天然药物化学研究的经典方法剖析.ppt

天然药物化学研究的经典方法 有效成分研究的一般途径 提取方法 1 溶剂提取法2 水蒸汽蒸馏法3 其他方法 升华法 压榨法 吸收法 酶提取法 分离方法 一 溶剂法1 固 液溶剂分离法 部位分离2 两相溶剂萃取法 1 简单萃取法被萃取液的准备 水悬浊液密度为1 1 1 2之间萃取剂的选择及其用量 次数乳化及其破坏方法 2 逆流连续萃取法萃取效率高 溶剂用量少 不乳化 可工业化 3 液滴逆流分配法适用于分离同分异构体或同系物及多肽 蛋白质等高分子化合物 热不稳定化合物 二 沉淀法 1 溶剂沉淀法 分级沉淀法 2 酸碱沉淀法3 专属试剂沉淀法 如胆固醇 明胶 雷氏铵盐4 盐析法 如氯化钠 氯化铵 硫酸铵 硫酸钠 硫酸镁 三 分馏法 利用液体混合物中各成分的沸点的不同而分离的方法 四 结晶与重结晶法 1 结晶的条件 2 重结晶溶剂的选择 3 重结晶过程和析晶方法 4 微量重结晶 5 结晶纯度的判断 五 透析法与超滤法 用于纯化皂苷 蛋白质 多糖 多肽透析膜 动物性膜 合成膜 分离量小 实验室用超滤膜 直径1 10nm 小分子能滤过 多为合成膜 分离量大 适用于工厂和实验室 六 色谱分离法 一 分类按分离过程原理不同可分为 吸附色谱法分配色谱法凝胶渗透色谱法离子交换色谱法亲和色谱法按流动相类型来分 气相色谱 GC 流相色谱 LC 按操作方式来分 1 薄层色谱 TLC 薄层色谱 操作 展开方式及注意事项制备型薄层色谱 PTLC 特点 操作过程离心薄层色谱法 CTLC 高效薄层色谱 HPTLC 吸附剂粒度范围更窄 5 7微米 并采用特殊的粘合剂 分离能力较普通TLC高 展矩短 斑点集中 分离效果好 高效微量快速 2 柱色谱高效液相色谱 HPLC 制备型中压柱色谱 MPLC 制备型低压柱色谱 LPLC 制备型快速柱色谱 闪柱色谱FC 常压柱色谱 LC 柱色谱操作 梯度洗脱及溶剂解混 等度洗脱干柱色谱的操作减压柱色谱 VLC 干柱色谱3 纸色谱 PC 4 毛细管色谱 CTC 检识方法和结构研究 1 理化检识初步确定化合物类型和简单的取代情况2 色谱检识TLC PC GC或HPLC标品对照法 文献对照法 多谱联用法3 波谱分析UV IR NMR MS CD X ray 本节结束 吸附色谱法 AdsorptionChromatography 分类 物理吸附 物理 吸附色谱法化学吸附半化学吸附 聚酰胺色谱法 氢键吸附 大孔吸附或小孔树脂色谱法 吸附性和分子筛原理相结合 过程三要素 吸附剂 固定相 洗脱剂 展开剂 流动相 化学成分 吸附剂1 极性吸附剂2 非极性吸附剂洗脱剂或展开剂的选择洗脱规律操作方式和操作技术适用范围 A B C D 洗脱剂或展开剂的选择 分配色谱法 DistributionChromatography 原理 利用混合物中各成分在固定相和流动相中分配系数的差异而达到分离的 载体 硅胶 硅藻土 纤维素溶剂系统 选择原则关键 固定相和流动相的相互饱和 常用键合固定相材料 如RP 2 RP 8 RP 18 亲脂性顺序 RP 18 RP 8 RP 2适用范围 分类 正相色谱 固定相为强极性溶剂如水 甲酰胺 HPLC中常用氰基与氨基键合相 流动相为弱极性溶剂如氯仿 正丁醇等 分离极性较大的成分 洗脱时极性小的成分先下 反相色谱 固定相为弱极性溶剂如石蜡油 HPLC中常用ODS与C8键合相 流动相为强极性溶剂如水 甲醇 分离脂溶性成分 洗脱时极性大的成分先下 操作方式 分配柱色谱 特点 TLC 纸色谱 PC 高速逆流色谱法 HSCCC 依靠聚四氟乙烯的蛇形分离管的方向性和高速行星式旋转所产生的离心场作用 使无载体支持的固定相 液体 稳定地保留在分离管中 并使样品和流动相单向低速通过固定相 实现混合 分配和分离 优点 无需载体 克服不可逆吸附消耗 样品变性污染吸收峰拖尾等缺点 可定量回收样品 重现性好 分离纯度高 速度快 凝胶过滤色谱法 GelFiltrationchromatography 原理 分子筛的原理 洗脱规律 Ve K1 K2lgM按分子由大到小顺序先后出柱 凝胶的种类 葡聚糖凝胶 sephadexG 适用于水溶性大分子化合物的分离纯化 羟丙基葡聚糖凝胶 sephadexLH 20 可在有机溶剂中使用 适用于分离各类化合物 交联葡聚糖凝胶 离子交换与分子筛原理丙烯酰胺凝胶 Bio GelP 琼脂糖凝胶 Bio GelA 离子交换色谱法 IonExchangeChromatog