致病因子列表-程苏云.DOC

致病因子采样时间标本名称生物安全等级保存条件检测项目细菌鼠疫杆菌发病早期血、痰、淋巴穿刺物第二类分离血清4保存送检，其它标本实施现场接种或4保存。 镜检、病原分离培养、接种动物分离病原、血清学试验、核酸检测.霍乱弧菌（Vibrio cholerae）a.O1或O139型使用抗生素之前粪便或肛拭子、血第二类分离血清4保存送检，粪便或肛拭子标本置碱性胨水送检。镜检、病原分离培养，毒力基因检测、毒素检测、血清学检验b.非O1和非O139型使用抗生素之前粪便或肛拭子、血第二类分离血清4保存送检，粪便或肛拭子标本置碱性胨水送检镜检、病原分离培养，毒力基因检测、毒素检测、血清学检验伤寒沙门菌 （Salmonella typhi）发病早期，未使用抗生素之前粪便或肛拭子、血第三类血液标本实施现场接种，粪便或肛拭子置SF或SC增菌管送实验室培养分离。分离血清4保存送检病原分离培养、血清学检验，志贺菌（Shigella spp.）未使用抗生素之前粪便或肛拭子第三类粪便或肛拭子置SF或GN增菌管送实验室培养分离。病原分离培养、血清学检验脑膜炎奈瑟氏菌未使用抗生素之前血液、脑脊液、咽拭子第三类标本实施现场接种，分离血清4保存送检。镜检、病原分离培养、血清学检验、核酸检测流感嗜血杆菌(Haemophilus.influenzae)未使用抗生素之前脑脊液痰液血液耳、鼻、咽拭子脓液、关节液、胸腹水第三类标本实施现场接种，分离血清4保存送检。涂片染色检查：脑脊液、胸腹水和关节液病原分离培养核酸PCR检测bexA基因肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae）未使用抗生素之前咽峡部悬雍垂后 方，涂抹采取标本痰液、脓液、脑脊液和血液第三类标本实施现场接种，分离血清4保存送检。病原与分离接种荚膜染色印度墨汁法核酸PCR检测CpsB基因军团菌未使用抗生素之前:痰、肺或其它组织和气管灌洗液血液标本其它部分如脾、肾、小肠和粪便，有时也能检出军团菌第三类标本，均应放置于一无菌、干燥、螺帽封口的容器内，标本仍须尽快送实验室，如标本需放置30min以上时应将标本放4处；如放置2448小时，则应放20或更低温度。应注意避免反复冻融。病原分离接种血清学检测PCR检测：以全军团菌属5s rRNA和嗜肺军团菌mip基因的特异序列作为引物进行扩增布氏杆菌(brucella)未使用抗生素之前血液、骨髓、关节液第二类室温下运转送检病原分离培养、血清学检验、核酸检测空肠/结肠弯曲菌(campylobacter jejuni/coli)发病早期，未使用抗生素之前粪便或肛拭子、血第三类两名以上病例粪便和/或可疑食物中检出相应病原菌镜检、病原分离培养、血清学检验、核酸检测出血性大肠杆菌（Enterohemorrhagic）发病早期第三类两名以上病例粪便和/或可疑食物中检出O157H7菌或其它产志贺祥毒素的大肠杆菌产肠毒素性大肠杆菌（Enteroinvasive，ETEC）发病早期，未使用抗生素之前第三类两名以上病例粪便中检出响应血清型且能产生耐热和/或不耐热肠毒素的病原菌致病性大肠杆菌（Enteropathogenic，EPEC）发病早期，未使用抗生素之前第三类两名以上病例粪便中检出响应血清型的病原菌侵袭性大肠杆菌（Enteroinvaeive，EIEC）发病早期，未使用抗生素之前第三类两名以上病例粪便中检出相应血清型的病原菌小肠结肠炎型耶尔森菌（Yersinia enterocolitica）发病早期，未使用抗生素之前两名以上病例粪便和/或可疑食物中检出制病性的相应的病原菌株第三类炭疽杆菌急性期双期血清血、组织标本第二类标本应带冰在24小时内运送至实验室，并及时进行标本处理显微镜检查细菌分离培养血清学检查毒力质粒和基因的PCR检测病毒甲肝病毒发病早期采便，越早越好。急性期采血，新鲜粪便标本，血清第三类标本应带冰在24小时内运送至实验室，并及时进行标本处理，如不能马上进行检测，需-20保存，尽快进行检测。病毒分离、免疫电镜、用ELISA法或放免法检测抗HAV IgM、用分子杂交法或PCR法可从粪便中检出HAV RNA乙肝病毒不同期血均可血清第三类分离血清置4待检。