临床免疫学与检验重要知识点汇总.doc

简述抗原抗体反应的原理。答：抗原与抗体能够特异性结合是基于抗原表位与抗体超变区分子间的结构互补性与亲和性，这种特性是由抗原、抗体分子空间构型所决定的，它们之间的结合是抗原表位与抗体超变区沟槽分子表面的结合简述抗原抗体反应的类型。答：抗原抗体反应分为五种类型：颗粒性抗原与相应抗体结合所产生的凝集反应；可溶性抗原与相应抗体结合所产生的沉淀反应；抗原抗体结合后激活补体所致的细胞溶解反应；细菌外毒素或病毒与相应抗体结合所致的中和反应；免疫标记的抗原抗体反应等。影响抗原抗体反应的环境条件有哪些?在实验中如何控制这些条件因素?答：环境条件包括：电解质，酸碱度和温度。稳定条件：电解质：常用O85氯化钠或各种缓冲液作抗原及抗体的稀释液及反应液；酸碱度：pH过高或过低都将影响抗原与抗体的理化性质，抗原抗体反应一般在pH为68时进行；温度：一般以15，40为宜，最佳反应温度为37。简述单克隆抗体制备技术的主要步骤。单克隆抗体是应用B细胞杂交瘤技术进行制备的，其主要操作步骤包括抗原免疫、亲本细胞的选择和制备、细胞融合、杂交瘤细胞的筛选和克隆化、杂交瘤细胞体内接种或体外增量培养、单克隆抗体的纯化与鉴定。试述免疫血清应如何进行纯化。免疫血清的纯化主要是指提纯免疫血清中的IgG并去除无关的杂抗体。提纯IgG类抗体的方法有：硫酸胺盐析法粗提、离子交换层析法和亲和层析法，采用亲和层析法提取IgG时，可使用纯化抗原或葡萄球菌蛋白A交联sephamse 4B制成层析柱。另外，还可通过吸附法获得单价特异性抗血清。方法是将不含特异性抗原的杂抗原与戊二醛等双功能试剂混合制成固相吸附剂，以吸附免疫血清中的杂抗体，或将杂抗原交联于sephamse 4B上，通过亲和层析去除杂抗体。叙述杂交瘤技术的基本原理。杂交瘤技术是在细胞融合技术的基础上，将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。这种杂交瘤细胞具有两种亲本细胞的特性，即既能够分泌抗体又能在体外长期繁殖，经过克隆化后成为单个细胞克隆，分泌的抗体即为单克隆抗体。简述间接血凝试验的基本原理。间接血凝试验是将可溶性抗原(或抗体)吸附于人的0型红细胞或绵羊、家兔的红细胞制成抗原致敏的红细胞，与相应抗体(或抗原)作用，在有电解质存在的条件下，经过一定时间可出现肉眼可见的红细胞凝集现象，又称被动血凝试验简述抗人球蛋白试验的原理(又称Coombs试验)、类型及其在临床上的应用。Coombs试验又称抗人球蛋白试验，其原理是不完全抗体多半是7S的IgG类抗体，能与相应的抗原牢固结合，但在一般条件下不出现可见反应，利用抗球蛋白抗体作为第二抗体，连接与红细胞表面抗原结合的特异抗体，可使红细胞凝集。 Coombs试验有二种类型：(1)直接Coombs试验：用于检测红细胞结合的不完全抗体。(2)间接Coombs试验：用于检测血清中游离的不完全抗体。抗球蛋白试验主要应用于那些方面？输血：对于“危险”受体（指曾经输血、肌肉注射过血液制品或母子间血型不合的妊娠而可能产生免疫性血型抗体的人）的配血试验必须包括各种不完全抗体的检查，以抗球蛋白法最为可靠。血型抗原抗体的检查：主要检查Rh 者，其体内是否有抗-D抗体，应用抗球蛋白试验对外表为D 阴性的供体血液作常规检查。最可靠和灵敏的方法是将待检D 阴性的红细胞与高效价的不完全抗-D 血清混合，然后加抗球蛋白血清检查细胞上有无致敏抗体。对新生儿溶血性贫血性疾病的诊断：母体产生的最常见的免疫性抗体为Rh 抗体和ABO 抗体，一般为7S 的IgG，可通过胎盘屏障，作用于胎儿红细胞，引起新生儿溶血性疾病，可借抗球蛋白试验检出而采取预防性措施。对溶血性贫血的研究：获得性溶血性贫血患者大多数可借助该方法证实有自身红细胞的抗体存在。对细菌或立克次体的不完全抗体的检查。Coombs 试验还可采用专一性特异性的抗球蛋白的血清，如抗IgG 血清、抗IgM、抗IgA以及抗补体血清等，分析结合于红细胞上的不完全抗体免疫球蛋白的亚类。什么是协同凝集试验？主要用于何种检测？协同凝集试验与间接凝集反应的原理相类似，但所用的载体为金黄色葡萄球菌。这种细菌的细胞壁中含有A蛋白（SPA），SPA 能与特异性抗体IgG 的Fc段结合（IgG3除外）。抗体的F(ab)2 段暴露在葡萄球菌的表面，仍保持与相应抗原特异性结合的特性。当这种葡萄球菌与IgG抗体连接时，就成为抗体致敏的载体颗粒，若与相应抗原接触，即出现反向间接凝集反应。可用于细菌、病毒、毒素及各种可溶性抗原的检测。间接凝集反应如何进行分类？各试验的原理是什么根据致敏载体用的是抗原或抗体分为正向间接凝集试验和反向间接凝集试验；根据载体种类，分为间接血凝试验和胶乳间接凝集试验；根据反应方式分为间接凝集试验、间接抑制凝集试验和协同凝集试验。间接凝集试验是用抗原致敏载体检测标本中的相应抗体。将可溶性抗原与载体颗粒结合，再与标本中的抗体反应，通过抗体桥联，形成肉眼可见的凝集颗粒或凝集块，为阳性反应。反向间接凝集试验选用已知特异性抗体致敏载体检测标本中的相应抗原。用特异性抗体致敏颗粒，与样品中的待检抗原反应，通过抗原桥联，形成肉眼可见的凝集为阳性。