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文档简介
基因工程的原理和技术一、单选题1在基因工程中,为将目的基因导入受体细胞常采用土壤农杆菌转化法,在土壤农杆菌中常含有一个ti质粒。某科研小组欲将某抗虫基因导入某植物,下列分析错误的是()。ati质粒含有对宿主细胞生存具有决定性作用的基因,是基因工程中重要的载体b用ca2处理细菌是重组ti质粒导入土壤农杆菌中的重要方法c重组ti质粒的土壤农杆菌成功感染植物细胞,可通过植物组织培养技术将该细胞培养成具有抗虫性状的植物d若能够在植物细胞中检测到抗虫基因,则说明将重组质粒成功地导入到了受体细胞【答案】a【解析】试题分析:ti质粒是基因工程中重要的载体,不含有对宿主细胞生存具有决定性作用的基因,故a错误;用ca2处理细菌可增加细胞壁的通透性,是重组ti质粒导入土壤农杆菌中的重要方法,故b正确;转基因成功的植物细胞,可通过植物组织培养技术,获得转基因植物,故c正确;在植物细胞中检测到抗虫目的基因,说明目的基因已成功导入,但不能证明其能表达,故d正确。考点:本题考查基因工程的有关知识,意在考查考生识记能力和理解所学知识的要点,把握知识间的内在联系的能力。2卵细胞作为生殖细胞,在生物技术中可用于( )。克隆动物时细胞核的受体进行体外受精,培育试管动物形成受精卵,作为培育转基因动物的受体细胞植物组织培养形成试管苗动物细胞融合形成单克隆抗体形成受精卵,利用转基因技术培育抗虫棉植株a. b. c. d. 【答案】d【解析】试题分析:卵细胞可以用于核移植的受体细胞,故1正确。将培养到减数第二次分裂中期的卵母细胞可以进行体外受精,故2正确。可以与精子形成受精卵作为基因冲出的受体细胞,故3正确。植物组织形成试管苗不需要卵细胞,故4错误,故a、b错误。动物细胞融合形成单克隆抗体是b细胞核杂交瘤细胞,故5错误,故c错误。可以形成受精卵,利用转基因工程培育抗虫植株,故6正确,故d正确。考点:本题考查现代生物技术相关知识,意在考察考生对知识点的理解和应用能力。3对基因表达载体构建的一些叙述,不正确的是:a. 需要限制酶和dna连接酶等特殊工具b. 基因表达载体中有的含有启动子和密码子c. 标记基因不定是抗生素抗性基因d. 基因表达载体的构建是基因工程的核心【答案】b【解析】试题分析:基因表达载体是目的基因与载体的结合,在此过程中需用同一种限制酶切割目的基因与载体,用dna连接酶将相同的末端连接起来,a正确;基因表达载体的构建是在细胞外进行的,b错误;抗生素抗性基因可作为标记基因,位于质粒上,c正确;启动子位于基因首端使转录开始,d正确。考点:基因工程的原理【名师点睛】基因工程中应注意的问题:(1)目的基因的插入位点不是随意的基因表达需要启动子与终止子的调控,所以目的基因应插入启动子与终止子之间的部位。(2)基因工程操作过程中只有第三步(将目的基因导入受体细胞)没有碱基互补配对现象第一步存在逆转录法获得dna,第二步存在黏性末端连接现象,第四步检测存在分子水平杂交方法。(3)农杆菌转化法原理:农杆菌易感染植物细胞,并将其ti质粒上的tdna转移并整合到受体细胞染色体dna上。(4)标记基因的作用筛选、检测目的基因是否导入受体细胞,常见的有抗生素抗性基因、发光基因,表达产物为带颜色物质等。(5)受体细胞中常用植物受精卵或体细胞(经组织培养)、动物受精卵(一般不用体细胞)、微生物大肠杆菌、酵母菌等。一般不用支原体,原因是它营寄生生活;一定不能用哺乳动物成熟红细胞,原因是它无细胞核,不能合成蛋白质。