中图版选修一 测定微生物的数量 作业 (2).docx

测定微生物的数量一、单选题1用稀释涂布平板法来统计样品中尿素分解菌的数目，为了提高实验结果的可信度，往往要设置对照实验，对于对照组的要求不包括以下哪项a. 对照组培养基也要严格灭菌，且不接种任何微生物b. 对照组和实验组培养基放在相同条件下培养c. 所用培养基成分及ph大小完全与实验组一致d. 在对微生物进行培养前，需要对菌液和培养基进行灭菌【答案】d【解析】对照组培养基也要严格灭菌，且不接种任何微生物，为空白对照，a正确；对照组和实验组的培养基都要置于相同条件下培养，以保证单一变量，b正确；对照组所用培养基的成分及ph应与实验组完全一致，c正确；在对微生物进行培养前，需要对培养基进行灭菌，不能对微生物进行灭菌，d错误。2下列关于微生物实验室培养的叙述，错误的是a. 平板划线法是在培养基上连续划线以纯化菌种的接种方法b. 培养霉菌时需将培养基的ph调至中性或微碱性c. 培养硝化细菌可不用在培养基中加有机碳源d. 培养乳酸菌时需要提供无氧条件【答案】b【解析】平板划线法是茬培养基上连续划线以纯化菌种的接种方法，a项正确；培养霉菌时需将培养基的ph调至酸性，b项错误；硝化细菌为自养菌，培养可不用在培养基中加有机碳源，c项正确；乳酸菌为厌氧菌，培养时需要提供无氧条件，d项正确。3下图是研究人员从红棕壤中筛选高效分解尿素细菌的过程示意图，有关叙述错误的是a. 在配制步骤、的培养基时，应先调ph值后髙压蒸汽灭菌b. 步骤纯化分解尿素的原理是将聚集的细菌分散，可以获得单细胞菌落c. 步骤采用涂布平板法接种，并需向牛肉膏蛋白胨培养基中加入尿素d. 步骤挑取中不同种的菌落分别接种，比较细菌分解尿素的能力【答案】c【解析】配制培养基时，应先调ph值后髙压蒸汽灭菌，a项正确；步骤纯化分解尿素的原理是将聚集的细菌通过涂布平板法分散，获得单细胞菌落，b项正确；步骤筛选分解尿素的细菌，培养基中应以尿素为唯一氮源，c项错误；步骤挑取中不同种的菌落分别接种，比较细菌分解尿素的能力，d项正确。4南洋东华公司研发了两种石油降解产品bdb-n生物降解菌（厌氧型）和bdb-a生物降解菌（好氧型），降解菌是通过产生酶对石油进行分解的。如图为不同条件下，某种降解菌对某湖泊污泥中石油分解能力的测定结果。下列有关分析错误的是a. 该实验的自变量为ph和污泥含水量b. 该实验的检测指标是2天后污泥中的石油含量c. 该实验中使用的降解菌最可能是bdb-a生物降解菌d. 在不同污泥含水量条件下，降解菌体内酶的最适ph相同【答案】c【解析】分析图解可知，该实验的自变量是ph和污泥含水量，因变量是2天后石油含量，ab正确；根据图中的实验数据分析可知，当污泥含水量6080%、ph=7时，石油含量最少，说明石油降解酶分解能力最强的条件为污泥含水量6080%、ph=7，则该实验用的应该是厌氧菌，即bdb-n生物降解菌，c错误；根据三条曲线的最低点可以判断，在不同污泥含水量条件下，降解菌体内酶的最适ph相同，d正确。【点睛】解答本题的关键是分析曲线图，找出实验的自变量和因变量，判断最适宜的ph和污泥含水量，进而判断出分解菌的类型。 5牛或山羊的瘤胃中生活着多种微生物若想从瘤胃中分离出能够分解尿素的微生物，下列哪一项操作会导致达不到实验目的 （）a. 以尿素为唯一氮源 b. 以葡萄糖作为碳源c. 将培养基调至酸性 d. 培养环境有充足o2【答案】d【解析】分离出能够分解尿素的微生物，必须制备以尿素为唯一氮源的选择培养基，a正确；培养基中可以以葡萄糖作为碳源，b正确；牛或山羊的瘤胃内为酸性环境，所以需要将培养基调至酸性，c正确；牛或山羊的瘤胃中是一个相对缺氧的环境，所以筛选分离牛或山羊的瘤胃能够分解尿素的微生物需要保证在缺氧条件下培养，d错误。6（2010桂林二模）下列有关叙述与细菌生长曲线相符的是（ ）a.细菌只有接种于固体培养基上，才能表现出图示生长曲线b.图中1时期大量合成酶、atp及其他细胞成分c.图中3时期的细菌不再进行增殖d.图中4时期是获取次级代谢产物的最佳时期【答案】b【解析】试题分析：将生长曲线粗分为4个时期：调整期、对数期、稳定期、衰亡期（1）调整期：刚刚接种到培养液中的细菌，由于新旧环境差异，在细菌的细胞内就要重新合成相应的诱导酶，以适应新环境（2）对数期：一方面，调整期为细胞分裂做了充分准备另一方面，营养物质丰富，空间宽裕，ph、温度、o2均适宜，即细胞处于无任何环境阻力的理想条件下；微生物个体间无种内竞争，种群年龄组成为增长型，绝大多数细菌细胞内合成代谢远远大于分解代谢因此出生率远远大于死亡率，导致种群密度上升，出现“j型生长曲线”（3）稳定期：随着种群密度增大，营养物的耗尽、有害代谢产物的积累、ph变化，进而使种群进入稳定期，在稳定期，环境阻力明显加大，年龄组成为稳定型，合成代谢=分解代谢，出生率=死亡率，微生物数目达到最高，整个生长曲线呈“s”型（4）衰亡期：营养物质过度消耗，有害代谢产物大量积累、ph剧烈变化，外界环境对继续生长越来越不利，阻力进一步加大，种内竞争剧烈，出生率远远小于死亡率、呈负生长、种群密度显著下降此阶段生长曲线迅速下降解：a、细菌无论接种于固体培养基上还是液体培养基，均能表现出图示生长曲线，a错误；b、刚刚接种到培养液中的细菌，由于新旧环境差异，在细菌的细胞内就要重新合成相应的诱导酶和atp及其他细胞成分，以适应新环境，b正确；c、进入稳定期后，由于环境条件的改变，繁殖率=死亡率，既有新细胞产生，也有细胞的死亡，活菌数达到最大值，c错误；d、获取次级代谢产物的最佳时期是3稳定期，d错误故选：b点评：本题考查的是微生物生长曲线的有关内容，意在考查学生对微生物代谢知识的掌握情况，以及对相关问题的分析能力7下列操作不属于微生物的分离步骤的是()a. 