临床上用于检测HbsAg、AFP 等。间接凝集抑制试验诊断试剂为已知抗原致敏的颗粒载体及相应的抗体，用于检测标本中与致敏抗原相同的抗原。将标本与抗体试剂相反应，然后加入致敏抗原，若出现凝集现象，说明标本中不存在相应抗原;如未出现凝集现象，则说明待检标本中含有相应抗原，凝集反应被抑制。同理，用抗体致敏载体颗粒及相应抗原作为诊断试剂，检测标本中的抗体，称为反向间接凝集试验。协同凝集试验与间接凝集反应的原理相似，但所用载体为金黄色葡萄球菌，该菌细胞壁上的SPA 能与特异性抗体的IgG 的Fc 段结合（IgG3除外），抗体的F(ab)2 段暴露在葡萄球菌的表面，仍能与相应抗原特异性结合。当这种葡萄球菌与IgG 抗体连接时，就成为抗体致敏的载体颗粒，若与相应抗原接触，即出现反向间接凝集反应。间接血凝试验是以红细胞作为载体的间接凝集试验，用已知的抗原或抗体致敏红细胞，然后与样品中的抗体或抗原在适宜条件下反应，出现红细胞凝集者为阳性。根据红细胞凝集的程度判断阳性反应的强弱。胶乳凝集试验是以聚苯乙烯胶乳微粒作为载体的间接凝集试验。HAT培养基筛选杂交瘤细胞的机制是什么？答：1.淋巴细胞：不能生长，5到7天死亡；DNA的主要合成途径被A阻断2.骨髓瘤细胞：不能生长，5到7天死亡；HGPRT缺乏，DNA合成的旁路途经受阻3.骨髓瘤细胞和脾细胞融合形成杂交瘤细胞，可长期生长繁殖。利用淋巴细胞的HGRT将合成为嘌呤碱并最终与一起合成从淋巴细胞获得产生某种抗体的遗传信息，从骨髓瘤细胞获得不断繁殖的能力决定抗原抗体最佳配比的方法有几种?(1)抗原稀释法：将可溶性抗原作一系列倍比稀释，然后向各管中加入一定浓度的适量抗血清，37反应后，产生的沉淀量随抗原量变化而不同，以沉淀物最多的管为最适比例管。(2)抗体稀释法：是将恒定量抗原与不同倍比稀释的抗体反应，出现沉淀物最多的管为抗体最适比例管。(3)棋盘格法：亦称方阵法。抗原抗体同时稀释，可一次完成抗原和抗体的滴定，并找出抗原、抗体的最适比是前二法的结合简述单向免疫扩散试验的基本原理和技术要点。(1)原理：待测抗原从局部含有定量抗体的凝胶内自由向周围扩散，抗原抗体特异性结合，在两者比例合适的部位，形成白色沉淀环，沉淀环的大小与抗原的浓度呈正相关。(2)技术要点：将抗体和热融化琼脂(约50)混合，倾注成平板。待凝固后在琼脂板上打孔，孔中加入已稀释的抗原液，和不同浓度的抗原标准品，置3712温箱，2448h后观察孔周围沉淀环。量取沉淀环直径，通过抗原标准品，计算待测抗原的浓度。在双向免疫扩散试验中，如何判定结果?双向免疫扩散中，出现沉淀线，表明存在相应的抗原、抗体，不出现沉淀线则表明缺乏抗原或抗体。沉淀线的形成是根据抗原抗体两者比例所致，沉淀线靠近抗原孔，提示抗体含量高；靠近抗体孔，提示抗原含量较多免疫电泳技术的优点是什么?免疫电泳有哪些用途?1)优点：免疫电泳技术是将免疫扩散和电泳相结合的一种免疫学分析技术，既有抗原抗体反应的高度特异性，又有电泳分离技术的快速、灵敏和高分辨力，广泛应用于牛物医学领域。(2)用途：纯化抗原或抗体的成分分析，分析其纯度；正常及异常体液中蛋白质成分的分析，如无丙种球蛋白血症、冷球蛋白血症、多发性骨髓瘤、白血病、系统性红斑狼疮、肝病等病人的血清蛋白成分的分析，多发性骨髓瘤血清M蛋白的检测和鉴定；免疫后不同抗体组分的动态变化研究对流免疫电泳时，抗体为什么流向负极?大部分蛋白质抗原在碱性溶液中带负电荷，电泳时从负极向正极泳动，而抗体IgG分子量大，暴露的极性基团较少，在缓冲液中解离的也少，向正极的泳动速度较慢，电泳时由电渗引向负极的液流速度超过了IgG向正极的泳动，带动抗体流向负极，使抗原和抗体定向对流并发生反应，出现肉眼可见的沉淀线。简述火箭免疫电泳的原理和主要用途。(1)原理：火箭免疫电泳是将单向免疫扩散和电泳相结合的技术。抗原在电场作用下，在含有适量抗体的琼脂糖凝胶中向正极泳动，逐渐形成梯度浓度，在抗原抗体比例适当时形成沉淀，随着抗原量的减少，沉淀带越来越窄，形成火箭峰样沉淀，峰形高低与抗原量呈正相关。用已知量标准抗原作对照，绘制标准曲线，根据检测样品沉淀峰的高度可算出待测抗原的含量。(2)主要用途：抗原蛋白定量，如IgA、IgG、IgM和sIgA检测；C3、C4及其裂解产物检测；AFP等检测。免疫浊度测定的基本原理是什么?有哪些类型?(1)基本原理：免疫浊度测定是将液相内的沉淀试验与现代光学仪器和自动分析技术相结合的一项分析技术。当可溶性抗原与相应的抗体特异结合，在二者比例合适、并有一定浓度的电解质存在时，可以形成不溶性的免疫复合物，使反应液出现浊度。这种浊度可用肉眼或仪器测知，并可通过浊度推算出复合物的量，即抗原或抗体的量。(2)类型：按测量方式可分为透射免疫比浊法和散射免疫比浊法。按测定速度可分为速率比浊法和终点比浊法。散射免疫比浊法的基本原理是什么?沿水平轴照射的一定波长的光，在通过溶液时，光线可被其中的免疫复合物粒子颗粒折射，发生偏转，产生散射光。根据Rayle培h散射方程，散射光强度与粒子(免疫复合物)的浓度和体积成正比，通过测量散射光的强度，可计算出待测抗原的浓度。速率散射比浊法中的“速率”是指什么?所谓速率是指单位时间内抗原与抗体反应的速度。