人教版选修1 2.1 微生物的实验室培养 课件（36张）.pptx

专题二微生物的培养与应用 课题一微生物的实验室培养 微生物的类群 原核类 真核类 非细胞类 细菌 支原体 放线菌 蓝藻 个体微小 结构简单 酵母菌 霉菌 食用菌 真菌 单细胞的动植物 草履虫 变形虫 藻类等 病毒等 微生物的共同特点 基础知识 1 概念 人们按照微生物对营养物质的不同需求 配制出供其生长繁殖的营养基质 2 类型 按物理性质划分 按化学成分划分 按用途划分 一 培养基 不加凝固剂 加凝固剂 如琼脂 大量繁殖 观察微生物的运动 分类鉴定 微生物分离 鉴定 活菌计数 保藏菌种 液体培养基 半固体培养基 固体培养基 最常用 区别 加入琼脂的量决定培养基的物理状态 琼脂的性质 不会被微生物利用 对微生物无害 灭菌过程中不会被破坏 透明度好 凝固力强 天然物质 成分不明确 培养基成分明确 选择培养基 允许某种特定种类的微生物生长 又能抑制或阻止其他微生物生长 根据微生物的代谢特点 在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成 用以鉴别不同种类的微生物 如 在培养基中加入伊红和美蓝 可以用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌 3 培养基的营养物质 1 水 2 碳源 提供碳元素的物质 3 氮源 提供氮元素的物质 4 无机物 无机盐 思考 为何大多数培养基都含这4类物质 含有生物生长发育需要的基本元素 c h o n 1 碳源 可作为碳源的物质有 a 含碳无机物 b 含碳有机物 蛋白质 脂肪酸 根据碳源的种类判断微生物同化作用是自养还是异养a 异养型微生物的碳源为b 自养型微生物的碳源为 碳酸盐 碳酸氢盐 二氧化碳 糖类 主要 含碳有机物 有机碳 含碳无机物 无机碳 2 氮源 可作为氮源的物质有 a 含氮无机物 b 含氮有机物 蛋白胨 牛肉膏 尿素 氮气 氨气 硝酸盐 铵盐 注意 蛋白胨 牛肉膏即可作碳源也可作氮源 想一想 关于培养基 1 同一种物质不可能既作碳源又作氮源 2 凡是碳源都能提供能量 3 固体培养基加少量水即可制成液体培养基 4 无机氮源也能提供能量 4 配制原则 1 目的明确 2 营养协调 3 ph适宜 根据微生物的种类 培养目的选择原料 霉菌等真菌 酸性细菌 中性或微碱 微生物生长不可缺少的微量有机物如 维生素 乳酸杆菌 氨基酸 碱基等 4 特殊营养 5 氧气 厌氧生物 无氧需氧生物 有氧 二 无菌技术 1 对实验操作的空间 操作者的衣着和手 进行 2 将用于微生物培养的器皿 接种用具和培养基等器具进行 3 为避免周围环境中微生物的污染 实验操作应在 4 实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品 清洁和消毒 灭菌 1 目的 防止 同时避免操作者自身被微生物感染 被其他微生物污染 酒精灯火焰附近进行 相接触 接种室内空气 接种箱 工作台 紫外线消毒 实验者的手臂 工作台等 化学药剂消毒 牛奶等不宜高温消毒灭菌的 巴氏消毒 日常食物 罐装食品 煮沸消毒法 适用范围 方法 2 无菌的方法 消毒 消毒 温和的理化因素杀死物体内外的部分微生物 不含芽孢 孢子 培养基 培养皿 实验器材 高压蒸汽灭菌 耐高温需干燥的物品 玻璃器皿等 干热灭菌 接种的工具 试管口 瓶口 灼烧灭菌 适用对象 灭菌方法 2 无菌的方法 灭菌 灭菌 强烈的理化因素杀死物体内外的全部微生物 含芽孢 孢子 微生物培养的实验操作 制备培养基 纯化大肠杆菌 一 细菌培养基的配制 1 计算 100ml蒸馏水中各物质的量 2 称量 注意牛肉膏的粘稠度大 易受潮 3 溶化 牛肉膏连同称量纸一同放入 不断加热搅拌4 灭菌 加棉塞 包上牛皮纸 并用皮筋勒紧 再放入高压灭菌锅 5 倒平板 培养基冷却到50 左右时 