稀释 b. 划线或涂布 c. 接斜面 d. 培养【答案】c【解析】分离微生物时，需要先对样品进行稀释，使进行分离的样品中微生物数量适宜。随后进行划线或涂布，将聚集的菌种逐步分散，从而最终在培养基表面获得单个的菌落。为了保持菌种的纯净，可以通过接斜面的方式进行保藏，故本题正确答案为c。8将从种植烟草的土壤里分离得到的尼古丁（c10h14n2）降解菌株sc接种到尼古丁培养基中，30摇床培养并定时取样，测定并计算发酵液中的尼古丁浓度和菌体浓度，得到的结果如图所示。下列分析不正确的是a. 分离sc时可用稀释涂布平板法或划线法b. 培养36h时sc的数量为该种群的环境容纳量c. 影响sc种群密度变化的主要因素是o2浓度和phd. 发酵液中的尼古丁为sc提供碳源和氮源【答案】c【解析】平板划线法和稀释涂布平板法均可分离和提纯细菌，a项正确；培养36h时，sc的数量达到最大值，为该种群的环境容纳量，b项正确；根据题意可知，尼古丁是sc的主要营养物质，为sc提供碳源和氮源，再结合曲线图可推知，影响sc种群密度变化的主要因素是培养基中尼古丁的含量，c项错误，d项正确。【点睛】两种纯化细菌的方法的比较项目优点缺点适用范围平板划线法可以观察菌落特征，对混合菌进行分离不能计数适用于好氧菌稀释涂布平板法可以计数，可以观察菌落特征吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延适用于厌氧菌和兼性厌氧菌9牛或山羊的瘤胃中生活着多种微生物，若想从瘤胃中分离出能够分解尿素的细菌，下列操作错误的是a. 以尿素为唯一氮源 b. 以葡萄糖作为碳源c. 将培养基调至酸性 d. 培养环境有充足02【答案】d【解析】制备以尿素为唯一氮源的选择培养基，a错误；培养基中可以以葡萄糖作为碳源，b正确；牛或山羊的瘤胃内为酸性环境，所以需要将培养基调至酸性，c正确；牛或山羊的瘤胃中是一个相对缺氧的环境，所以筛选分离牛或山羊的瘤胃能够分解尿素的微生物需要保证在缺氧条件下培养，d错误。10以下有关生物技术实践的叙述中，不正确的是a. 除活菌计数法外,显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法b. 在富含纤维素的环境中寻找纤维素分解菌，符合生物与环境相适应的生物学观点c. 在酿酒生产上，常向发酵罐中加少量尿素，其目的是作为氮源，用于酵母菌合成蛋白质和核酸d. 不能用稀释涂布平板法来测定土壤溶液中某活菌数目【答案】d【解析】本题考查培养基对微生物的筛选与微生物的分离计数，要求考生明确利用选择培养基可对微生物进行筛选，利用平板划线法或稀释涂布平板法可进行微生物分离，利用稀释涂布平板法可测定土壤溶液中某活菌数目。除活菌计数法外，显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法，a正确；在富含纤维素的环境中寻找纤维素分解菌，符合生物与环境相适应的生物学观点，b正确；在酿酒生产上，常向发酵罐中加少量尿素，其目的是作为氮源，用于酵母菌合成蛋白质和核酸，c正确；可用稀释涂布平板法来测定土壤溶液中某活菌数目，d错误。11关于微生物的培养,下列说法正确的是a. 培养基、手、接种环、工作台等都需要用适宜的方法灭菌处理b. 制备固体培养基的操作程序为计算、称量、溶化、灭菌、调ph、倒平板c. 平板划线法和稀释涂布平板法都可用于大肠杆菌的纯化培养d. 稀释涂布平板法统计的菌落数往往比实际活菌数多【答案】c【解析】培养基、接种环、工作台等都需要用适宜的方法灭菌处理，而手只能消毒，不能灭菌，a错误；制备固体培养基的操作程序为计算、称量、溶化、调ph、灭菌、倒平板，b错误；平板划线法和稀释涂布平板法都可用于大肠杆菌的纯化培养，其中或者还可以用于计数，c正确；由于菌落会重叠，所以稀释涂布平板法统计的菌落数往往比实际活菌数少，d错误。12在纤维素分解菌分离与鉴定实验中，用到的培养基按照物理状态分类分别为()a. 固体培养基、液体培养基 b. 固体培养基、固体培养基c. 液体培养基、液体培养基 d. 液体培养基、固体培养基【答案】d【解析】在纤维素分解菌分离与鉴定实验中，梯度稀释前进行选择培养的目的是增加纤维素分解菌的浓度，这一步一般选用液体培养基，筛选纤维素分解菌用了固体培养基，故d正确。13将大肠杆菌接种在彻底灭菌的培养基表面时，关于接种环划线的操作，下列叙述不正确的是a. 划线前灼烧接种环 b. 将最后一区的划线与第一区相连c. 每区划三至五条平行线 d. 