高中生物选修1基础填空清单(含答案)专题二.doc

选修生物技术实践知识清单2.1微生物的实验室培养1、培养基 （1）培养基按照物理性质主要分为 （主要用于工业生产）和 （主要用于菌种的分离、计数、鉴别）。只有 培养基表面可以形成“菌落”。菌落的概念是 ，不同菌落的 不同，因此，菌落是 的重要依据。 （2）按照培养基的功能，可将培养基分为 培养基和 培养基。 （3）培养基的化学成分一般包括 等，除此之外，还需要满足微生物对 、 和 的需求。例如，培养乳酸杆菌时需要添加的特殊营养物质是 。牛肉膏能为微生物提供的主要营养是 ，蛋白胨能为微生物提供的主要营养是 。2、无菌技术（1） 获得纯净培养物的关键是 ，要注意以下几个方面： 对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和 （消毒/灭菌）。 将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行 （消毒/灭菌）。 为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在 进行。 实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品 。（2）消毒与灭菌的区别 消毒指使用 方法杀死 （全部/部分）微生物。消毒方法常用 、 、 、 。对于牛奶的消毒，应使用 法，该方法的优点是 ；对于接种室或工作台，可以用 消毒，在此之前，可适量喷洒 来加强消毒效果。 灭菌指使用 因素杀死 （全部/部分）微生物，包括 和 。灭菌方法有 、 、 。（3）常用器具的灭菌消毒方法： 接种环、接种针和其他金属用具使用 灭菌法； 玻璃器皿、金属用具等可使用 灭菌法，所用器械是 ； 培养基使用 法，所用器械是 。 杀死物体表面和空气中的微生物可使用 消毒法。3制作牛肉膏蛋白胨固体培养基 （1）方法步骤： 。 （2）思考讨论： “溶化”步骤中，加热熔化琼脂时需要不断用玻璃棒搅拌，搅拌目的是什么？ 答： 。 平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 答： 。 拓展：培养细菌时，需要将平板倒置于恒温培养箱中培养，为什么？ 答： 。4、纯化大肠杆菌（纯化的目的：获得单菌落） （1）能获得单菌落的接种方法是 。 （2）“稀释涂布平板法”包括 操作和 板操作两步。 （3）平板划线法和稀释涂布平板法接种的共性： 。 （4）平板划线操作灼烧的目的: 首次划线前灼烧接种环的目的是： 。 第二次及以后划线前灼烧接种环的目的是： 。 划线结束后灼烧接种环的目的是： 。 第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线的原因是： 。 （5）平板划线法获得的菌落分布 ， （能/不能）计数；稀释涂布平板法获得的菌落分布 ， （能/不能）计数。5、菌种的保存 （1）临时保存：将菌种接种到 上，待 后放在 冰箱中保藏。这种保存方法的缺点是 。该方法用于 的菌种的保存。 （2）长期保存：可采用 法，在 冷冻箱中保存。2.2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、菌种的分离 1、寻找目的菌株方法：寻找目的菌株时，要根据目的菌株对 的要求，到 去寻找。实例：若要寻找“尿素分解菌”，应在 的土壤中去寻找；若要寻找“纤维素分解菌”，应在 的环境中去寻找；若要寻找“石油分解菌”，应在 的环境中去寻找。2、筛选出“尿素分解菌”选择性培养基：是指 培养基。筛选“尿素分解菌”的选择培养基的特点是 。二、细菌的计数（一）统计菌落的数目（间接计数法）1、方法： 。2、原理：当样品的稀释度 时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的1个活菌，通过统计平板上的 数，就能推测出样品中大约有多少活菌。（为保证结果准确，一般选择菌落数在 的平板进行计数。）