抗原与抗体结合形成免疫复合物的速度，在每个单位时间内是不相同的，在抗体过量的情况下，随着反应时问的延长，免疫复合物的总量逐渐增加，通常在25s时出现一个反应最快的速率峰。峰值与抗原量呈正相关。免疫浊度测定的反应体系中，为什么必须始终保持抗体过量抗原和抗体的比例是浊度形成的关键因素，抗原和抗体必须在一个适当的浓度才会出现最高结合率。当抗原过量时，由于钩状效应，形成的免疫复合物分子小，而且会发生再解离，使浊度下降，光散射减少。当反应液中抗体过量时，免疫复合物的形成随着抗原量的增加而递增，光散射的强度也随之递增，因此，免疫浊度测定的反应体系中必须始终保持抗体过量，以保证免疫复合物的生成量与浊度的改变一致，这是免疫浊度测定的基本原则。单向琼脂扩散试验有那些影响因素？单向扩散试验有下列影响因素： 抗血清的亲和力、特异性、及效价。要求亲和力强，特异性好、效价高。注意存放的方法，防止效价下降。 标准曲线必须在每次测定时同时制作，绝不可一次作成，长期应用。 测定时必须加测质控血清，以保证定量的准确性。 有时出现扩散环呈现两重的双环现象，这是出现了抗原性相同的两个组分，其扩散率不同，例如重链病血清中出现的重链和正常的 IgA两种成分并存，皆与抗IgA 抗体发生反应，就形成内外两重环。 在单扩试验时，有时回出现结果与真实含量不符，这主要出现在 Ig 测定中。如用单克隆抗体或骨髓瘤纯抗原免疫动物获得的抗血清，都存在单一结合价的现象，若用此作为单扩试剂测量正常人的多态性抗原，则抗体相对过剩，是沉淀圈直径变小，测量值降低。 测得假阳性升高现象与上面相反，如用多克隆抗体测定单克隆病，则抗原相对过剩（单一抗原决定簇） ，致使沉淀圈呈不相关扩大，从而造成某一成分的伪性增加。 沉淀反应可应用在那些方面？沉淀反应主要应用于体液内包括血液、尿液、脑脊液、胸水、泪液、关节腔液等内的蛋白质（如MW1000050000，标本浓度为 1mg/L100g/L）测定，应用最广泛的是可以准确定量的免疫浊度法，也可用于药物的测定。 双向琼脂扩散试验的原理是什么？双向琼脂扩散试验的原理为可溶性抗原和抗体在含有一定电解质的琼脂凝胶板的对应孔中各自向对方扩散，在最适当的比例处形成抗原抗体沉淀线，根据沉淀线的位置、形状及对比关系，可作出对抗原或抗体的定性分析试对沉淀反应各类试验方法进行评价。沉淀反应可分为单向免疫扩散试验、双向免疫扩散试验、絮状沉淀试验、免疫浊度测定等试验。单向免疫扩散试验是一种稳定、简便、不需要特殊设备、一般试验室都可使用的常规方法。双向免疫扩散试验简单易行，结果可靠，特异性高，分辨率高于对流免疫电泳，成本低廉，结果可经染色干燥后长期保存；缺点是敏感性较低、扩散缓慢，能精确定量。免疫浊度法快速、敏感，最小检出量可达 ng 水平。检测范围广缺点是所用抗血清质量要求高，仪器须装电脑，价格较贵。絮状沉淀试验较实用、简便、不需要特殊设备一般试验室都可使用，但须稀释标本比较麻烦。放射免疫分析技术有何应用？答：放射免疫技术由于其测定的灵敏度高，特异性强，精密度好，而且可对半抗原和抗原测定以及测定仪器设备条件要求不高，因此广泛用于生物医学检验。常用于各种激素、微量半抗原、肿瘤标志物、药物等微量物质的测定。由于大多数检验项目均有 RIA 或 IRMA试剂盒供应，目前仍是基层单位对超微量物质测定的主要手段。试述放射免疫分析与免疫放射分析。 答：放射免疫分析（RIA）是放射免疫技术最经典的模式。它是以放射性核素标记抗原与反应系统中未标记抗原竞争性结合特异性抗体为基本原理来测定待检样品中抗原量的一种分析方法。而免疫放射分析（IRMA）是用放射性核素标记的过量抗体与待检测抗原直接结合，采用固相免疫吸附载体分离结合与游离标记抗体的非竞争性放射免疫分析。二者的异同点如下：标记物 RIA以放射性核素标记抗原；IRMA 则是标记抗体。反应速率 IRMA 反应速度比RIA 快。反应原理 RIA为竞争抑制性结合，反应参数与待检抗原量成反相关；IRMA为非竞争结合，反应参数与待检抗原成正相关。特异性 IRMA 特异性较RIA高。灵敏度和检测范围 IRMA测定的灵敏度明显高于RIA，IRMA标准曲线工作范围较RIA宽12个数量级。其他 RIA 所用抗体为多克隆抗体，对亲和力和特异性要求较高，但用量很少；IRMA为试剂过量的反应，对抗体亲和力的要求不及 RIA，但用量大。此外，RIA 可以测量半抗原，但IRMA只能测定至少有两个以上表位的抗原。试述用于标记的荧光素应具备什么条件?DA用于标记的荧光素应符合以下要求：应具有能与蛋白质分子形成共价键的化学基团，结合后不易解离，而未结合者易清除；荧光效率高，与蛋白质结合后，仍能保持较高的荧光效率；荧光色泽与背景组织的色泽对比鲜明；与蛋白质结合后不影响蛋白质原有的生化与免疫学性质；标记方法简单、安全无毒；与蛋白质的结合物稳定，易于保存。试述荧光免疫显微技术基本原理。DA荧光免疫显微技术是以荧光显微镜为检测工具，用荧光素标记特异性抗体或抗抗体，检测固定组织细胞上的抗原或血清中的抗体，常用于定性和定位检查的一门技术。试述荧光免疫显微技术的临床应用。DA临床常应用于：血清中自身抗体的检测；各种微生物的快速检查和鉴定；寄生虫感染的诊断；白细胞分化抗原的检测。