不要划破培养基【答案】b【解析】平板划线法中，为了防止杂菌污染，划线前灼烧接种环，a正确；划线时不能将最后一区的划线与第一区相连，b错误；每区划三至五条平行线，c正确；划线时不要划破培养基，否则不能分离得到单菌落，d正确。14下列检测某熟制食品中大肠杆菌是否超标的实验操作，不合理的是a. 待检测食品需要经过灭菌操作后取样检测b. 应设置未接种的培养基，作为实验的对照c. 用稀释涂布平板法接种计数大肠杆菌的活菌数d. 接种后将培养皿倒置并在适宜温度下培养【答案】a【解析】待检测食品灭菌后会将大肠杆菌杀死，则不能检测大肠杆菌是否超标，a错误；应设置未接种的培养基，作为实验的对照，b正确；用稀释涂布平板法接种计数大肠杆菌的活菌数，c正确；接种后应该将培养皿倒置，并在适宜温度下培养，d正确。15下图依次表示倒平板、接种的位置,以及划线法接种等，其中不正确的是a. a b. b c. c d. d【答案】d【解析】试题分析：倒平板时，用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖，防止空气中的杂菌污染，故a正确；左手将培养皿打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，故b正确；五个区域内划线，而且每次转换划线角度后再进行划线，让菌种来源于上一次划线末端，故c正确；没有让接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，故d错误。点睛：解答本题的关键在于对平板划线法的理解，特别是除了第一次划线外，之后的每次划线前后都要灼烧接种环，并且要从上一次划线的末端开始划线，一定要注意细节。16下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中不正确的是a. 用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板b. 取102、103、104倍的土壤稀释液和无菌水各01ml，分别涂布于各组平板上c. 将实验组和对照组平板倒置，37恒温培养2448hd. 应该选择菌落数在30300的实验组平板进行计数【答案】b【解析】试题分析：检测土壤中细菌总数，应该进行计数，首先要进行培养基的制备，用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板，a正确；取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1ml，分别涂布于各组平板上，b错误；将实验组和对照组平板倒置，37恒温培养2448小时，c正确；确定对照组无菌后，选择菌落数在30300的进行记数，求其平均值，再通过计算得出土壤中细菌总数，d正确。点睛：统计菌落数目的方法：（1）显微镜直接计数法 原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量；方法：用计数板计数； 缺点：不能区分死菌与活菌；（2）间接计数法（活菌计数法）原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌；操作a、设置重复组，增强实验的说服力与准确性；b、为了保证结果准确，一般选择菌落数在30300的平板进行计数；计算公式：每克样品中的菌株数=（cv）m，其中c代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，v代表涂布平板时所用的稀释液的体积（ml），m代表稀释倍数。17（2014四川模拟）下列与实验相关的叙述，正确的是（ ）a.以洋葱鳞片叶内表皮为材料盐酸处理后经健那绿染色可观察到线粒体b.测土壤中细菌的总量和测土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围不同c.利用成熟的红细胞来制备纯净的细胞膜时应使用蒸馏水和甲苯d.用双缩脲试剂可以比较蛋白酶对蛋白质分解的催化能力大小【答案】b【解析】试题分析：阅读题干可知，本题是生物教材中相关实验材料的选择和实验方法，根据选项的具体涉及的内容回忆相关知识点，分析判断解：a、健那绿为活体染色剂，观察线粒体时需保持细胞活性，不能用盐酸处理，a错误；b、由于土壤中细菌的含量高，而分解尿素的细菌含量低，故测土壤中细菌的总量和测土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围不同，b正确；c、制备纯净的细胞膜时利用哺乳动物成熟的红细胞，使用蒸馏水，不用甲苯，c错误；d、双缩脲试剂用于蛋白质的检测，故不能用于比较蛋白酶对蛋白质分解的催化能力大小，因蛋白酶也是蛋白质，和双缩脲试剂发生反应，d错误故选：b点评：本题的知识点是微生物的实验室培养的基本操作技术、观察线粒体、细胞膜的制备和蛋白质的鉴定主要考查学生对基础知识点的记忆和实验操作能力，试题难度一般18焦化厂活性污泥中富含难降解的有机物苯甲酰肼,是当前焦化行业环保治理的难点。