3、【问题探讨】请根据所学知识回答以下问题有2位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下2种统计结果：甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230；乙同学在该浓度下涂布了3个平板统计的菌落数分别为21、212、256，并且取平均值163作为统计结果；请评价这两位同学的实验结果的有效性 甲同学操作 （合理/不合理），原因是 ； 乙同学的结果 （合理/不合理），原因是 ； 正确做法是：在设计实验时，一定要涂布 个平板作为重复组，才能减小实验误差并增强实验的说服力与准确性在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否相当，结果差距太大，意味着 ，需要 。4、稀释涂布平板法的计数公式： 每克样品中的菌株数 =（CV） M 其中，C代表某一稀释度下平板上生长的 ，V代表 ，M代表 。【例题】（14全国卷节选）某研究小组为测定某河流水样中的细菌含量，将1ml水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接种0.1ml稀释液，培养后在3个平板上的菌落数分别是39、38和37，据此可得出每升水样中的活菌数为 个。5、方法评价：稀释涂布平板法统计的菌落数往往比活菌的实际数目 ，这是因为： 。（二）统计细菌的数目（直接计数法）1、方法： 。2、计数工具： 。3、计算公式：1ml培养液中酵母菌数 = 大方格总菌数 大方格总体积 稀释倍数4、方法评价：显微镜计数法统计的细菌数往往比活菌的实际数目 ，这是因为： 。三、设置对照1、设置对照的目的：主要是排除 对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。2、微生物培养的常用对照设置方法：判断培养基是否被污染的对照设置方法：将接种后的培养基与1个 放在相同且适宜条件下培养，观察对照组的培养基上是否有菌落生长。判断选择培养基是否具有选择作用的对照设置方法：将同一土壤样品分别接种在 培养基和选择培养基上，然后在相同且适宜条件下培养，观察比较二者的菌落数目。四、实验流程1、土壤取样 富含有机质的土壤 2、 样品的稀释 常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数在 之间、 计数的平板3、接种 采用 法接种 细菌： 培养 天；4、培养 放线菌： 培养 天； 霉菌： 培养 天；5、观察 根据菌落特征区分微生物，这些特征包括菌落的 。 6、 统计 每隔 小时统计一次菌落数，选取 的记录作为结果， 这样可以防止 而导致 。7、计算 稀释涂布平板法的计数公式： 每克样品中的菌株数 = 。五、菌种鉴定1、尿素分解菌的鉴定：为鉴定分离的细菌是否具有分解尿素的能力，可以在培养基中加入 ，若该细菌具有分解尿素的能力，则将导致培养基PH值 ，菌落周围出现 ，这是因为细菌合成的 将尿素分解成 ，使培养液 性增强；菌落周围的环带越大，说明 。2、大肠杆菌的鉴定：鉴定大肠杆菌可在培养基中加入 ，如果培养基上菌落呈现 色，则说明该菌落为大肠杆菌的菌落。 2.3分解纤维素的微生物的分离一、纤维素与纤维素酶 1、纤维素：一种由 首尾相连而成的高分子化合物，是地球上含量最丰富的多糖类物质。棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物。 2、纤维素酶： 是一种复合酶，包括 。 作用：“C1酶和CX酶”能将 分解成 ，“葡萄糖苷酶”将 分解成 。二、纤维素分解菌的筛选 1、筛选方法： 。能够通过 反应直接对微生物进行筛选。 2、筛选原理： 染料可以与纤维素、淀粉等多糖形成 ，但该染料并不和 发生这种反应。当纤维素被纤维素酶分解后，培养基中会出现 的现象。三、分离“分解纤维素的微生物”的实验流程 1、步骤：土壤取样选择培养 将样品涂布到 的培养基上 挑选 的菌落。 2、土壤取样：选择 的环境采取土样。 3、选择培养的目的是 ，此步是否需要，应根据 来确定。 4、刚果红染色法种类：方法一：先 ，再加入刚果红进行颜色反应。缺点是操作 ，加入刚果红溶液会 ；其优点是这样显示出的颜色反应基本上是 的作用。