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文档简介

透明软骨 弹性软骨 胞间连丝 油镜的番茄表皮细胞的胞间连丝 查效兵 李云峰组 实验五植物细胞骨架显示与观察 问题 1 什么叫细胞骨架 2 广义的细胞骨架指什么 3 狭义的细胞骨架又指什么 4 20 25nm 6 7nm 8 11nm 一 目的与要求 1 了解植物细胞骨架制片方法和其成分显示的原理2 掌握考马斯亮蓝R250染色方法3 观察细胞骨架在细胞中的分布情况 二 原理 细胞骨架指细胞质中纵横交错的纤维网络结构 可分为微管 微丝和中间纤维 它对细胞形态维持 细胞生长 运动 分裂 分化和物质的运输等起着重要的作用 当细胞用适当浓度的Triton X 100处理时 可将质膜中和细胞内蛋白质溶解 而骨架系统的蛋白质不被破坏 经固定和考马斯亮蓝R250染色后 可使骨架蛋白着色而被显示 三 材料 器材与试剂 1 材料新鲜洋葱鳞茎的内表皮2 器材滴管 载玻片 盖玻片 镊子 剪刀 10mL小烧杯 显微镜 恒温水浴锅等3 试剂1 M 缓冲液 咪唑 pH6 7 50mM MgCl20 5mM KCl50mM EGTA 乙二醇双 氨基乙基 醚四乙酸 1mM 巯基乙醇或DTT 二硫苏糖醇 1mM EDTA0 1mM 2 磷酸缓冲液 PBS 3 1 Triton X 100 用M 缓冲液配制 4 0 2 考马斯亮蓝R250 考马斯亮蓝R2500 2g 甲醇46 5mL 冰醋酸7 0mL 蒸馏水46 5mL5 植物细胞固定液 5ml38 甲醛 5ml冰醋酸 90ml70 酒精和5ml甘油 四 实验步骤 1 取材 内表皮约0 5cm2 放在盛有PBS缓冲液的小烧杯中 浸泡处理10min 2 抽提 吸去PBS缓冲液 取2ml1 Triton 100入小烧杯中 置于37 恒温水浴锅中保温30min 3 冲洗 吸去1 Triton X 100 用M缓冲液轻洗三次 每次5min 4 固定 加植物固定液2ml固定30min5 冲洗 弃去固定液后 用PBS缓冲液清洗三次 每次1 2min6 染色 吸去PBS 滴1滴0 2考马斯亮蓝R250染液染色5min7 制片 倒去染液 用蒸馏水清洗三次 将标本平铺在载玻片上 再盖上盖玻片 8 观察 五 实验结果 绘出洋葱鳞叶内表皮细胞内
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