4下列是一种生物技术,对此技术过程的说法,错误的是aa和d的切割需用同一种限制酶ba是常用的运载体,存在于细菌及酵母菌细胞中c限制性核酸内切酶只能作用于双链dna的特定序列d该生物技术的优点是可以产生新基因【答案】d【解析】试题分析:切割目的基因和质粒通常是同种限制酶,故a正确;质粒是通常采用的运载体,存在于细菌和酵母菌中,故b正确;限制酶能识别特定序列,并在特定位点进行切割,故c正确;基因工程不能产生新基因,基因突变能产生新基因,故d错。考点:本题主要考查基因工程,意在考查考生能理解所学知识的要点和能用文字、图表以及数学方式等多种表达形式准确地描述生物学方面的内容的能力。5基因疫苗是指将编码外源性抗原的基因导入人和动物体内,让其在宿主细胞中表达抗原蛋白,诱导机体产生免疫应答。某科研所计划采用基因工程和胚胎工程技术培育具有口蹄疫免疫特性的高产奶牛。下列说法中,不正确的一项是( )a. 基因表达载体的构建是基因工程的核心,一个完整的基因表达载体至少包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等b. 检测高产奶牛体内是否出现口蹄疫病毒的抗原蛋白,在分子水平上的检测方法是从转基因牛中提取蛋白质,用双缩脲试剂进行鉴定c. 胚胎工程最后一道工序的实质是早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移d. 为提高胚胎的利用率,可以采用胚胎分割技术,应该选用发育良好、形态正常的桑椹胚或囊胚的胚胎进行分割【答案】b【解析】基因表达载体的构建是基因工程的核心,一个完整的基因表达载体至少包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等,a项正确;检测高产奶牛体内是否出现口蹄疫病毒的抗原蛋白,在分子水平上的检测方法是抗原抗体杂交技术, b项错误;胚胎移植是胚胎工程其他技术的最后一道工序,其实质是早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移,c项正确;胚胎分割是指采用机械方法将早期胚胎切割成2、4或8等份等,经移植获得同卵双胎或多胎的技术,能够提高胚胎的利用率,胚胎分割时应该选用发育良好、形态正常的桑椹胚或囊胚的胚胎进行分割,d项正确。6下列在现代生物科技的应用中,不需要进行检测与筛选的是a. 对植物的茎尖进行组织培养获得脱毒苗b. 将鼠的骨髓瘤细胞与b淋巴细胞融合,制备单克隆抗体c. 利用植物体细胞杂交技术培育“萝卜甘蓝”d. 将抗虫基因导入植物细胞,培育具有抗虫特性的新植株【答案】a【解析】试题分析:植物组织培养属于无性繁殖,保留母本的一切性状,不需要筛选,故a正确;在单克隆抗体的制备过程中,有两次筛选,故b错误;植物体细胞杂交和基因工程中,都需要进行筛选,故cd错误。考点:本题主要考查基因工程、细胞工程,意在考查考生能理解所学知识的要点,把握知识间的内在联系的能力。7用 限制酶xbai和saci(两种酶切出的粘性末端不同)切割某dna,获得含目的基因的片段。若利用该片段构建基因表达载体,应选用下图中的ti质粒是注:图中箭头所指的位置是限制酶识别和切割的位点a. b. c. d. 【答案】c【解析】用两种限制酶xbai和saci(两种酶切出的黏性末端不同)切割某dna,获得含目的基因的片段。该ti质粒中含有限制酶xbai和saci的切割位点,但用这两种酶切割不会将目的基因插入t-dna中,a错误;该ti质粒中不含限制酶xbai的切割位点,b错误;该ti质粒中含有限制酶xbai和saci的切割位点,且用这两种酶切割可将目的基因插入t-dna中,c正确;该ti质粒中不含限制酶saci的切割位点,d错误。8碱基互补配对发生在下列哪些生理过程或生物技术中( )种子的萌发 病毒的增殖过程 细菌的二分裂过程 目的基因与运载体的结合dna探针的使用 分泌蛋白的加工和运输a. b. c. d. 