常用ELISA或放免法检测、分子杂交法或PCR法检测丙型肝炎不同期血及早期血血清第三类分离血清置4待检。血清标记物：检测抗HCV分子生物学标记：检测HCV RNA早期血清检测抗HCV IgM丁型肝炎不同期血均可血清第三类分离血清置4待检。血清标记物：急性HDV感染时HDV Ag仅在血中出现数日，随之出现抗HDV IgM，持续时间也较短。慢性HDV感染时，抗HDV IgG持续升高。分子生物学标记：可用HDV cDNA探针或PCR法检测血清中HDV RNA戊型肝炎发病早期采便，越早越好。急性期采血新鲜粪便标本，血清第三类标本应带冰在24小时内运送至实验室，并及时进行标本处理，如不能马上进行检测，需-20保存，尽快进行检测。PCR法可直接从患者粪便中检测HEV RNA。也可用免疫荧光法或免疫电镜法直接检测粪便中的HEV病毒颗粒。血清标记物：由于抗HEV IgG持续时间不超过1年，抗HEV IgM和IgG均可作为近期感染的标记。脊髓灰质炎第一份血于急性期采集，最迟不晚于发病后5天，第二份血与第一次采血后4周采集。脑脊液标本出现麻痹后采集于急性期越早越好，一般发病后两周采集，间隔时间24小时再采一次。血液脑脊液粪便、直肠拭子第二类标本应带冰在24小时内运送至实验室，并及时进行标本处理，如不能马上进行检测，需-20保存，尽快进行检测。病毒分离、中和试验、补体结合试验和血凝抑制试验；PCR及荧光定量RT-PCR病毒核酸麻疹IgM抗体：发病后1-2周采集，必要时间隔1周再采一次IgG抗体血液第三类标本应带冰在24小时内运送至实验室，并及时进行标本处理，如不能马上进行检测，需-20保存，尽快进行检测。检测特异性IgM抗体检测特异性IgG抗体流行出血热采集急性期和恢复期（一周以内，（最好4天以内）和发病后两周以后）的病人血液；采集尿液用于检测HV抗原；采集病人相关组织（尸检）血液尿液组织第二类用于血清抗体检测的样本可保存于4冰箱，血液应分离成血清保存。用于核酸检测或病毒分离的样本应保存于40以下冰箱，样本采集时最好采集两分，一份用于核酸和抗原检测，一份用于病毒分离和重复检验，可以提高病毒分离成功率间接免疫荧光试验（IFAT）、抗链IgM捕获ELISA法、反向被动血凝抑制试（RPHIA）、血凝抑制试验（HI）、放射免疫沉淀试验（RIP）等，中和抗体检测可选用空斑减少中和试验（PRNT）及细胞微量病变中和试验（MCPENT）流感和人禽流感发病急性期鼻拭子咽拭子鼻咽抽取物漱口液鼻洗液血清标本采集应该包括急性期和恢复期双份血清高致病性禽流感属于第二类；流感第三类凡涉及活病毒的操作必须在生物安全三级（BSL-3级）里进行，不涉及活病毒的实验可以在生物安全二级（BSL-2级）操作，但是必须采取生物安全三级防护。新鲜的临床采集标本应在4条件下24小时内运送至实验室。未能24小时内送至实验室的，应置-70或以下保存。标本送至实验室后，病毒分离标本应尽快进行接种分离，24小时内能进行接种的可置于4保存，如未能接种应置-70或以下保存。血清标本应置-20保存。病毒分离血红细胞凝集及红细胞凝集抑制实验血清学诊断微量中和试验RT-PCR快速诊断方法免疫荧光方法检测流感病毒流感/人禽流感实时荧光定量PCR（Real-Time PCR）快速诊断检测狂犬病在狂犬病病人入院后，尽可能早期采集标本病人唾液、脑脊液、尿液、鼻咽洗液、咬伤处皮肤组织或病人死后的眼角膜、脑组织。血液第二类操作所有潜在狂犬病感染的材料均应在P2或P3（实验室固定毒在P2，病人或动物分离的街毒在P3）生物安全实验室内进行。用于的标本在20或20以下低温（70）、液氮、或放在含50甘油的PBS中以保持标本的感染性，应将标本盛于无菌容器内，放在密封的盒内并注明其危险性以防病毒的扩散。标本要求无菌采集，20保存待检。病毒检测和分离（细胞培养法分离病毒、乳小白鼠接种法分离病毒）中和抗体检测特异性抗体检测核酸检测：RT-PCR方法快速狂犬病酶联免疫吸附法检测抗原免疫荧光法检测抗原非典型性肺炎发病急性期尽早采集急性期血样，最迟不晚于发病后7天。恢复期血样则在发病后24周采集。