时间分辨荧光免疫测定法具有哪些优点?DA时间分辨荧光免疫测定法具有特异性强，灵敏度高，标准曲线范围宽，分析速度快，标记物制备较简便、有效使用期长，无放射性污染等优点，因此是很有发展前途的超微量物质免疫分析技术。目前临床检验中常用的荧光物质有哪些？DA目前临床检验中常用的荧光物质有：四乙基罗丹明、异硫氰酸荧光素、四甲基异硫氰酸罗丹明、Eu3+的螯合物等。简述荧光抗体的制备及纯化方法。DA荧光抗体的制备方法纯化方法有透析法、凝胶过滤法、有撑搅拌法及透析法。荧光抗体技术有哪些优缺点，在临床上有哪些应用？荧光抗体技术的优点：（1）能做到快速、敏感、定位。（2）Ag 和Ab 的特异性与形态的检查结合在一起；缺点：对组织细胞进行微细结构的观察做不到；标本不能永久保存，荧光有自然消退现象，需及时观察及对照相；有非特异性荧光的干扰。荧光抗体技术的应用：病毒学方面：病毒鉴定和病毒在感染cell内的定位；寄生虫学方面：用于寄生虫的诊断（鉴定、分型）；免疫学方面：研究、用于自身免疫病的诊断；细菌学方面：菌种鉴定和Ag结构的研究。用于标记的酶应符合哪些要求?DA(1)酶活性高，能对低浓度底物产生较高的催化反应率。(2)具有可与抗原、抗体共价结合的基团，标记后酶活性保持稳定，而且不影响标记抗原与抗体的免疫反应性。(3)酶催化底物后产生的信号产物易于判定或测量，且方法简单、敏感和重复性好。(4)酶活性不受样品中其他成分(内源性酶、抑制物)的影响；用于均相酶免疫测定的酶还要求当抗体与酶标抗原结合后，酶活性可出现抑制或激活。(5)酶、辅助因子及其底物均对人体无危害，理化性质稳定，且价廉易得。简述酶免疫技术的分类。DA(1)酶免疫技术按实际用途，分为酶免疫组化和酶免疫测定两大类。(2)按抗原抗体反应后是否需将结合的和游离的酶标记物分离，分为均相酶免疫测定和异相酶免疫测定，异相酶免疫测定又可分为固相酶免疫测定和液相酶免疫测定。简述均相酶免疫测定的原理。DA酶标抗原(AgE)与Ab结合形成AbAgE后，其中的酶(E)活性将减弱或增强。因此，不需对反应液中的AbAgE和AgE进行分离，直接测定反应系统中总酶活性的变化，即可推算出被测样品中Ag的含量。简述双抗体夹心法的原理。DA连接于固相载体上的抗体和酶标抗体，与待检抗原上两个不同的抗原决定基结合，形成固相抗体一抗原一酶标抗体复合物。由于反应系统中固相抗体和酶标抗体的量相对于待检抗原是过量的，因此复合物的形成量与待检抗原的含量成正比。测定复合物中酶作用于加入的底物后生成的有色物质量，即可确定待检抗原含量。斑点-ELISA有哪些优点?DA(1)NC膜吸附蛋白力强，微量抗原吸附完全，故检出灵敏度可较普通的EusA高68倍；(2)试剂用量较EusA省10倍；(3)操作简便，试验及结果判断不需特殊设备条件；(4)吸附抗原(抗体)或已有结果的NC膜可长期保存(-20可达半年)。简述ELISA的基本原理、方法类型及应用。DA(1)基本原理：抗原或抗体预先结合到某种固相载体表面；测定时，将受检样品(含待测抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按一定程序与结合在固相载体上的抗原或抗体起反应形成抗原或抗体复合物；反应终止时，固相载体上酶标抗原或抗体被结合量(免疫复合物)即与标本中待检抗体或抗原的量成一定比例；经洗涤去除反应液中其他物质，加入底物进行显色，最后通过定性或定量分析有色产物量即可确定样品中待测物质含量。(2)方法类型及应用：双抗体夹心法：用于检测抗原，适用于检测两个或两个以上抗原决定基的多价抗原；间接法：用于检测抗体；竞争法：用于抗原和半抗原的定量测定，也可对抗体进行测定；捕获法：用于血清中某种抗体亚型成分(如IgM)的测定。简述酶增强免疫测定技术的原理。DA具抗原及酶活性的Ag-E与Ab结合形成AgAb后，所标的酶(E)因与Ab接触紧密，空间位阻影响了酶的活性中心，酶活性受到抑制。加入未标记抗原(标准或样品中的Ag)后，Ag即与Ab叫竞争结合反应系统中限量的Ab形成AgAb复合物，从而使反应液中AgAb*(酶活性被抑制)的比例减少，具酶活性的游离AgE增多。最终测得的酶活性随着反应体系中未标记抗原(Ag)浓度升高而增强。简述免疫印迹法的原理。免疫印迹法由SDS-PAGE、蛋白质转印和酶免疫测定三项技术结合而成。抗原等蛋白样品经SDS处理后带负电荷，SDS-PAGE时从阴极向阳极泳动，分子量小者，泳动速度快；将凝胶中已经分离的蛋白质条带在电场作用下转移至硝酸纤维素膜上；将印有蛋白质条带的硝酸纤维素膜依次与特异性抗体和酶标第二抗体作用，加入能形成不溶性显色物的酶反应底物，使区带染色；根据电泳时加入的分子量标准，可确定各组分的分子量。何谓金免疫测定技术?简述其技术类型及原理。DA金免疫测定技术是指用胶体金颗粒作为标记物进行抗原抗体反应的一类免疫学测定技术，其主要技术类型有斑点金免疫渗滤试验和斑点金免疫层析试验。1)斑点金免疫渗滤试验：在以硝酸纤维素膜为载体并包被了抗原或抗体的渗滤装置中，依次滴加标本、免疫金及洗涤液，因微孔滤膜贴置于吸水材料上，故溶液流经渗滤装置时与膜上的抗原或抗体快速结合并起到浓缩作用，达到快速检测目的，阳性反应在膜上呈现红色斑点。