在酒精灯附近倒平板 1 2 3 4 倒平板技术 1 培养基灭菌后 需要冷却到50 左右时 才能用来倒平板 你用什么办法来估计培养基的温度 用手触摸 刚刚不烫手时 2 为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰 灼烧灭菌 防止瓶口的微生物的污染 思考 防止皿盖上的水珠落入培养基 造成污染 3 为什么将平板倒置 4 在倒平板的过程中 不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位 这个平板还能用来培养微生物吗 最好不要用该培养基培养微生物 二 纯化大肠杆菌 接种常见方法 平板划线法 操作核心 防止杂菌污染 保持培养物纯度 稀释涂布平板法 斜面接种 1 平板划线法 分区划线法 连续划线法 1 概念与原理 聚集的菌群 连续划线 稀释分散 单个细胞 菌落 生长繁殖 1 灼烧接种环 直至将接种环 2 在 旁冷却接种环 并打开棉塞 3 试管口通过火焰 4 将已 的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液 6 将皿盖打开一条缝隙 将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内 划 条平行线 盖上皿盖 注意不要划破培养基 5 试管通过火焰 并塞上棉塞 火焰 冷却 三至五 7 灼烧接种环 待其冷却后 从第一区域划线的 开始往第二区域内划线 重复以上操作 在三 四区域内划线 末端 烧红 8 将平板 放入培养箱中培养 倒置 两区不可相连接 第一步灼烧接种环 避免接种环上可能存在的微生物污染培养物 每次划线前灼烧接种环 为了杀死上次划线结束后 接种环上残留的菌种 最后划线结束后仍要灼烧接种环 能及时杀死接种环上残留的菌种 避免细菌污染环境和感染操作者 1 为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环 在划线操作结束时 仍然需要灼烧接种环吗 为什么 思考 2 在灼烧接种环之后 为什么要等其冷却后再进行划线 以免接种环温度太高 杀死菌种 3 在作第二次以及其后的划线操作时 为什么总是从上一次划线的末端开始划线 划线后 线条末端细菌的数目比线条起始处要少 每次从上一次划线的末端开始 能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少 最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落 划线后培养一段时间后 2 稀释涂布平板法 菌液的梯度稀释 涂布平板操作 1 概念与原理 聚集的微生物 单个细胞 菌液梯度稀释 菌落 涂布平板 2 操作 生长繁殖 菌液的梯度稀释 1 将分别盛有9ml水的6支试管灭菌 并按101 106的顺序编号 2 用移液管吸取1ml培养的菌液 注入第二支试管中 用手指轻压移液管上的橡皮头 吹吸三次 使菌液与水充分混匀 3 从101倍稀释的试管中吸取1ml稀释液 注入102倍稀释的试管中 重复第2步的操作 依次类推 直到完成最后一支试管的稀释 注意 移液管需要经过灭菌 操作时 试管口和移液管离火焰1 2cm处 涂布平板操作 接种后的培养基 未接种培养基 空白对照 放入37 恒温箱中培养12h 24h 3 培养 3 实验结果观察 未接种的培养基表面是否有菌落生长 菌落的形态 大小 颜色 4 菌株的保存方法 固体斜面 1 临时保藏 试管固体斜面培养基上 4 冰箱保存 2 长期保存 菌种易被污染 变异 甘油管藏 20 冷冻箱中 3 6个月 转移培养 1 下列关于配制培养基的有关叙述中 正确的是 a 制作固体培养基必须加入琼脂b 一般常用的是固体培养基c 氮源主要是为微生物提供能量d 牛肉膏只为微生物提供氮元素 b 随堂练习 2 下列操作与消毒和灭菌