鼻咽拭子痰液嗽口液尸检标本（肺、肝、肾、心、淋巴结、血凝块等组织）第二类凡涉及活病毒的操作必须在生物安全三级（BSL-3级）里进行，不涉及活病毒的实验可以在生物安全二级（BSL-2级）操作，但是必须采取生物安全三级防护。标本采集后应立即冷冻保存，如未能及时接种应置-70或以下保存。常用的样品运输液为：pH7.47.6的Hanks，Eagles或水解乳蛋白液。为防止细菌和真菌生长，在采样液中需加入青、链霉素，终浓度为每毫升 1000单位青霉素和100g的链霉素，（也可用庆大霉素，其终浓度为每毫升 1mg，）同时加制霉菌素，终浓度为每毫升4g病毒核蛋白（N）抗原ELISA检测病毒核酸实时PCR 检测病毒核酸常规PCR检测IgG和IgM的ELISA和荧光检测中和抗体的检测病毒分离乙型脑炎急性期双期血清血液脑脊液死者脑组织第二类。应在BSL-2级生物安全防护实验室中进行。用于血清抗体检测的样本可保存于4冰箱，血液应分离成血清保存。病毒分离及核酸测定，标本采集后应立即冷冻保存，如未能及时接种应置-70或以下保存特异性lgM检测常规血清学检测（血凝抑制试验、免疫荧光试验、酶联免疫吸附试验（ELISA）、补体结合试验、中和试验）病毒分离登革病毒（DV）发病急性期双期血清血液第二类生物安全二级实验室中进行用于血清抗体检测的样本可保存于4冰箱，血液应分离成血清保存。病毒分离及核酸测定，标本采集后应立即冷冻保存，如未能及时接种应置-70或以下保存病毒分离抗体检测血凝抑制试验补体结合试验中和试验间接免疫荧光技术酶联免疫吸附试验（ELISA）基因工程抗原检测DV抗体IgM和IgG螺旋体钩端螺旋体发病一周双期血液血清、血、CSF（第一周）、尿（一周后）第三类血1h；尿1h或用1%牛血清蛋白稀释并在4-20保存病原体分离血清学检验（凝集溶解试验、红细胞凝集试验、炭凝集试验、红细胞溶解试验、补体结合试验）。暗视野显微镜和直接FA染色有效。组织用Warthin-Starry银染血液或尿液或脑脊液检测到钩端螺旋体核酸DOT-ELISA伯氏疏螺旋体急性期双期血清损伤周围皮肤活检、血、脑脊液第三类保持组织湿润、无菌镜检：组织用Warthin-Starry银染，血、CSF用吉姆萨染色；病原分离培养，血清学检测，立克次体普氏立克实体急性期双期血液血液、组织第三类用于血清抗体检测的样本可保存于4冰箱，血液应分离成血清保存。病毒分离及核酸测定，标本采集后应立即冷冻保存，如未能及时接种应置-70或以下保存血清学检测（变形杆菌凝集反应 亦称外斐（Weil-Felix）氏反应）免疫荧光检查动物接种 可用豚鼠，大、小白鼠等核酸PCR检测莫氏立克次体急性期双期血液血液、组织、第三类用于血清抗体检测的样本可保存于4冰箱，血液应分离成血清保存。病毒分离及核酸测定，标本采集后应立即冷冻保存，如未能及时接种应置-70或以下保存血清学试验（变形杆菌OX19、莫氏立克次体凝集反应或补体结合反应）免疫荧光检查动物接种 可用豚鼠，大、小白鼠等核酸PCR检测艾立克体查菲艾立克体急性期双期血清血涂片、皮肤活检、血（加肝素或EDTA抗凝剂），CSF、血清第三类材料在冰上运转，保持组织湿润和无菌、保持4-20直至检测，或-70转运；PCR检测转运在冰上或冷冻。优选学清血检测，用甲醇混合涂片。用FA或吉姆萨CSF用于直接检查和PCR。 肺炎衣原体急性期双期血清鼻拭子咽拭子鼻咽抽取物漱口液鼻洗液血液第三类用于血清抗体检测的样本可保存于4冰箱，血液应分离成血清保存。病毒分离及核酸测定，标本采集后置保存液中保存，如未能及时接种（24h）应置-70或以下保存细胞分离培养涂片检查直接免疫荧光染色补体结合试验及微量免疫荧光试验检测双份血清抗体核酸PCR检测肺炎支原体急性期双期血清鼻拭子咽拭子鼻咽抽取物漱口液鼻洗液血液第三类标本实施现场接种，分离血清4保存送检。用于核酸测定的标本置冷冻保存。肺炎支原体的分离血清学检查：血清病原抗体效价1:32、链球菌MG凝集试验，效价1:40为阳性，连续两次4倍以上增高有诊断价值。核酸PCR检测寄生虫阿米巴性痢疾粪便血清活滋养体检查包囊的碘液染色检查汞碘醛离心（MIFC）沉淀法硫酸锌浮聚法酶联免疫吸附试验（ELISA）日本血吸虫粪便血清直接涂片法毛蚴孵化法皮内试验环卵沉淀试验（COPT）间接血凝试验酶联免疫吸附试验（ELI