【答案】d【解析】种子萌发过程中涉及细胞分裂、分化,涉及dna复制、转录和翻译,会发生碱基互补配对;病毒的增殖过程涉及遗传物质的复制和蛋白质的合成,会发生碱基互补配对;细菌的二分裂过程涉及遗传物质的复制和蛋白质的合成,会发生碱基互补配对;目的基因与运载体结合时,黏性末端之间通过碱基互补配对连接;dna探针可以和特定的dna单链发生碱基互补配对;分泌蛋白的加工和运输发生在内质网和高尔基体中,不发生碱基互补配对。选d。9下列有关将目的基因导入受体细胞的相关叙述,正确的是( )a. 将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是农杆菌转化法b. 植物的受体细胞只能是受精卵细胞c. 基因枪法是将目的基因导入动物细胞中最为有效的方法d. 将某种药用蛋白基因导入动物乳腺细胞中即可获得乳腺生物反应器【答案】a【解析】将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是农杆菌转化法,a正确;植物的受体细胞可以是受精卵细胞,也可以是体细胞,b错误;显微注射技术是将目的基因导入动物细胞中最为有效的方法,c错误;乳腺生物反应器是将外源基因在哺乳动物的乳腺中特异表达,以转基因动物的乳腺组织生产药用蛋白,d错误。【考点定位】基因工程【名师点睛】解答此题的关键是需要熟知将目的基因导入不同受体细胞的过程。目的基因导入不同受体细胞的过程生物种类植物动物微生物常用方法农杆菌转化法显微注射技术感受态细胞法受体细胞体细胞或受精卵受精卵原核细胞转化过程将目的基因插入到ti质粒的tdna上农杆菌导入植物细胞整合到受体细胞染色体的dna上表达将含有目的基因的表达载体提纯取卵(受精卵)显微注射受精卵发育获得具有新性状的动物ca2处理细胞感受态细胞重组表达载体dna分子与感受态细胞混合感受态细胞吸收dna分子10基因工程是在dna分子水平进行设计施工的,在基因操作的以下步骤中,不进行碱基互补配对的是( )人工合成目的基因ecolidna连接酶结合目的基因与载体将目的基因导入受体细胞目的基因的检测和表达个体生物学水平的鉴定a b c d【答案】c【解析】人工合成目的基因的两种方法都要进行碱基互补配对;目的基因的黏性末端与载体黏性末端要进行碱基互补配对;目的基因的表达也要进行碱基互补配对;将已进行碱基互补配对且在dna连接酶的作用下重组的质粒导人受体细胞中,所以不再进行碱基互补配对;个体生物学水平的鉴定是直接观察性状表现,不进行碱基互补配对。综上所述,正确。11科研人员以抗四环素基因为标记基因,通过基因工程的方法让大肠杆菌生产鼠的-珠蛋白,治疗鼠的镰刀型细胞贫血症。下列相关实验设计中,不合理的是a. 用编码序列加启动子、抗四环素基因等元件来构建表达载体b. 利用小鼠dna分子通过pcr克隆出-珠蛋白基因的编码序列c. 用含有四环素的培养基筛选出已经导入-珠蛋白编码序列的大肠杆菌d. 用ca2处理大肠杆菌后,将表达载体导入具有四环素抗性的大肠杆菌中【答案】d【解析】基因表中载体包括启动子、目的基因(珠蛋白基因)、标记基因(抗四环素基因)、终止子等,a正确;珠蛋白基因属于目的基因,可以利用pcr技术扩增,b正确;导入重组质粒的大肠杆菌能抗四环素,因此可以用含有四环素的培养基筛选出已经导入珠蛋白编码序列的大肠杆菌,c正确;抗四环素基因是标记基因,用于筛选导入重组质粒的受体细胞,因此受体细胞(大肠杆菌)不能含有四环素抗性基因,d错误。12下列属于pcr技术的条件的是单链的脱氧核苷酸序列引物 目的基因所在的dna片段 脱氧核苷酸 核糖核苷酸 dna连接酶 dna聚合酶 dna限制性内切酶a. b. c. d. 【答案】b【解析】pcr技术需要一对引物,即一对单链的脱氧核苷酸序列引物,正确;pcr技术需要模板,即目的基因所在的dna片段,正确;需要脱氧核苷酸作为原料,正确;核糖核苷酸是合成rna的原料,而pcr合成的是dna,错误;采用pcr合成dna时,不需要dna连接酶,而需要dna聚合酶,错误,正确;体外合成dna时,不需要限制性内切酶,错误。