NaCl溶液的作用：培养基不含CR，用NaCl溶液可以 ，这样就会留下大大小小的透明圈。方法二：在 。优点是操作 ，不存在 现象。缺点：淀粉类物质，可以使能够产生 酶的微生物出现 反应；有些微生物具有 能力，长时间培养会 而形成透明圈，与纤维素分解菌不容易区分。四、课题延伸为确定初步筛选得到的是“纤维素分解菌”，还需要进行 的实验。纤维素酶发酵的方法有 发酵和 发酵两种；纤维素酶的测定方法一般是采用对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的 进行定量测定。2.1微生物的实验室培养1、 （1）液体培养基 固体培养基 固体培养基 形状、大小、颜色和隆起程度 菌种鉴定（2） 选择 鉴别（3） 水、无机盐、碳源、氮源 PH 特殊营养物质 O2 维生素 碳源、氮源、磷酸盐和维生素 碳源、氮源、维生素2、 （1）防止外来杂菌入侵 消毒 灭菌 酒精灯火沿附近 相接触（2） 较为温和的物理或化学 部分 煮沸消毒法 、巴氏消毒法、化学药剂消毒、紫外线消毒 巴氏消毒法 既可以杀死牛奶中的微生物，并且使牛奶中的营养成分不被破坏 紫外线 石碳酸或煤酚皂溶液 强烈的物理因素 全部 芽孢 孢子 灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌 （3）灼烧 干热 干热灭菌箱 高压蒸汽灭菌 高压蒸汽灭菌锅 紫外线3、 （1）计算、称量、溶化、调PH、分装、灭菌、倒平板（2） 防止琼脂糊底而导致烧杯破裂 防止皿盖上水珠落入培养基造成污染、也可避免培养基中水分过快挥发 防止水分过快挥发、防止皿盖上水珠落入培养基影响微生物生长而难以形成单菌落、防止杂菌污染4、 （1）平板划线法和稀释涂布平板法（2）系列稀释 涂布平板（3）使聚集在一起的细菌分布成单个细胞，以便于纯化菌种 （4） 杀死菌种环上可能存在的杂菌 杀死上次划线结束后，接种环上存在的菌种，使下一次划线时接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，通过划线次数的增加，使每次划线时菌种数目逐渐减少，以便获得单个细胞 避免细菌污染环境和感染操作者 线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从末端开始划线，能逐步稀释细菌，最终能得到由单个细胞形成的单菌落（5） 不均匀 不能 均匀 能5、 （1）试管的固体斜面培养基 菌落形成 4 保存时间不长，菌种容易污染或产生变异 频繁使用 （2）甘油管藏 -202.2土壤中分解尿素的细菌的分离和计数一、菌种的分离1、生存环境 相对应环境中 富含尿素 富含纤维素 被石油污染 2、允许特定种类微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的 以尿素为唯一碳源2、 细菌的计数(一)统计菌落的数目（间接计数法法）1、稀释涂布平板法 2、足够高 菌落数 30-3003、 不合理 没有设置重复实验，结果不具有 不合理 一个计数结果与另外两个相差较大至少3 操作有误 重新实验4、平均菌落数 涂布平板时所用的稀释液的体积 稀释倍数 3.8107 5、低 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落（二）统计细菌的数目（直接计数法）1、显微镜计数法 2、 血细胞计数板 3、 多 显微镜下无法区分细菌的死活 。三、设置对照1、实验组中非测试因素 2、未接种的培养基 牛肉膏蛋白胨固体四、试验流程1、表层 2、30-300 3、稀释涂布平板法 4、30-37 1-2 25-28 5-7 25-28 3-45、性状、大小、颜色、隆起程度6、24 菌落数目稳定时 因培养时间不足 遗漏菌落数目 7、C/VM 五、菌种鉴定1、酚红指示剂 升高 红色环带 脲酶 氨 碱 细菌分解尿素的能力越强2、伊红美蓝 黑2.3分解纤维素的微生物的分离一、纤维素与纤维素酶1、葡萄糖 2、C1酶、Cx酶、葡萄糖苷酶 纤维素 纤维二糖 纤维二糖 葡萄糖二、纤维素分解菌的筛选1、刚果