岛津高效液相色谱仪器详细操作说明书.doc

岛津高效液相色谱仪器详细操作说明书目的:规范岛津LC-10AT型高效液相色谱仪器的使用。范围:适用于岛津LC-10AT型高效液相色谱仪器的使用。职责:质检员对本规程(岛津高效液相色谱仪器详细操作说明书)的实施负责。一、岛津高效液相色谱仪器(LC-10AT型)详细操作说明书:系统组成本系统由2个LC-10ATvp溶剂输送泵（分主/A泵和副/B泵）、Rheodyne 7725i手动进样阀、SPD-10Avp紫外-可见检测器、N2000色谱数据工作站和电脑等组成，另外还包括打印机、不间断电源等辅助设备。二、岛津高效液相色谱仪器(LC-10AT型)详细操作说明书:准备1 、准备所需的流动相，用合适的0.45m滤膜过滤，超声脱气20min。2 、根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱（注意方向）和定量环。3、 配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用合适的0.45m滤膜过滤。（注意腐蚀性与有机系的的溶剂）4 、检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。接通电源，依次开启不间断电源、B泵、A 泵、检测器，待泵和检测器自检结束后，打开打印机、电脑显示器、主机，最后打开色谱工作站。四、岛津高效液相色谱仪器(LC-10AT型)详细操作说明书:参数设定1、波长设定：在检测器显示初始屏幕时，按func键，用数字键输入所需波长值，按Enter键确认。按CE键退出到初始屏幕。2 、流速设定：在A泵显示初始屏幕时，按func键，用数字键输入所需的流速（柱在线时流速一般不超过1ml/min），按Enter键确认。按CE键退出。3 、流动相比例设定：在A泵显示初始屏幕时，按conc键，用数字键输入流动相B的浓度百分数，按Enter键确认。按CE键退出。4、梯度设定：4.1 在A泵显示初始屏幕时，按edit键，Enter键；4.2 用数字键输入时间，按Enter键，重复按func键选择所需功能（FLOW设定流速，BCNC设定流动相B的浓度），按Enter键，用数字键输入设定值，按Enter键；4.3 重复上一步设定其它时间步骤；4.4 用数字键输入停止时间，重复按func键直至屏幕显示STOP，按Enter键。按CE键退出。五、岛津高效液相色谱仪器(LC-10AT型)详细操作说明书:更换流动相并排气泡1.将A/B管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中；2.逆时针转动A/B泵的排液阀180，打开排液阀；3.按A/B泵的purge键，pump指示灯亮，泵大约以9.9ml/min的流速冲洗，3min（可设定）后自动停止；4.将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀。5.如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。6.如按以上方法不能排尽气泡，从柱入口处拆下连接管，放入废液瓶中，设流速为5ml/min，按pump键，冲洗3min后再按pump键停泵，重新接上柱并将流速重设为规定值。六、岛津高效液相色谱仪器详细操作说明书:平衡系统1、查看基线：1.1 按色谱数据工作站操作规程打开“在线色谱工作站”软件，1.2 输入实验信息并设定各项方法参数后，1.3 按下“数据收集”页的 按钮。2 、等度洗脱方式2.1 按A泵的pump键，A、B泵将同时启动，pump指示灯亮。用检验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积的流动相。2.2 检查各管路连接处是否漏液，如漏液应予以排除。2.3 观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过1MPa。如超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡，按检查管路后再操作。2.4 观察基线变化。如果冲洗至基线漂移0.01mV/min，噪声为0.001mV时，可认为系统已达到平衡状态，可以进样。3 、梯度洗脱方式3.1 以检验方法规定的梯度初始条件，按2项下方法平衡系统。3.2 在进样前运行12次空白梯度。方法：按A泵的run键，prog.run指示灯亮，梯度程序运行；程序停止时，prog.run指示灯灭。 七、岛津高效液相色谱仪器详细操作说明书:进样1 、进样前按检测器zero键调零，按软件中 零点校正 按钮校正基线零点，再按一下 查看基线 按钮使其弹起。2 、用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取适量即可以进样了。3、含量测定的对照溶液和样品供试溶液每份至少注样2次 。八、岛津高效液相色谱仪器详细操作说明书:谱图的判断 及结果计算1、内标法 用含对照品和内标物质的对照溶液所得色谱峰响应值，按下式算出校正因子（f）：其中 As和Ar分别为内标物质和对照品的峰面积或峰高，ms和mr分别为加入内标物质和对照品的量。2、外标法： 用含对照品的对照溶液所得色谱峰响应值，按下式计算比值（r）：r=mr/Ar（其中 mr和Ar分别为对照品的量和相应的峰面积或峰高。）再根据供试品溶液的色谱峰响应值，计算供试品中被测成分的含量（mi）：mi=rAi（其中 Ai为供试品溶液中被测成分的峰面积或峰高）。必要时，再根据稀释倍数、取样量和标示量折算成标示量的百分含量，或根据稀释倍数、取样量折算成百分含量。九、岛津高效液相色谱仪器详细操作说明书:清洗管路及进样口1、分析完毕后，先关检测器和数据处理机，再用经滤过和脱气的适当溶剂清洗色谱系统，正相柱一般用正已烷，反相柱如使用过含盐流动相，则先用水，然后用甲醇-水冲洗，冲洗前先按（4.1.14.1.2）操作，再用分析流速冲洗，各种冲洗剂一般冲洗1530分钟，特殊情况应延长冲洗时间。2、冲洗完毕后，逐步降低流速至0，关泵，进样器也应用相应溶剂冲洗，可使用进样阀所附专用冲洗接头。3 、关断电源，作好使用登记，内容包括日期、检品、色谱