13下列所示的酶中,作用效果最相似的是a. 解旋酶、dna聚合酶 b. dna聚合酶、taq酶c. 纤维素酶、胰蛋白酶 d. dna水解酶、逆转录酶【答案】b【解析】dna解旋酶用于打开dna的双螺旋;dna聚合酶用于催化以dna单链为模板,把单个脱氧核苷酸分子聚合在一起的过程;taq酶是一种耐高温的dna聚合酶;纤维素酶可以催化纤维素水解;胰蛋白酶可以催化蛋白质水解;dna酶可以催化dna水解;逆转录酶可以催化以rna为模板,合成dna的过程。14下列有关获取目的基因的叙述 不正确的是( )a. 获取目的基因是实施基因工程的第一步b. 目的基因可以是一些具有调控作用的因子c. 利用pcr技术获取目的基因时需要耐热性的解旋酶d. 如果基因比较小,核苷酸序列又已知,可以用化学方法直接人工合成【答案】c【解析】获取目的基因是实施基因工程的第一步,a项正确;目的基因可以是一些控制蛋白质合成的基因,也可以是一些具有调控作用的因子,b项正确;利用pcr技术获取目的基因时需要耐热性的dna聚合酶,利用高温解旋时不需要酶,c项错误;如果基因比较小,核苷酸序列又已知,可以用化学方法直接人工合成,d项正确。15下列有关基因工程技术的正确叙述是a重组dna技术所用的工具酶是限制酶、连接酶、载体b为育成抗除草剂的作物新品种,导入抗除草剂基因时只能以受精卵为受体细胞c 选用细菌作为重组质粒的受体细胞是因为细菌繁殖快d只要目的基因进入了受体细胞就能成功表达【答案】c【解析】重组dna技术的基本工具酶是限制酶、dna连接酶,a错误;为育成抗除草剂的作物新品种,导入抗除草剂基因时可以受精卵为受体,也可以体细胞为受体,最后再采用植物组织培养技术即可获得转基因植物,b错误;细菌作为受体细胞原因有多个,如细胞体积小,繁殖周期短;遗传物质少等,c正确;目的基因进入受体细胞不一定能成功实现表达,需要检测和鉴定,d错误【考点定位】基因工程【名师点睛】16将甜菜碱、海藻糖等有机小分子的合成基因转入烟草细胞中,会使烟草的抗旱性增强。下列关于这类转基因烟草及其培育过程的说法,不正确的是a. 细胞中甜菜碱等有机小分子的合成量增加b. 细胞液渗透压增大,避免细胞过度失水c. 将抗旱基因导入烟草细胞中常用农杆菌转化法d. 在干旱条件下筛选出成功导入抗旱基因的烟草细胞【答案】d【解析】根据题意可知,将甜菜碱等有机小分子的合成基因转入烟草细胞中,会使烟草细胞中甜菜碱等有机小分子的合成量增加,a项正确;烟草细胞中甜菜碱、海藻糖等有机小分子的合成增加,会使细胞液的渗透压增大,可避免细胞过度失水,使烟草的抗旱性增强,b项正确;将目的基因导入植物细胞中常用农杆菌转化法,c项正确;可利用基因表达载体中的标记基因来筛选成功导入抗旱基因的烟草细胞,在干旱条件下可筛选出成功导入抗旱基因的烟草植株,d项错误。【点睛】本题考查基因工程的相关知识,解答此题的关键是要认真审题,注意从题干中获取有用的信息,此外,还有注意以下2个方面的知识:1. 目的基因导入不同受体细胞的过程生物种类植物动物微生物常用方法农杆菌转化法显微注射技术感受态细胞法受体细胞体细胞或受精卵受精卵原核细胞转化过程将目的基因插入到ti质粒的tdna上农杆菌导入植物细胞整合到受体细胞染色体的dna上表达将含有目的基因的表达载体提纯取卵(受精卵)显微注射受精卵发育获得具有新性状的动物ca2+处理细胞感受态细胞重组表达载体dna分子与感受态细胞混合感受态细胞吸收dna分子2注意鉴别和筛选含有目的基因的受体细胞和筛选成功导入目的基因的转基因植物体的筛选方法是不同的。171抗胰蛋白酶缺乏症是北美常见的一种单基因遗传病,患者成年后会出现肺气肿及其他疾病,严重者甚至死亡。