某同学通过查阅资料发现可通过微生物降解方法处理焦化厂污染物。下列有关分析错误的是（ ）a. 应该从农田土壤中筛选目的菌b. 配制以苯甲酰肼作为唯一碳源的选择培养基进行筛选c. 利用平板划线法可以对初步筛选出的目的菌进行纯化d. 逐步提高培养基中苯甲酰肼的浓度可以得到能高效降解污染物的优质菌株【答案】a【解析】能降解焦化厂污染物的细菌生物应生活在有焦化厂污染物的环境周围，故应从焦化厂活性污泥（焦化厂污染物）中筛选，a错误；培养基中应用苯甲酰肼为唯一的碳源，作为选择培养基，b正确；利用平板划线法可以对初步筛选出的目的菌进行纯化，c正确；若要选出高效降解污染物的优质菌株，可采用逐步提高苯甲酰肼浓度进行筛选，培养出的目的菌经稀释涂布分离后得到单一菌落为纯化的细菌，d正确。19在分解尿素菌的分离和鉴定中，对先后用到的两种培养基，叙述正确的是（ ）a. 加入酚红指示剂作为选择培养基，再加入唯一碳源作为鉴别培养基b. 加入唯一氮源作为选择培养基，再加入酚红指示剂作为鉴别培养基c. 加入唯一氮源作为鉴别培养基，再加入酚红指示剂作为选择培养基d. 加入唯一碳源作为选择培养基，再加入酚红指示剂作为鉴别培养基【答案】b【解析】在分解尿素菌的分离和鉴定中，应该先加入尿素作为分解尿素菌的唯一氮源，分解尿素菌合成的脲酶，能分解尿素，产生氨，氨呈碱性；然后加入酚红指示剂培养细菌，指示剂将变为红色。20在做分离分解尿素的细菌实验时，a同学从对应106培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。a同学的结果产生原因不可能有()a. 由于土样不同 b. 由于培养基污染c. 由于操作失误 d. 没有设置对照【答案】d【解析】根据生物实验应遵循对照原则、等量原则、单一变量原则和控制无关变量原则分析，已知a同学的实验结果可能是培养基污染造成的，还可能是a同学实验操作过程中污染造成的，也可能是与其他同学所取土壤样品不同造成的，关键是设法排除影响结果的因素，所以实验应该设计对照组，但是实验结果的出现并不是没有设置对照组导致的。所以d选项是正确的21产生标准形态菌落的细菌的最初数目和培养基分别是（ ）a. 一个细菌、液体培养基 b. 许多细菌、液体培养基c. 一个细菌、固体培养基 d. 许多细菌、固体培养基【答案】c【解析】菌落是一个细菌的子细胞群体，在固体培养基上，有一定的形态结构，肉眼可见（液体培养基中肉眼不可见），菌落可作为菌种鉴别的重要依据。22下列生物学实验操作，能够顺利达到实验目的的是（ ）a. 在固体培养基上涂布稀释的大肠杆菌培养液获得单菌落b. 在接种酵母菌的新鲜葡萄汁中通入无菌空气制作果酒c. 土壤浸出液接种于牛肉膏蛋白胨培养基上筛选分解尿素的细菌d. 在分离土壤中的尿素分解菌实验中，采集的土样经高温灭菌后，可以用于制取土壤稀释液【答案】a【解析】在固体培养基上涂布稀释后的菌液能够得到单个菌落，a正确；在接种酵母菌的新鲜葡萄汁中通入无菌空气，有利于酵母菌进行有氧呼吸大量繁殖，不利于制作果酒，b错误；牛肉膏蛋白胨培养基不能筛选出分解尿素的细菌，应在以尿素为唯一氮源的培养基上筛选尿素分解菌，c错误；在分离土壤中的尿素分解菌实验中，采集的土样经高温灭菌后，土样中的微生物全部被杀死，不能用于制取土壤稀释液，d错误。23若某一稀释度下，平板上生长的平均菌落数为80，涂布平板时所用的稀释液体积为0.1 ml，稀释液的稀释倍数为106，则每克样品中的活菌数约为()a. 8108 b. 8107 c. 8105 d. 8106【答案】a【解析】根据每克样品中的菌株数=（cv）m，1克土样中的菌株数=（800.1）106=8108个，所以a选项是正确的。24筛选出纤维素分解菌后还需要用下列哪一实验来确定()a. 发酵产纤维素酶 b. 发酵产生纤维素c. 纤维素酶分解滤纸 d. 纤维素分解产生葡萄糖【答案】a【解析】纤维素分解菌因能产生纤维素酶，所以具有分解纤维素能力。因此筛选出该菌后还需通过发酵产生纤维素酶来确定是否为所需要的菌种，所以选a。25在筛选纤维素分解菌的过程中，通常用刚果红染色法，这种方法能够通过颜色反应直接对纤维素分解菌进行筛选。某同学在实验时得到了如图所示的结果，则纤维素分解菌位于（ ）a. b. c. d. 【答案】b【解析】在筛选纤维素分解菌的过程中，通常用刚果红染色法。刚果红与纤维素形成的红色复合物，在纤维素被分解后将不再存在，因此在培养基上会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，据此可判断图示中的纤维素分解菌位于。26下列有关“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验”的叙述，正确的是a. 分解尿素的细菌能产生脲酶，将尿素分解产生氮气b. 将实验组和对照组平板倒置，25恒温培养2448小时c. 统计尿素分解菌的数目时，以菌落数在300以上的平板进行计数d. 