苏教版选修1 1.2 分离特定的微生物并测定其数量 课件（30张）.pptx

第二节分离特定的微生物并测定其数量 第一章无菌操作技术实践 1 掌握涂抹平板法或混合平板法 2 掌握利用选择培养基分离特定微生物的方法 3 观察各种微生物形成的菌落 学习目标 微生物种类多样 也有多种代谢类型 根瘤菌 为固氮菌 可固定空气中的氮气 假单孢杆菌 可以分解石油的超级细菌 尿素是一种重要的农业氮肥 人类和其他哺乳动物的尿中都含有尿素 大量尿素的存在会对环境造成污染 既然微生物有多种代谢类型 那么有没有能降解尿素的微生物呢 今天我们就试试能不能从土壤中分离出以尿素为氮源的微生物 菌落 单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时 就会形成一个肉眼可见的 具有一定形态结构的子细胞群体 叫做菌落 菌落是鉴定菌种的重要依据 菌落 细菌的菌落特征因种而异 1 实例 dna多聚酶链式反应是一种在体外将少量dna大量复制的技术 此项技术要求使用耐高温 93 的dna聚合酶 原因 因为热泉温度70 80 淘汰了绝大多数微生物只有taq细菌被筛选出来 一 筛选菌株 基础知识 要分离一种微生物 必须根据该微生物的特点 包括营养 生理 生长条件等 方法 1 抑制大多数微生物不能生长 2 造成有利于该菌生长的环境 结果 培养一定时间后 该菌数量上升 再通过平板稀释等方法对它进行纯化培养分离 2 实验室中微生物的筛选原理 培养基的氮源为尿素 只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素 以尿素作为氮源 缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素 缺乏氮源而不能生长发育繁殖 而受到抑制 所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物 3 培养基选择分解尿素的微生物的原理 1 显微镜直接计数 利用血球计数板 在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量 不能区分死菌与活菌 不适于对运动细菌的计数 需要相对高的细菌浓度 个体小的细菌在显微镜下难以观察 缺点 二 统计菌落数目 2 间接计数法 活菌计数法 1 原理 在稀释度足够高时 微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的 即一个菌落代表原先的一个单细胞 2 常用方法 稀释涂布平板法 每克样品中的菌落数 c v mc代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数 v代表涂布平板时所用的稀释液的体积 ml m代表稀释倍数 计数法 直接计数法平板计数法比浊法膜过滤法 1 哪些土壤中含有这种以尿素为氮源微生物多 2 此实验用到的选择培养基需含有哪些物质 3 可用什么指标认定不同土壤中选择出的微生物对尿素分解能力的高低 没硬化 腐殖质丰富的土壤 碳源 尿素 无机盐 水 酚红 培养基红色的深浅 三 实验中涉及的问题 5 用稀释涂布平板法计数时 菌落数在30 300 20以内 计数 重复性原则 对照原则 做一系列浓度梯度实验 探究合适的稀释度 6 实验设计要遵循的原则 4 统计微生物的数量可用哪些方法 稀释涂布平板法 显微镜直接记数法 从肥沃 湿润的土壤中取样 先铲去表层土3cm左右 再取样 将样品装入事先准备好的信封中 取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌 微生物的天然培养基 数量最大 种类最多 大约70 90 是细菌 一 土壤取样 实验操作 1个50ml无菌水2个4 5ml无菌水 得10 210 3 10 4的菌悬液 0 5g土壤 制备选择培养基 尿素为唯一氮源 制备牛肉膏蛋白胨培养基 对照作用 思考 为什么还要制备牛肉膏蛋白胨培养基 二 制备培养基 应在火焰旁称取土壤10g 在稀释土壤溶液的过程中每一步都要在火焰旁进行 分离不同的微生物采用不同的稀释度原因 不同微生物在土壤中含量不同目的 保证获得菌落数在30 300之间 适于计数的平板 三 样品的稀释 为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度 测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量 选用的稀释范围相同吗 原因 土壤中各类微生物的数量 单位 株 kg 是不同的 例如在干旱土壤中的上层样本中 好氧及兼性厌氧细菌数约为2185万 放线菌数约为477万 霉菌数约为23 1万 结论 为获得不同类型的微生物 就需要按不同的稀释度进行分离 同时还应当有针对性地提供选择培养的条件 取0 1ml菌悬液 四 取样涂布 高浓度 低浓度 换枪头 低浓度 高浓度 可不用换枪头 接种 涂布分离 在菌落计数时 每隔24h统计一次菌落数目 选取菌落数目稳定时的记录作为结果 以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目 培养不同微生物往往需要不同培养温度 细菌 30 37 培养1 2d放线菌 25 28 培养5 7d霉菌 25 28 的温度下培养3 4d 五 微生物的培养与观察 按浓度捆成一摞 恒温37 培养 菌落 微生物计数方法活菌计数 样品稀释度足够高时 培养基表面只生长1个菌落 来源于样品稀释液中的1个活菌 根据平板上菌落数 推测样品中大约含有多少活菌 结果一般用菌落数而不是活菌数表示 显微观察计数 红细胞计数板 观察数量 再根据浓度比例计算出菌体数量 a 1 对细菌群体生长规律测定的正确的表述是 a 在液体培养基上进行b 至少接种一种细菌c 接种一个细菌d 及时补充消耗的营养物质 随堂练习 d 2 能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是 a co2和n2b 葡萄糖和nh3c co2和尿素d 葡萄糖和尿素 3 下列说法不正确的是 a 科学家从70 80度热泉中分离到耐高温的taqdna聚合酶b 统计某一稀释度的