微生物。目的菌分解石油时会在培养基上形成降油圈，所以应选择降油圈大的菌落作为高效菌株。(4)取0.2ml样品，用固体培养基对其培养，最后统计三个平板，菌落数分别是200、180、220，则样品中微生物的数量为(200180220)3 0.21000个/ml。培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌，当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，因此用此计数方法统计的结果往往低于实际值。 38、分析有关遗传病的资料，回答问题。图1为某家族两种遗传病的系谱图，这两种单基因遗传病分别由位于常染色体上的基因a/a及性染色体上的基因b/b控制。-14的x染色体来自于第代中的 。甲病的遗传类型为 。若-14与一个和图2中-15基因型完全相同的女子结婚，他们的后代患甲病的概率是 。假定-11与-15结婚,若a卵与e精子受精,发育出的-16患两种病,其基因型是 。若a卵与b精子受精,则发育出-17的基因型是 ,表现型是 。若-17与一个双亲正常,但兄弟姐妹中有甲病患者的正常人结婚,其后代不患病的概率是 。采取 措施,可估计遗传病的再发风险率并提出预防措施。.水华可因蓝藻爆发所致。科研人员尝试利用某种细菌限制蓝藻数量，相关实验的示意图如下。图中表示实验步骤. 请回答：蓝藻的新陈代谢类型通常是 。引发水华的蓝藻可产生蓝藻毒素，蓝藻毒素 （是、不是）蓝藻生长、繁殖所