用尿素为唯一氮源、加有酚红指示剂的培养基培养尿素分解菌，指示剂变红【答案】d【解析】分解尿素的细菌能产生脲酶，将尿素分解为氨和二氧化碳，a错误；将实验组和对照组平板倒置，3037恒温培养2448小时，b错误；统计尿素分解菌的数目时，以菌落数在30300间的平板进行计数，求其平均值，c错误；用尿素为唯一氮源、加有酚红指示剂的培养基培养尿素分解菌，指示剂变红，d正确。27下列生物学实验操作中，能顺利达到实验目的的是a. 利用五点取样法抽样调查国道两侧隔离带中一枝黄花的密度b. 利用在牛肉膏蛋白胨培养基中加入尿素筛选能分解尿素的细菌c. 在固体培养基上稀释涂布大肠杆菌培养液获得单菌落d. 切取小块植物叶片直接接种到某种植物组织培养基上获得植株【答案】c【解析】样方法调查种群密度的常用取样方法包括五点取样法和等距取样法，国道两侧隔离带呈长方形，适用于等距取样法，a项错误；应用只以尿素为唯一碳源和氮源的培养基筛选能分解尿素的细菌，b项错误；在固体培养基上涂布稀释大肠杆菌培养液可以获得单菌落，c项正确；植物组织培养中的外植体应进行消毒，然后在无菌的条件下接种在某种植物组织培养基上，给予合适的条件才能获得植株，d项错误。28有关平板划线操作正确的是()a. 灼烧接种环后，为避免其他杂菌的干扰，应立即伸入菌液取菌种b. 划线结束后，为避免实验菌污染环境和感染操作者，必须再次灼烧接种环c. 在第一次划线前灼烧接种环和每次划线前灼烧接种环的目的相同d. 划线时最后一区域一定要与第一区域相连，达到首尾相接【答案】b【解析】接种环必须冷却后，才可以伸入菌液中蘸取一环液，否则会烧伤或烧死微生物，a错误；划线结束后，为避免实验菌污染环境和感染操作者，必须再次灼烧接种环，b正确；在第一次划线前灼烧接种环是为了消灭杂菌，每次划线前灼烧接种环是为了杀灭残留的目的菌种，c错误；划线时要避免最后一区的划线与第一区线连，因为最后一区是细菌最稀少的，而第一区是细菌最致密的，如果连在一起则有可能影响单个菌落的分离效果，d错误。【点睛】解答本题的关键是明确每次操作前都需要灭菌，但是与第一次操作前的灭菌的目的不同，且注意最后因此的划线千万不要与之前的任何一条相连。29对下列生物学实验现象形成原因的分析，不合理的是选项实验现象原因a色素提取液的颜色较浅加入无水乙醇的量过大b培养的菊花愈伤组织被杂菌污染接种时无菌操作不严格c尿素培养基上少数菌落周围没有红色环带这些细菌可能不以尿素作为氮源d从洋葱细胞提取dna，加入二苯胺，沸水浴后未显现蓝色 处理洋葱细胞研磨液时为去除杂 质加入了蛋白酶a. a b. b c. c d. d【答案】d【解析】加入无水乙醇的量过大，会使提取的色素溶液浓度过低，最终导致色素带上的颜色较浅，a正确；植物组织培养要求严格无菌，因此造成杂菌污染的原因是无菌操作不严格，b正确；分解尿素的细菌能够产生脲酶，将尿素分解为氨，从而使培养基的ph升高，会使酚红指示剂变红，故出现红色环带。而那些不以尿素为氮源的细菌不会使ph升高，也就不会出现红色环带，c正确；提取dna实验中加入蛋白酶的作用是分解蛋白质，有利于颜色反应。二苯胺试剂需要现用现配，否则会影响鉴定效果，d错误。30下列有关“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验”的叙述，正确的是a. 分解尿素的细菌能产生脲酶，将尿素分解产生氮气b. 将实验组和对照组平板倒置，25恒温培养2448小时c. 统计尿素分解菌的数目时，以菌落数在300以上的平板进行计数d. 用尿素为唯一氮源、加有酚红指示剂的培养基培养尿素分解菌，指示剂变红【答案】d【解析】分解尿素的细菌能产生脲酶，将尿素分解为氨和二氧化碳，a错误；将实验组和对照组平板倒置，3037恒温培养2448小时，b错误；统计尿素分解菌的数目时，以菌落数在30300间的平板进行计数，求其平均值，c错误；用尿素为唯一氮源、加有酚红指示剂的培养基培养尿素分解菌，指示剂变红，d正确。二、非选择题31【生物选修i:生物技术实践】下图是分离、纯化及保存枯草芽抱杆菌菌株的过程示意图:将土壤表层土稀释液煮沸巧分钟(枯草芽抱杆菌的芽抱不会失去活性)静置5分钟后获得样品，进行如下操作:请回答下列问题:(1)可知，除用选择培养基外，还有_起到筛选作用。(2)上图的划线操作中，培养基从物质状态分类上属于_，接种环用_法进行灭菌，划线过程中第一区和最后一区的划线_(能/不能)相连。(3)用稀释涂布平板法在5个培养基平板上，均接种稀释倍数为104的样品液0.1ml,培养一段时间后，平板长出来的菌落数分别为13. 160, 532, 175和187。每毫升样品中的细菌数量为_个。(4)用上述方法统计出的菌落数往往比样品中活菌的实际数目_，原因是_。【答案】 煮沸 固体培养基 灼烧灭菌（灼烧） 不能 1.74107 少 两个或者多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落【解析】试题分析：微生物的接种方法：平板划线法和稀释涂布法。（1）平板划线操作：挑取他含菌样品：选用平整、圆滑的接种环，按无菌操作法挑取少量菌种。划a区：将平板倒置于煤气（酒精）灯旁,左手拿出皿底并尽量使平板垂直于桌面，有培养基一面向着煤气灯（这时皿盖朝上，仍留在煤气灯旁)，右手拿接种环先在a区划34条连续的平行线(线条多少应依挑菌量的多少面定）。