2)斑点金免疫层析试验：是将胶体金标记技术和蛋白质层析技术相合的以硝酸纤维素膜为载体的固相膜免疫分析技术，滴加在膜一端的标本溶液受载体膜的毛细管作用向另一端移动，犹如层析一般，在移动过程中被分析物与固定于载体膜上某一区域的抗体或抗原结合而被固相化，无关物则越过该区域而被分离，然后通过胶体金的呈色条带来判读实验结果。免疫溶血试验的原理和用途。DA原理是补体能使已被抗体致敏了的红细胞发生溶血。免疫溶血试验所参与的成分有补体，抗原(SRBC)及抗体(溶血素)，这三种成分中如有两种是已知的就可测知第三个成分，稀释该成分可测定其效价或含量。如溶血素的滴定，溶血空斑试验，CH50试验，补体结合试验，抗补体试验等。如何进行补体单个成分的测定? DA补体单个成分可测其溶血活性或含量。测定溶血活性应先制备缺乏该补体单个成分的“补体试剂。而后利用免疫溶血试验的原理，将致敏红细胞与“补体试剂”混合，再加入待测血清，孵育后，溶血程度与待测血清中的该补体成分的溶血功能有关。测定含量可用已知抗体以单向琼脂扩散等方法进行。血清免疫球蛋白测定方法有那些？答：单向免疫扩散法：原理，优点：简单，条件要求低，但抗体需要高效价高特异性，灵敏度： mg/ml 免疫比浊法:原理，优点：检测结果准确，精密度高，耗时短，灵敏度高ug/ml免疫球蛋白IgG、IgA、IgM测定有何意义？答：IgG、IgA、IgM均升高则慢性疾病， IgG升高则多为细菌感染导致，新生儿血清IgM升高则常为宫内感染。单一Ig显著升高则多为免疫增殖病：多发性骨髓瘤，重链病、恶性淋巴瘤。Ig降低则体液免疫缺陷或联合免疫缺陷。某患者临床疑为细胞免疫功能缺陷，应做哪些检查以协助诊断？答：从以下几个方面检测1)皮肤试验 ，显示有迟发超敏反应能力，表示受试验者细胞免疫功能完善2)T细胞及其亚群检测，常采用荧光抗体检测T细胞表面标志分子CD3，CD4等3)T细胞功能检测，利用PHA刺激淋巴细胞增殖，转化来判断T细胞的功能简述原发性吞噬细胞缺陷病的发病机制主要包括哪几种？主要包括：吞噬细胞趋化和（或）粘附功能障碍。吞噬和杀菌功能障碍。单核吞噬细胞的特殊异常，如IgG Fc受体缺陷。简述AIDS的主要免疫学特征？免疫系统的CD4T淋巴细胞受HIV感染，使CD4T细胞受损而减少。单核-巨噬细胞、滤泡树突状细胞和朗格汉斯细胞亦可受HIV 感染而受损。进行性细胞免疫缺陷，继而体液免疫缺陷。B淋巴细胞可克隆激活伴免疫球蛋白增多。简述体液免疫缺陷的检测方法？有血清Ig 的测定，常用免疫扩散法和免疫比浊法。分泌型IgA 的测定，用单向免疫扩散或ELISA 等。同种血细胞凝集素测定。特异性抗体产生能力测定，疫苗接种后抗体产生的测定。抗IgA抗体的测定，测自身抗体。SmIg测定，检测B细胞数量和其成熟程简述细胞免疫缺陷的检测方法？有迟发性皮肤过敏反应试验，常为初筛试验。T细胞及其亚群的检测，为主要的试验测定CD3、CD4、CD8 分化抗原进行分类鉴定。E 玫瑰花结试验，现常用CD2 测定所代替。淋巴细胞增殖反应试验，为体外免疫功能试验，方法有形态法和同位素法。T细胞分泌产物功能测定，测定激活的T细胞和单个核细胞分泌的细胞因子。简述IDD免疫缺陷病的共同临床特点？对病原体的易感性强、常发生反复感染、严重感染，难以治愈。T细胞缺陷易发生病毒真菌和寄生虫感染。余缺陷病易发生细菌感染，尤以化脓感染为主。易发生恶性肿瘤和并发自身免疫病。临床表现和病理损伤有明显的多样性，症状各异，复杂多样，主要是累及多系统和多器官所致。简述IDD的常见发病原因？遗传基因异常，常表现为X 连锁隐性遗传和常染色体隐性遗传，显性遗传亦有，少见。中枢免疫器官发育障碍，由遗传或其他原因所致。免疫细胞内在酶的缺陷，如ADA、PNP、G-6-PD 缺乏所致。免疫细胞间调控机制异常，辅助不足或抑制过剩均可导致免疫缺陷。简述原发性B细胞缺陷病的主要免疫学和临床特征？本组疾病有三种主要免疫学和临床特征：全部Ig 缺失或极度降低，如Bruton 综合征。部分Ig缺失，如选择性Ig缺陷。Ig量正常，但在抗原刺激后无免疫应答，功能缺陷。叙述AIDS三大标志的主要免疫学检测？AIDS 检测主要是病毒标志、免疫标志和相关标志三大类。病毒标志主要是直接分离培养检测病毒或检出HIV 组分，P24、gp120 和gp160 的免疫印迹检测；免疫标志主要是检测HIV的抗原或抗体及T细胞，HIV抗体用ELISA测定为初筛试验，确认试验用免疫印迹法，亦可用PCR法。我国判定标准为：HIV抗体阳性：至少有两条膜（gp41/gp120/gp160）或至少有一条膜带与P24 带同时测定；HIV 抗体阴性：无HIV 抗体特异性条带出现；HIV 抗体可疑：出现特异性抗体带，但带型不足以确认阳性者，T 细胞检测减少，常1.5109/L。CD4+T细胞绝对值下降至（24）109/L，CD4/CD8比值1，还有Ig、免疫复合物等测定；相关标志是指与HIV感染、AIDS病情有关的检测，如有关微生物检测、白细胞、ESR等。叙述AIDS的主要发病机制？