利用基因工程技术将控制该酶合成的基因导入羊的受精卵,最终培育出能在乳腺细胞表达人1抗胰蛋白酶的转基因羊,从而更容易获得这种酶。下列关于该过程的叙述中错误的是( )a. 载体上绿色荧光蛋白基因(gfp)的作用是便于筛选含有目的基因的受体细胞b. 将目的基因导入羊膀胱细胞中,将会更加容易得到1抗胰蛋白酶c. 培养出的转基因羊的所有细胞中都含有该目的基因,故该羊有性生殖产生的后代也都能产生1抗胰蛋白酶d. 目的基因与载体重组过程需要dna连接酶的催化作用【答案】c【解析】根据题意,该基因工程中,载体上绿色荧光蛋白基因(gfp)的作用是便于筛选含有目的基因的受体细胞,a正确;将目的基因导入羊膀胱细胞中,可获得膀胱生物反应器,不受羊的性别限制,将会更加容易得到1抗胰蛋白酶,b正确;培养出的转基因羊的虽然所有细胞中都含有该目的基因,但由于其为杂合子,故该羊有性生殖产生的后代不一定能产生1抗胰蛋白酶,c正确;目的基因与载体重组过程需要dna连接酶的催化作用,d正确。18下列有关基因工程技术的叙述,正确的是( )a. dna连接酶和dna聚合酶是构建重组质粒必需的工具酶b. 通常用一种限制性核酸内切酶处理含目的基因的dna,用另一种处理运载体dnac. 只要目的基因进入了受体细胞就能成功实现表达d. 选用细菌作为重组质粒的受体细胞是因为细菌繁殖快【答案】d【解析】基因工程中常用的工具酶有dna连接酶和限制性核酸内切酶,不包含dna聚合酶,a错误;通常用同一种限制性核酸内切酶处理含目的基因的dna和运载体dna,这样才能使切割出的目的基因插入到运载体中,b错误;目的基因进入受体细胞需要检测和鉴定,不一定能成功实现表达,c错误;常用细菌作为重组质粒的受体细胞主要是因为细菌是单细胞、遗传物质少、繁殖快,d正确。19采用基因工程的方法培育抗虫棉,下列导入目的基因的做法正确的是( )将毒素蛋白注射到棉受精卵中 将编码毒素蛋白的dna序列,注射到棉受精卵中 将编码毒素蛋白的dna序列,与质粒重组,导入细菌,用该细菌感染棉的体细胞,再进行组织培养 将编码毒素蛋白的dna序列,与细菌质粒重组,注射到棉的子房并进入受精卵a. b. c. d. 【答案】c【解析】试题分析:导入受体细胞的是目的基因,不是目的蛋白,错。目的基因必须与运载体形成重组载体,才能导入受体细胞,错。目的基因导入植物细胞常用农杆菌转化法导入植物体细胞,再通过组织培养技术培养为具有目的性状的植株,正确。也可以将目的基因导入受精卵,发育为具有目的性状植株,即花粉管通道法,正确。综上所述,c正确。考点:基因工程步骤【名师点睛】目的基因导入常用方法植物:农杆菌转化法、花粉管通道法、基因枪法;动物:显微注射法;微生物:感受态细胞法。20在基因工程中用来修饰改造生物基因的工具是a. 限制酶和dna连接酶 b. 限制酶和水解酶c. 限制酶和运载体 d. dna连接酶和运载体【答案】a【解析】试题分析:基因工程中构建基因表达载体时,需要用限制酶切割含有目的基因的外源dna分子和运载体,还需dna连接酶将目的基因和运载体连接起来,因此基因工程中用修饰改造基因的工具是限制酶和dna连接酶,a正确;水解酶不是基因工程的工具,b错误;运载体的作用是将目的基因导入受体细胞,而不是修饰改造基因,cd错误。考点:基因工程的工具【名师点睛】基因工程至少需要三种工具:限制性核酸内切酶(限制酶)、dna连接酶、运载体其中限制酶的作用是获取目的基因和切割运载体;dna连接酶的作用是将目的基因和运载体连接形成重组dna分子;运载体的作用是将目的基因导入受体细胞。二、非选择题21科研人员采用转基因体细胞克隆技术获得转基因绵羊,以便通过乳腺生物反应器生产人凝血因子ix医用蛋白,其技术路线如图。 过程构建的a是_。它必须将目的基因与_等调控组件重组在一起,才能通过分泌乳汁来生产人凝血因子ix医用蛋白。 