划完a区后应立即烧掉环上的残菌，以免因菌过多而影响后面各区的分离效果。在烧接种环时，左手持皿底并将其覆盖在皿盖上方(不要放入皿盖内)，以防止杂菌的污染。划其他区：将烧去残菌后的接种环在平板培养基边缘冷却一下，并使b区转到上方，接种环通过a区（菌源区）将菌带到b区，随即划数条致密的平行线。再从b区作c区的划线。最后经c区作d区的划线，d区的线条应与a区平行，但划d区时切勿重新接触a、b区，以免极该两区中浓密的菌液带到d区，影响单菌落的形成。随即将皿底放入皿盖中。烧去接种环上的残菌。等平板凝固后，将平板倒置。（2）稀释涂布法：是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，在适宜条件下培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。能够测定样品中活菌数的方法是：稀释涂布平板法。（1）枯草芽抱杆菌的芽抱耐高温，所以煮沸可以杀灭枯草芽抱杆菌的芽抱以外的杂菌，起到选择作用。（2）平板划线法用的是固体培养基，划线前需要用灼烧的方法对接种环灭菌。划线时要避免最后一区的划线与第一区线连，因为最后一区是细菌最稀少的，而第一区是细菌最致密的，如果连在一起则有可能影响单个菌落的分离效果。（3）根据题干信息，五个数值中13和532相差太大，不予计算，所以每毫升样品中的细菌数量=平板上菌落数的平均值体积稀释倍数=（160+175+187）31040.1=1.74107个。（4）由于两个或者多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，所以用上述方法统计出的菌落数往往比样品中活菌的实际数目少。【点睛】本题考查了检测土壤中细菌数量的检测方法，意在考查学生的应用和实验探究能力，属于识记内容，理解、识记稀释涂布平板法的过程，就可以做出正确的答案，要求考生掌握稀释涂布平板法计数的计算公式，能够根据题中所给数据进行相关计算。32【生物选修1：生物技术实践】临床使用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。实验时，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。回答下列问题：（1）为统计样品中活菌的数目，常将样品用_法接种于培养基表面。运用活菌计数法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因是_。（2）为了检验该致病菌对于抗生素的敏感性，在该病菌菌落均匀生长的平板的不同位置，分别放置含有a、b、c、d四种抗生素的滤纸片，培养一段时间后，在四个滤纸片周围出现透明圈由大到小依次是acdb，由此推断，该病人目前适合使用的抗生素_。含c的滤纸片周围透明圈比含a的小，最可能的原因是_导致的结果；含d的滤纸片周围的透明圈也比含a的小，且透明圈中出现一个菌落，这种菌落的出现可能是由于接种过程不严格导致的，也可能是产生了抗生素d的耐药菌，这种变异的特点是_（至少列举两个）。（3）实验中培养基需用_灭菌、接种环用灼烧灭菌、接种过程也在酒精灯火焰旁进行，其达到的实验目的是 _。【答案】 稀释涂布 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 a 该致病菌对c的敏感性比对a的弱 随机的 不定向的 高压蒸汽 确定某致病菌对不同抗生素的敏感性【解析】【试题分析】本题主要考查微生物培养过程中的接种方法，以及分析实验结果获取结论的能力。解题的关键是运用所学过的知识点“透明圈”，进行知识点的迁移、类比，然后解决问题。1稀释涂布平板法常用来统计样品中活菌的数目。当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。2抗生素是由真菌产生的，可以抑制生长、繁殖或杀死细菌等致病菌的一类物质。在抗药性检验过程中，如果在菌落周围出现透明的圆圈，说明此种抗生素可抑制该细菌。透明圈的大小表示此种抗生素抗菌的强弱，根据材料分析，抗菌强弱依次是a、c、d、b；d的透明圈中出现了一个菌落，说明该菌落对此种抗生素具有耐药性。（1）为统计样品中活菌的数目，常将样品用稀释涂布法接种于培养基表面；当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，因此，运用活菌计数法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。（2）在抗药性检验过程中，如果在菌落周围出现透明的圆圈，说明此种抗生素可抑制该细菌，透明圈的大小表示此种抗生素抗菌的强弱。由于四个滤纸片周围出现透明圈由大到小依次是acdb，可以推断出抗生素a对该致病菌的效果最好，该病人目前适合使用的抗生素是a；含c的滤纸片周围透明圈比含a的小，说明该致病菌对c的敏感性比对a的弱；含d的滤纸片周围的透明圈也比含a的小，且透明圈中出现一个菌落，这种菌落的出现可能是由于接种过程不严格导致的杂菌污染，也可能是由于基因突变产生了抗生素d的耐药菌，基因突变的特点是随机的、不定向的。