AIDS 的主要发病机制：HIV 感染后，主要是损伤CD4+T 细胞减少和功能缺陷而导致机体细胞免疫功能继而体液免疫功能全面障碍为其主要的发病机制。同时还损伤巨噬细胞、树突状细胞、B细胞和脑组织小胶质细胞，导致相应的功能障碍。HIV损伤T细胞是通过HIV外膜蛋白gp120 和gp41 与T细胞发生拈附、溶解、使病毒核心进入靶细胞，在靶细胞内进行复制，繁殖，最后以芽生方式破坏细胞膜而移出，进行感染扩散，从而破坏CD4+T细胞，导致免疫缺陷。论述流式细胞术在免疫学中的应用。1.淋巴细胞及其亚型的分析2.淋巴细胞功能的分析3.淋巴造血系统及白血病免疫分型4.肿瘤耐药基因分析5.AIDS检测中的应用6.自身免疫病相关HLA分析7.移值免疫中的应用何谓ANA，简述荧光免疫组化法(间接法)检测血清总ANA的原理。ANA即抗核抗体 ，指各种成分的抗体，是一种广泛存在的自身抗体，可与不同的细胞核反应，无器官特异性和种属特异性 间接法检测ANA原理：用小鼠肝切片或印片或HEP2细胞作为细胞核基质抗原，加待测血清，若含有ANA，则与细胞核基质抗原反应，再加荧光素标记的抗抗体(二抗)，结合一抗，在荧光显微镜下见到细胞核有荧光着色为阳性反应。 ANA有哪些种类，它们在SLE诊断中的价值如何？答：抗核抗体是一种广泛存在的自身抗体，主要包括，抗DNP抗体，抗DNA抗体， 抗ENA抗体，抗组蛋白抗体。约99%（86%100%）的活动期SLE病人ANA阳性，ANA阴性几乎可除外SLE的诊断。你知道哪些自身抗体，临床应用价值如何？答：1）ANA：在未经治疗的SLE患者中阳性率可达90%以上，其他自身免疫病也可阳性。可作为自身免疫病，尤其是SLE的筛选指标。2）抗Sm抗体：SLE的特征性标志抗体，是SLE重要诊断指标。3）抗dsDNA抗体： SLE的特征性标志抗体，是SLE重要诊断指试述自身免疫病的防治原则。答：自身免疫病的防治原则大致为：（1）预防和控制病原体的感染，避免因自身组织细胞的抗原性发生改变和交叉抗原诱发的免疫应答，同时也避免感染引起的抗原提呈细胞和T细胞的激活。（2）使用免疫抑制剂如环孢霉素A、FK-506、皮质激素、中药雷公藤治疗主要以抗体引起的自身免疫病，用Th2因子治疗主要以T细胞引起的身身免疫病。（3）特异性抗体治疗，如用抗CD3单抗，抗炎症性细胞因子单抗等。（4）疫苗激发免疫耐受。如口服II型胶原等自身预防和治疗类风温关节炎等试述系统性红斑狼疮，自身抗体的检测。答：疾病诊断相关的主要自身抗体:1抗核抗体2抗DNA抗体3抗磷脂抗体和抗血小板抗体4抗红细胞抗体5RF 6抗细胞质抗体自身免疫病的共同特征。1. 多数病因不明；2.有遗传倾向；3.患者以女性居多，并随年龄增加发病率有所增加；4.患者血清中游多种自身抗体或自身反应致敏淋巴细胞存在；5.疾病有重叠现象；6.病程一般较长，多迁延为慢性；7.病损局部可发现淋巴细胞，浆细胞，中性粒细胞等浸润；8.免疫抑制剂治疗可取的一定疗效。试述型超敏反应的发生机制答：型超敏反应的发生机制：型超敏反应是由于变应原再次进入体内后引发的超敏反应，其发生通常分三个阶段：（1）致敏阶段 在此阶段，变应原进入机体，刺激机体特异的B淋巴细胞，使其增殖分化为浆细胞，浆细胞分泌产生针对特异变应原的IgE抗体，此抗体吸附于肥大细胞和嗜碱性粒细胞上，使机体处于致敏状态。（2）发敏阶段 当有相同变应原再次进入机体时，与致敏靶细胞表面的IgE Fab段超变区特异性结合，触发靶细胞的细胞膜活化，使其脱颗粒及合成新的生物活性介质。（3）效应阶段 颗粒中的生物活性介质及新合成的生物活性介质作用于相应的效应器官，引起效应器官病理改变简单叙述型超敏反应的特点。答:型超敏反应的特点是： 具有明显的个体差异和遗传背景；反应发生快， 几秒至几十分钟内出现症状，恢复也较迅速；由结合在肥大细胞和嗜碱粒细胞上的IgE抗体所介导；通常反应发生后效应器官出现功能紊乱，而没有严重的组织细胞损伤；补体不参与该反应。I型超敏反应的免疫学检验方法有哪些？1）皮试检测变应原。2）免疫球蛋白检测：总IgE和 特异性IgE。3）嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞检测。以血型不合引起的输血反应为例，简述型超敏反应靶细胞损伤机制。答：抗ABO血型抗体多为IgM型(1分)，当血型不合进行输血时，血型抗体可与红细胞表面相应的血型抗原物质结合(1分)，通过三个机制溶解红细胞：抗体和补体介导的红细胞溶解(2分)，免疫调理作用(1分)，ADCC作用试述III型超敏反应发生机制。 答：III型超敏反应，IC沉积引起组织损伤的机制如下：（1）激活补体IC沉积可激活补体，产生C3a、C5a等过敏毒素，使趋化至局部的肥大细胞、嗜碱粒细胞脱颗粒，释放组胺等活性介质，造成血管通透性增加、渗出和局部水肿。同时吸引中性粒细胞聚集于IC沉积的部位。（2）中性粒细胞浸润趋化至IC沉积部位的中性粒细胞在吞噬IC时释放多种溶酶体酶，使血管基底膜和周围组织细胞民生损伤，造成以上中性细胞浸润为主的炎症。（3）血小板活化IC和C3b可使血小板在局部聚集并活化，释放血管活性胺类物质，使血管扩张、通盘性增加、加剧局部渗出和水肿，并激活凝血系统，形成微血栓，造成局部组织缺血、出血和坏死。