1.沙门氏菌及检验.ppt

沙门氏菌及检验 概况 沙门氏菌引起人类的伤寒 副伤寒和食物中毒 并引起动物的沙门氏菌病 可由不同的方式污染食品 是重要的肠道致病菌 沙门氏菌的分布极广 种类繁多 是肠杆菌科中最复杂的菌属 按Kanffman White的分类标准有2200种以上的血清型 目前公认的分类方法是将沙门氏菌分为6个亚属 亚属 其中亚属 再分为 a和 b 绝大多数 99 沙门氏菌亚属 中的菌种 其余的亚属通常从冷血动物和环境中分离 偶尔引起人类致病 沙门氏菌主要通过污染食品和水源经口感染 引起沙门氏菌食源性疾病的主要食品是动物性食品如生肉 牛排 禽肉 动物内脏等 乳类和乳制品 蛋及蛋制品也可传播 从业人员的带菌在引起食物中毒中也不容忽视 引起食物中毒的菌型很多 主要有鼠伤寒 肠炎 猪霍乱汤卜逊及丙型副伤寒沙门菌 国外 以鼠伤寒沙门菌占第一位 我国鼠伤寒所致的食物中毒占29 5 具第一位 一 形态与染色 二 培养特性 沙门氏菌在胆硫乳琼脂 DHL琼脂 上典型特征 沙门氏菌在SS琼脂上典型特征 沙门氏菌在HE琼脂上典型特征 三 检验程序 四 生化试验及亚属的鉴定 沙门氏菌和志贺氏菌主要生化试验原理 试验方法 结果观察 1 三糖铁琼脂 肠道致病菌检查作初步筛检用 底层穿刺 斜面划线接种 37 培养24h 底层产酸表示葡萄糖发酵 变黄色 斜面产酸表示乳糖或蔗糖发酵 中段变黑表示产硫化氢 2 综合半固体 包括三项靛基质 尿素和动力 穿刺接种 37 培养1 2天 靛基质于上层滴加靛基质试剂 4 5滴 出现红色环为阳性 黄色为阴性 其原理是细菌分解蛋白胨中的色氨酸 生成靛基质 吲哚 与对二甲氨基苯甲醛作用形成玫瑰吲哚的红色 尿素 如被测细菌有尿素酶 可分解培养基中的尿素 产生大量的氨使培养基变碱 而使培养基变红色 培养基内有酚红指示剂碱性时为玫红色 动力的观察 如被测细菌有鞭毛即有动力 沿穿刺线扩散生长 即动力阳性 靛基质和尿素试验均属氨基酸和蛋白质代谢试验 3 氰化钾试验 即抑菌试验 氰化钾可以抑制某些细菌的呼吸酶系统 呼吸酶以铁卟啉为辅基 氰化钾能和铁卟啉结合 而使这些酶失去活性 使细菌的生长受到抑制 3 氰化钾试验 取37 24h的肉汤培养物一接种环至氰化钾培养基内 同时接种一环到不含氰化钾的同样培养基中作为对照 37 培养连续观察两天如有细菌生长培养基浑浊即为阳性 细菌不生长为阴性 对照应有菌生长 肠杆菌科中沙门氏菌 志贺氏菌为阴性 在鉴定上有重要价值 4 氨基酸脱羧酶试验 属氨基酸代谢试验细菌分解氨基酸使其脱掉羧基 生成胺和CO2的反应叫脱羧反应 细菌所产生的酶叫脱羧酶 氨基酸经脱羧产生的胺均可使培养基变碱可用指示剂显示出来 于被检测菌斜面上挑取培养物接种到氨基酸培养基及对照培养基 无氨基酸 37 培养1 2天 每天检查一次结果 黄色为阴性 仅发酵葡萄糖 对照为黄色 发酵葡萄糖产酸 氨基酸管从黄色变紫色为阳性 5 丙二酸盐 属碳源利用试验 当细菌可以利用丙二酸钠唯一碳源时 丙二酸钠被分解生成碳酸钠 使培养基变碱 用新鲜斜面培养物接种 37 培养48小时阳性者由绿色变为兰色 6 糖类分解试验 糖发酵试验 属糖类代谢试验细菌分解糖类系依靠细菌细胞所产生的各种酶类的作用 而这些酶类随细菌的种类不同而各不相同 故可利用此来鉴别细菌 糖发酵试验培养基常用的指示剂为溴甲酚紫或溴麝香草酚兰 最常用的是液体糖发酵管 如细菌利用该糖类使其发酵产酸 培养基由紫色变为黄色或绿色变为黄色为阳性 7 ONPG 半乳糖苷酶试验 糖类代谢试验利用邻硝基苯酚 半乳糖苷来测定 半乳糖苷酶 当培养基内有微量邻硝基苯酚产生时即可呈显著的黄色 自斜面上挑取满环细菌挑种到ONPG培养基内 37 培养1 3小时和24小时观察结果 如有该酶则于1 3天后培养基内有邻硝基苯酚的产生而呈黄色 如无此酶则24小时不变色 沙门氏菌为阴性 ONPG无法买到时可用5 乳糖代替 但应降低蛋白胨的含量为0 2 0 5 可以使大部分迟缓发酵的细菌于一天内发酵 8 枸橼酸盐利用试验 当细菌可以利用铵盐作为唯一氮源同时利用其作为唯一碳源时可在枸橼酸盐培养基上生长 分解枸橼酸钠生成碳酸钠使培养基变碱 将琼脂培养物做成盐水悬液接种一环于斜面上 37 培养4天 每天观察结果一次 阳性者斜面上有菌落生长 培养基从绿色转为兰色 沙门氏菌为阳性 志贺氏菌阴性 9 葡萄糖铵利用试验 当细菌可以利用铵盐作为唯一氮源且不需要尼克酸和氨基酸作为生长因子时可以在该培养基上生长 细菌生长时分解葡萄糖使培养基变酸 取培养物表面在盐水管内做成极稀的悬液 肉眼观察不见浑浊 以每一接种环内含菌数20 100之间为宜 将接种环重新灭菌后挑取菌液接种 同时再以同法接种普通斜面一支作对照37 培养24小时 本试验要求比较严格 阳性者葡萄糖铵斜面上有正常大小的菌落生长 阴性者不生长 但对照上生长良好 如在葡萄糖铵斜面上生长极微小的菌落可视为阴性结果 大肠埃希菌阳性 志贺氏阴性 可用此试验予以鉴别 10 七叶苷水解试验 糖代谢试验 细菌水解七叶苷生成葡萄糖和七叶素 七叶素与培养基内枸橼酸铁试剂的二价铁离子起反应生成黑色的化合物 自琼脂培养物接种与七叶苷培养基内 培养过夜观察结果 阳性反应时培养基变为棕黑色 志贺菌为阴性 11 氧化酶试验 氧化酶或称细胞色素氧化酶 是细胞色素呼吸酶系统的终末呼吸酶 此酶并不直接与氧化酶试剂起反应 而是首先使细胞色素C氧化 然后此氧化型的细胞色素C使对苯二胺氧化 产生颜色反应 取洁净滤纸一角沾取试验菌少许 加试剂1滴 阳性者立刻呈粉红色 5 10秒内呈现紫色反应为氧化酶阳性 沙门菌 志贺菌阴性 弧菌属细菌阳性 五 血清学凝集试验 六 噬菌体裂解试验 噬菌体是寄生于细菌的病毒 它们随同细菌分布于自然界中 噬菌体对于它们的宿主细菌具有一