（3）培养基的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，接种环的灭菌方法是灼烧灭菌，接种过程应该在点燃的酒精灯旁进行，以防止杂菌污染；该实验的目的是确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。33“互联网+餐饮”为大众生活带来了诸多改变，动动手指点外卖已经成为普通大众的生活方式。为检测外卖糕点中微生物指标，食品监管人员通过无菌操作，将25g样品以及225ml磷酸盐缓冲液一起置于均质器中以800010 000r/min的速度处理1min，获得均匀稀释液待用。请回答下列问题：（1）配制牛肉膏蛋白胨培养基时，在各成分都溶化后和倒平板前，要进行的操作是_、分装和灭菌。对培养基进行灭菌的常用工具是_。倒平板时，一般需冷却至50左右，并在酒精灯火焰附近操作。接种之前进行的一系列稀释操作，目的是在培养基表面形成_，这种接种方法是_。（2）若培养基上平均有40个菌落，则1g样品中大致的活菌数量是_个。该结果往往较值偏小，原因是_。有人认为，此处统计的菌落总数实际上仅为糕点样品中总细菌数的一部分，理由是_。【答案】 调ph 高压蒸汽灭菌锅 单个菌落 稀释涂布平板法 4lo6 少数菌落可能是由两个或多个细菌形成的每种细菌需求的营养物质和生长条件不同 培养时需满足其营养、温度、ph、需氧性等条件，因而实际只能获得糕点样品细菌中的一部分【解析】试题分析：制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的方法：计算、称量、溶化、调ph、灭菌、倒平板。据图分析，图示为稀释涂布平板法，可以用于菌种的分离和计数；稀释涂布平板法在培养基上分离、培养出微生物的单个菌落，以便于计数、移植、分离，从而达到纯培养的目的。（1）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的过程中，融化后应该先调节ph、分装和灭菌，再倒平板；培养基常用高压蒸汽灭菌法灭菌，需要高压蒸汽灭菌锅；稀释涂布平板法接种之前需要进行的一系列稀释操作，目的是在培养基表面形成单个菌落。（2）据图分析，0.1ml的菌液含有40个菌落，则1g样品含有的菌落数=40100101010=4lo6个；由于少数菌落可能是由两个或多个细菌形成的，因此该结果往往较值偏小。每种细菌需求的营养物质和生长条件不同，培养时需满足其营养、温度、ph、需氧性等条件，因而实际只能获得糕点样品细菌中的一部分。34生物-选修1：生物技术实践某实验小组欲从豆油污染的土壤中筛选出能高效降解脂肪的菌株。请回答：（1）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以_为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于_培养基。（2）为避免培养皿污染，需将培养皿呈_状态放置。为避免培养液中菌体浓度过高，需将培养液进行_处理。为了排除培养基被污染，需设置接种_的培养基作为空白对照。（3）为了筛选出菌株，可将适量的_试剂滴加在平板中的菌落周围，洗去浮色后，如果菌落周围出现透明圈，则说明此种菌能够分泌脂肪酶。纯化菌种时，为了对活菌进行计数，可采用_法接种于新的培养基平板上。【答案】 豆油（脂肪） 选择 倒置 梯度稀释（或系列稀释） 等量无菌水 苏丹iii（苏丹iv） 稀释涂布平板【解析】试题分析：微生物的培养基按用途分，可以分为选择培养基和鉴别培养基。选择培养基主要是培养、分离特定的微生物，培养酵母菌可在培养基中加入青霉素；鉴别培养基可以鉴定不同的微生物，比如鉴别饮用水中是否含有大肠杆菌，可以用伊红-美蓝培养基，如果菌落呈深紫色，并带有金属光泽，说明有大肠杆菌。微生物常见的接种的方法：平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落；稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。（1）欲筛选出能降解豆油的菌株，培养基中应只含有豆油而无其它碳源，不能降解豆油的细菌在此培养基上不能生存，从功能上讲，这类培养基属于选择培养基。（2）为避免培养皿污染，需将培养皿呈倒置状态放置为避免培养液中菌体浓度过高，需将培养液进行梯度稀释处理为了排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，需设置接种等量无菌水的培养基作为空白对照。（3）脂肪可用苏丹染液（或苏丹染液）鉴定，呈橘黄色（或红色），由于脂肪遇苏丹染液（或苏丹染液）会出现红色，所以为了筛选出菌株，可将适量的试剂滴加在平板中的菌落周围，洗去浮色后，如果菌落周围的现象是出现透明圈、不出现红色圈，则说明此种菌能够分泌脂肪酶。纯化菌种时，为了对活菌进行计数，可采用稀释涂布平板法接种于新的培养基平板上。35水质的细菌检查是应用微生物学的任务之一。