Rh血型不符引起的新生儿溶血症属于哪一种类型的超敏反应性疾病?试述其发生机制。答:（1） Rh血型不符引起的新生儿溶血症为型超敏反应性疾病。（2）Rh血型不符引起的新生儿溶血症发生于Rh一母亲所怀的Rh胎儿，尤其多见于再次妊娠所分娩的新生儿。当首次妊娠分娩时，胎儿的Rh红细胞可进入母体，剌激母体产生抗Rh抗体。当再次妊娠仍为Rh胎儿时，母体产生的抗Rh抗体(IgG)即可通过胎盘进入胎儿体内， 与胎儿Rh红细胞结合，导致胎儿红细胞的破坏。从而引起流产或出生后的严重溶血现象，甚至死亡。单克隆抗体：是指仅识别单一抗原表位的B细胞杂交瘤产生的同源抗体，具有特异性强、效价高、生物活性单一、理化性状高度均一等特点。佐剂：是指先于抗原或与抗原一起注入机体，能够增强机体对该抗原的免疫应答或改变免疫应答类型的物质。基因工程抗体：是指应用DNA重组及蛋白工程技术对编码抗体的基因按不同的需要进行改造和装配，经导人适当的受体细胞后重新表达的抗体，主要包括人源化抗体、小分子抗体、双价特异性抗体和抗体融合蛋白等类型。双特异性抗体：又称双功能抗体，它不同于天然抗体，其两个抗原结合部位具有不同的特异性，可以同时与两种不同特异性的抗原发生结合。滴度(效价)：血清标本进行一系列倍比稀释后进行反应，以出现明显凝集反应的血清最高稀释度、即滴度(效价)。凝集反应：凝集反应是指细菌或红细胞等颗粒性抗原与相应抗体在适当条件下结合形成凝集的现象。现也指颗粒化抗原或抗体与相应抗体或抗原的反应。直接凝集反应：细菌、螺旋体和红细胞等颗粒抗原，在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集，称为直接凝集反应。凝集原：指凝集反应中的抗原。凝集素：指凝集反应中的抗体。试管凝集试验：是在试管内颗粒性抗原与相应抗体直接结合，在一定条件下，会出现肉眼可见的凝集现象。间接凝集反应：将可溶性抗原(或抗体)先吸附于适当大小的颗粒性载体表面，然后与相应抗体(或抗原)作用，在适宜的电解质存在的条件下，出现特异性凝集现象称间接凝集反应或被动凝集反应(passive agglutination test)。沉淀反应：沉淀反应是指可溶性的抗原和抗体特异性结合后，所形成的复合物以沉淀的形式出现。凝胶内沉淀试验：又称凝胶扩散，是将可溶性抗原与相应抗体分别放人凝胶内进行扩散，两者在比例合适的位置形成肉眼可见的沉淀线或沉淀环。免疫电泳：是凝胶电泳和凝胶扩散相结合。在电场作用下，位于琼脂凝胶中的抗原样品因各组分的电泳迁移率不同而彼此分开形成不同的区带。电泳结束后，在琼脂板中间所挖的长形槽内加人相应的抗血清，由于经电泳分离后的各种抗原成分在琼脂中呈放射状扩散，而抗体呈直线扩散，因而形成的沉淀线多呈弧状。对流免疫电泳：是在电场作用下的免疫双扩散。抗原向阳极移动，而抗体向阴极移动，在一定时间内，相向移动的抗原和抗体在两孔间相遇，在浓度比例适当处形成沉淀线。带现象: 在抗原抗体特异性反应时，生成结合物的量与反应物的浓度有关，当抗原与抗体达到最适比时， 沉淀物形成最多。 如果抗原或抗体极度过剩则无沉淀物形成，这种现象称为带现象。出现在抗原过量时，称为后带。出现在抗体过量时，称为前带。放射化学纯度：指单位标记物中结合于被标记物上的放射性占总放射性的百分率，一般要求大于 90%。比放射性 ：指单位化学量标记物中所含的放射性强度，也可理解为每分子被标记物平均所挂放射性原子数目，常用Ci/g，mCi/mg或Ci/mmol等单位表示。放射免疫分析 ：是该类技术最经典的模式。它是以放射核素标记抗原与反应系统中未标记的抗原竞争特异性抗体的基本原理来测定待检样品中抗原量的一种分析法。荧光免疫技术：是将抗原抗体反应的特异性与荧光物质检测的敏感性和直观性结起来的一种免疫分析技术。荧光效率：是指荧光物质将吸收的光能转变成为荧光的百分率。荧光寿命：指荧光物质被一瞬时光脉冲激发后产生的荧光随时间而衰减到一定程度时所用的时间。荧光的淬灭：指荧光分子在某些理化因素作用下、荧光分子的辐射能力受到激发光较长时间的照射后会减弱的现象。荧光素：是能产生荧光并能作为染料使用的有机化合物。荧光抗体：荧光素与特异性抗体以化学共价键的方式结合而成，是免疫荧光技术的关键试剂。非均相荧光免疫测定法：在抗原抗体反应后，先把Ab*Ag与Ab*分离，然后测定Ab*Ag或Ab*中的标记物的量，从而推算出标本中的Ag量，该方法称非均相荧光免疫测定法。均相荧光免疫测定法：在抗原抗体反应后Ab*Ag中的标记物失去荧光特性，则不需进行Ab*Ag与Ab*的分离，可以直接测定游离的Ab*量，从而推算出标本中的Ag量，该方法称为均相荧光免疫测定法。时间分辨荧光免疫测定：时间分辨荧光免疫测定是用镧系稀土元素螯合物(如螯合物)标记抗体或抗原，检测标本中的相应抗原或抗体的荧光免疫测定技术酶免疫技术：是指利用酶的高效催化和放大作用与特异性免疫反应结合而建立的一种标记免疫技术。封闭：是指在抗原或抗体包被ELISA板后，用15牛血清白蛋白或520小牛血清等再包被，以防止非特异性吸附。异相EIA：是指在酶免疫测定中，抗原抗体反应后，需分离游离的和与抗原(或抗体)结合形成复合物的酶标记物，然后对经酶催化的底物显色程度进行测定，再推算出样品中待测抗原(或抗体)的含量。