在核移植之前,必须先去掉受体卵母细胞的核,目的是_ 进行胚胎移植时,代孕母羊对移入子宫的重组胚胎基本上不发生_,这为重组胚胎在代孕母羊体内的存活提供了可能。 采用胎儿成纤维细胞进行转基因体细胞克隆,理论上可获得很多转基因绵羊,这是因为_。 蛋白质工程也被称为第二代基因工程,其基本途径是从预期蛋白质功能出发,通过_和_,进而确定相对应的脱氧核苷酸序列,据此获得基因,再经表达、纯化获得蛋白质,之后还需要对蛋白质的生物功能进行鉴定。【答案】 (含目的)基因(的)表达载体 乳(腺)蛋白基因的启动子 保证核遗传物质来自含目的基因的成纤维细胞 免疫排斥反应 整合有目的基因的成纤维细胞可进行传代培养获得大量细胞,通过核移植都可得到多个重组胚胎,再经胚胎移植培育出很多转基因绵羊 设计蛋白质的结构 推测氨基酸序列【解析】试题分析:本题考查了转基因绵羊的培育过程,主要考查学生对于基因工程、胚胎工程的掌握和理解,这部分内容主要是识记和理解内容,难度适中。胚胎移植的生理基础:(1)供体与受体具有相同的生理变化,为供体的胚胎植入受体提供了相同的生理环境;(2)胚胎在早期母体中处于游离状态,这就为胚胎的收集提供了可能;(3)子宫不对外来胚胎发生免疫排斥反应,这为胚胎在受体内的存活提供了可能;(4)胚胎遗传性状不受受体任何影响。分析题图:转基因体细胞克隆技术获得转基因绵羊涉及的技术手段有转基因技术、核移植、胚胎移植,据此答题。(1)据图可知,过程a是(含目的)基因(的)表达载体,一个基因表达载体的组成,除了含有目的基因外,还必须有启动子、终止子以及标记基因等,基因表达载体必须将目的基因与乳(腺)蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起,才能通过分泌乳汁来生产人凝血因子ix医用蛋白。(2)核移植的目的一般是获得供体的克隆体,如果不去掉受体卵母细胞的核,则新获得的细胞中遗传物质就是供受体遗传物质的总和,得到的不是供体的克隆体,因此在核移植之前,必须先去掉受体卵母细胞的核,目的是保证核遗传物质来自含目的基因的成纤维细胞。(3)胚胎移植时,一般选择发育良好的桑椹胚或囊胚。进行胚胎移植时,代孕母羊对移入子宫的重组胚胎基本上不发生免疫排斥反应,这为重组胚胎在代孕母羊体内的存活提供了可能。(4)因为整合有目的基因的成纤维细胞可进行传代培养,通过核移植都可得到多个重组胚胎,再经胚胎移植培育出很多转基因绵羊,因此采用胎儿成纤维进行转基因体细胞克隆,理论上可获得无限个转基因绵羊。(5)蛋白质工程的基本途径:从预期蛋白质功能出发设计预期的蛋白质结构推测氨基酸序列找到相应的脱氧核苷酸系列,据此获得基因,再经表达、纯化获得蛋白质,之后还需要对蛋白质的生物功能进行鉴定。22(10分)请回答下列有关基因工程的问题。下表是基因工程中几种限制酶识别序列及其切割位点。图是转基因香蕉的培育过程,含目的基因的外源dna和质粒上的箭头表示相关限制酶的酶切位点。从转基因香蕉培育图中反映了质粒作为运载体的特点是_ _,基因工程中还可以用_作为运载体。图中的质粒和目的基因构建重组质粒,不能使用smai酶切割,原因是_下图是用_(限制)酶进行切割得到的目的基因。可以防止含目的基因的外源dna片段切割后自身环化。人体细胞内含有抑制癌症发生的某基因,生物技术可对此类基因的变化进行检测。该基因含有800对碱基对(bp),用bamh切割得到的400bp,200bp,200bp,.用ecor再次切割得到100bp,300bp,150bp,50bp,200bp.而患者体内获取的这段基因,用bamh切割得到的区段变为400bp,400bp ,用ecor再次切割得到100bp,300
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