其实验步骤如下：(一）采样自来水：打开水龙头，放水35min，关闭水龙头用酒精棉球灼烧水龙头，再开水龙头12min后，用无菌瓶取水样。湖水（取样操作略）(二）水中细菌总数测定自来水：汲取lml水样注入无菌培养皿加入（4550)的牛肉膏蛋白胨培养基旋转混匀静止凝固放置培养观察计数。湖水：稀释水样（其他操作同）。请回答下列问题：（1）进行上述实验需要用_法和_法依次对使用的玻璃仪器和培养基进行灭菌，使用_(填物质）对操作者手进行消毒。（2）本实验使用的培养基含有水、碳源、_、_和_等成分。（3）取样时用酒精棉球灼烧水龙头的作用是防止_进入样品，影响实验结果。将培养基加入培养皿时应在_旁进行操作；在向培养皿加入培养基前，要使装有培养基的容器瓶口迅速通过_；在放置培养操作时，应将平板（培养皿）_放置；对湖水样品的稀释范围以达到培养后每个平板中菌落数在_之间最为适合。【答案】 高压蒸汽/干热 高压蒸汽 酒精 氮源（牛肉膏蛋白胨） 无机盐 琼脂 龙头口细菌 火焰 火焰 倒过来 30300【解析】试题分析：（1）玻璃仪器可用高压蒸汽灭菌法、干热灭菌法灭菌；培养基可采用高压蒸汽灭菌；操作者的手可用酒精进行消毒。（2）本实验使用的培养基为牛肉膏蛋白胨固体培养基，该培养基含有水、碳源、氮源、无机盐和琼脂等成分。（3）为防止龙头口细菌进入样品，影响实验结果，取样时应用酒精棉球灼烧水龙头；为避免杂菌污染，倒平板时应在酒精灯火焰旁进行，在向培养皿加入培养基前，要使装有培养基的容器瓶口迅速通过火焰；在放置培养操作时，应将平板倒置；对湖水样品的稀释范围以达到培养后每个平板中菌落数在30300之间最为适合。【点睛】在微生物的实验室培养中获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。无菌技术围绕着如何避免杂菌的污染展开，主要包括以下几个方面：对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒；将用于微生物培养的培养器皿、接种用具和培养基等进行灭菌；为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行；实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。36某生物兴趣小组分离提纯葡萄皮上的野生酵母菌时，选取了从自然界中采集到的葡萄，用无菌水将葡葡皮上的微生物冲洗到无菌的三角瓶中进行培养。请回答下列问题：（1）在培养基配制过程中，加入了青霉素等抗生素，其目的是_。纯化酵母菌时，常用的接种方法是_。（2）该实验小组成功分离出某品种的酵母菌后，用移液器设定lml的接种量分别接种于三个盛有等量液体培养基的锥形瓶中，放罝在摇床上培养，分别设定摇床转速为210r/min、230r/min、250r/min，检测结果如图所示。从图中可看出_，原因是_。（3）该小组同学在计数时观察到酵母菌出现抱团现象。抱团现象可能是酵母菌混合不均造成的，因此取样前将锥形瓶中的培养液_，取样时用吸管_。如果该现象是培养液中酵母菌数目过多而造成的，需对培养液进行一系列的梯度稀释，稀释10倍的操作方法是吸取lml菌液注入盛有_的试管中，并_。【答案】 抑制细菌的生长 平板划线法（稀释涂布法） 摇床转速越高，酵母菌繁殖的速度和总量越高 摇床转速越高，提供的氧气越充足 充分震荡摇匀 来回吹吸若干次 9ml水 充分混匀【解析】试题分析：酵母菌是兼性厌氧型的单细胞真菌，能够进行无氧呼吸产酒精，在有氧条件下进行有氧呼吸可以迅速增殖；酵母菌对青霉素不敏感；酵母菌进行酵母菌计数时需要将菌液进行梯度稀释。（1）分离野生酵母菌时需要加入青霉素等抗生素的原因是酵母菌对青霉素不敏感，而细菌、放线菌对抗生素敏感，所以培养基中加入青霉素可以抑制细菌的生长；纯化酵母菌时，常用的接种方法是平板划线法或稀释涂布平板法。（2）根据题意可知，摇床转速越高，提供的氧气越充足，从图中可看出摇床转速越高，酵母菌繁殖的速度和总量越高。（3）进行酵母菌计数时取样前将锥形瓶中的培养液充分震荡摇匀，使酵母菌分散开，取样时需要用吸管来回吹吸若干次使酵母菌充分分散并混匀；进行梯度稀释时稀释10倍的操作方法是吸取1ml菌液注入盛有9ml水的试管中，并充分混匀。37为解决塑料袋造成的“白色污染”问题，某同学试图从土壤中寻找一种能加速塑料袋自然降解的目的菌，请根据有关知识回答下列问题：（1）为培养该目的菌，需要配制出供其_所需的营养基质培养基，对培养基灭菌常用的方法是_。在接种前需要检验使用的培养基灭菌是否合格，方法是_。（2）为了确保能够从样品中分离得到所需要的微生物，我们可在接种之前进行_培养，以增加目的菌的浓度。实验室常用的接种方法有_ 和_。（3）该同学在稀释倍数为104的培养基中测得平板上菌落数分别为24、23、25，则每毫升样品中的菌落数是_个（涂布平板时所用稀释液的体积为0.2 ml）。用该方法统计的数目往往比活菌的实际数目_。【答案】 生长繁殖 高压蒸汽灭菌法 将未接种的培养基在37（或适宜温度）恒温箱中倒置培养一段时间（或12天），观