包被：是指将抗原或抗体固相化的过程。均相酶免疫测定：是指抗原抗体反应平衡后，无需分离F和B，直接根据反应前后酶活性的改变进行待检物质的测定。肿瘤抗原: 肿瘤在发生、发展中产生的或过度表达的抗原物质。肿瘤相关抗原：非肿瘤细胞所特有的，正常组织或细胞也存在的抗原，含量在细胞癌变时明显增高。肿瘤特异性抗原：肿瘤细胞所特有的，正常组织或细胞不存在的抗原。封闭因子:一种小分子的多肽,可存在于肿瘤患者的血清中。体外培养时,它可抑制非特异性致有丝分裂因子,如植物血凝素或刀豆素A对淋巴细胞的转化移植(transplantation)：指健康细胞、组织或器官从其原部位移植到自体或异体的一定部位、用以代替或补偿机体所丧失的结构和功能的现代医疗手段。移植抗原：代表个体特异性的由MHC编码的HLA是引起排斥反应的同种抗原移植排斥反应(transplantation rejection)：针对移植抗原产生的引起移植物功能或受者机体损害的免疫应答。宿主抗移植物反应(host versus graft reaction, HVGR)：宿主针对供体组织或细胞的HLA抗原产生的移植排斥反应移植物抗宿主反应(graft versus host reaction, GVHR)：一定条件下移植物中的过客（免疫）细胞针对移植物产生的排斥反应。免疫缺陷(immunodeficiency):由遗传因素或其他原因导致的免疫系统发育或免疫应答障碍而导致的一种或多种免疫功能不全.免疫缺陷病:由免疫缺陷所致的各种临床综合特征的疾病.获得性免疫缺陷综合征 (AIDS)：，由HIV感染引起，因CD4+T细胞质和量的缺失，导致细胞免疫功能严重缺陷，临床上以反复机会感染、恶性肿瘤和中枢神经系统退行性变为主要特征。流式细胞术：是指借助流式细胞仪，精确、快速地对生物细胞的理化特性和生物学特性进行多参数定量分析，并对特定细胞群体分选的新技术。细胞分选：是指从细胞群体中将选定的细胞分离出来。荧光补偿技术：是指利用已知标准样品或根据细胞样品的生物学意义，合理设置各荧光信号之间的相互补偿值。M蛋白:单克隆免疫球蛋白，是B淋巴细胞或浆细胞单克隆异常增殖所产生的一种在氨基酸组成及顺序上十分均一的异常单克隆免疫球蛋白；冷球蛋白: 一组低温下发生沉淀，加温后又复溶的Ig。本-周蛋白（bence-Jones）:尿中游离的免疫球蛋白轻连。免疫增殖病（immunoproliferative disease）：LC异常增殖引起的疾病.自身免疫机体免疫系统对自身成分发生免疫应答的现象，为生理性免疫应答的一部分。 自身免疫病（ AID）因机体免疫系统对自身成分发生免疫应答而导致的组织损伤或功能紊乱，属于病理性免疫应答。抗核抗体（ ANA）：抗核酸抗原抗体，是一组将自身真核细胞的各种成分脱氧核糖核蛋白（DNP）、DNA、可提取的核抗原（ENA）和RNA等作为靶抗原的自身抗体的总称。类风湿因子（ RF）：自身免疫病人体内表达的抗自身变性IgG的IgM类抗体。隐蔽抗原：指体内在解剖位置上某些与免疫系统隔绝的成分，如眼组织、精子等。当外伤、手术和感染等情况下，释放并与机体免疫系统接触可以引起免疫应答，导致自身免疫病。超敏反应：又称为变态反应，是指机体对某些抗原初次应答后，再次接受相同抗原刺激时，发生的一种以机体生理功能紊乱或组织细胞损伤为主的特异性免疫应答。变应原：是指能够选择性地激活CD4Th2细胞及B细胞，诱导产生特异性IgE抗体应答，引起变态反应的抗原性物质。皮试：用少量抗原注射、挑刺或划痕等方法注入到受试者皮肤，用于变应原的检测。重链病：是由于浆细胞发生突变和异常增生，致使血清和尿中出现大量游离的无免疫功能的免疫球蛋白重链所导致的疾病。轻链病：是突变的单克隆浆细胞产生的大量轻链，血浆中轻链含量异常增加，增加的轻链从肾脏排泄，血和尿中可查及大量的轻链蛋白导致肾损伤和淀粉样病变的疾病。免疫球蛋白异常增生性疾病：由于浆细胞的异常增殖而导致的免疫球蛋白异常增生造成机体病理损伤的一组疾病。浆细胞异常增殖：单克隆浆细胞异常增生并伴有单克隆免疫球蛋白或其多肽链亚单位合成异常。单克隆抗体McAb 双特异性抗体BsAb 抗球蛋白试验Coombs试验 对流免疫电泳CIEP 火箭免疫电泳RIE免疫浊度测定ITM 绵羊红细胞SRBC 补体 complement 荧光免疫测定技术 FIA 异硫氰酸荧光素FITC时间分辨荧光免疫测定 TRFIA 时间分辨固相荧光免疫测定 DSLFIA 解离增强镧系发光分析 DELFIA酶放大镧系发光分析 EAIL 放射免疫分析 RIA 免疫放射分析 IRMA 酶联吸附试验ELISA 质量保证QA 发光酶免疫分析 LIEA 化学发光免疫分析CLIA 电化学发光免疫分析ECLIA 斑点免疫金渗滤试验DIGFA 外周单个核细胞 PBMC 聚蔗糖泛影葡胺分层液法 葡萄球菌A蛋白 SPA 酶联免疫斑点法 ELISpot 酶免疫印迹试验EIBT斑点酶免疫印记试验DIEFA 质量控制 QC 类风湿因子RF 类风湿关节炎 RA 口服激发试验 DBPCFC 系统性红斑狼疮SLE 促甲状腺激素受体抗体TSAR 长