实验三 维生素C对甲硝唑在家兔体内药物动力学影响.doc

实验二 维生素C对甲硝唑在家兔体内药物动力学影响一、实验目的通过实验初步掌握兔体内血药浓度测定方法。掌握血药浓度法计算药物动力学参数。二、实验原理药物的血管外给药是临床上的主要给药方式。血管外给药的吸收过程和消除过程在正常计量下一般均属于一级动力学过程。一级吸收药物动力学参数的求算，可以采用计算机拟合的方法求得。若药物按表观一级吸收过程进入体内，又按表观一级过程消除，且在体内按单室模型分布，药物的表观一级消除速度常数k和一级吸收速度常数ka可以借助于血要浓度时间数据用线性回归法和残数法求得。用线性回归法和残数法借助于血要浓度时间数据求k和ka值的过程如下： 依据简化的N室线性乳突模型吸收隔室A尿室中央隔室C 可以求得描述体内药量X随时间t的变化率的微分方程，即速率方程： 借助于Laplace变换，可以求得单隔室口服给药的体内药物动力学模型： (1) 表观一级吸收速度常数， 吸收部位的药量， 表观一级消除速度常数这是一个二项指数式，若两项有足够的差异，即或，当t足够大时，指数项绝对值较大的一项首先趋向于零。本实验所用的扑热息痛在家兔体内动力学特征刚好符合情况，因此，可以首先采用线性回归法求得值。具体方法如下： 因为： ka k，所以：t 时， 0 ， (1) 式变为： (2) (2)式对数形式为： （3）以lnC 对 t 作图得二项指数曲线，其末端为一直线，其斜率为 ，可求得k值，见图线。式（）减去式（）得外推线上血药浓度与实际血药浓度之差的浓度（）与时间的关系。lnC (4)kkat线线式（）两边取对数得 (5)以 对t作图可得直线（见图线），其直线斜率为 ，由此可求得值。并且通过 图 残数法求下列 甲硝唑(metronidazole，MZ)属于硝基咪唑类抗生素，是抗厌氧菌的首选药物，临床上常用于结肠炎的治疗和结直肠术前的肠道准备，但口服后在胃和小肠吸收快，血药浓度高，不良反应较多。由于甲硝哇的用途日趋广泛，因此研究布洛芬与一些常用的药物，包括一些内源性物质共存于体内时其药物动力学的变化是十分必要的。为了了解维生素C对布洛芬的体内药物动力学过程的影响，给家兔口服维生素C和甲硝唑，测定甲硝唑血药浓度，并计算药物动力学参数。三、实验内容1实验方法取体重3kg左右健康家兔，随机分为A,B,C三组，A组按100mg/kg剂量取甲硝唑片剂同时加服125mg的维生素C片剂，分别放入两个小烧杯中，加少量蒸馏水溶解，给家兔口腔灌胃给药溶液。B组按1100mg/kg剂量取甲硝唑片剂灌胃给药，给药半小时后再灌胃给予125mg维生素C片剂。C组按125mg 剂量取维生素C片剂灌胃给药，给药半小时后再灌胃给予100mg/kg甲硝唑片剂。A，B，C三组给药后均于0.5，1，1.5，2.0，2.5，3.3，4.5，5.5小时分别从耳缘静脉采血约ml，置于含肝素钠的小试管中（8g/ml血）。然后按标准曲线制备项下测定血药浓度。2血药浓度测定I.分光光度法（1） 标准溶液的制备与标准曲线的测定标准溶液的配制：取甲硝唑注射液1.0 ml，加蒸馏水使成浓度为100g/ml的甲硝唑标准液。标准液浓度的确认：取5个l0 ml量瓶，各加标准液l.0ml,加0.2M盐酸稀释至刻，在277nm处测平均吸收度值为0.377士0.001，与药典比较证实原注射液含量准确，其所含少量化钠不影响测定。标准曲线回归方程的建立：家兔血浆1.oml，置于。至5号具塞离心管中，用微量进样器依次加入标准液0、50、100、150、200与500l，再分别加水使每管总量均为1.3ml。混匀后加5.0 ml氯仿振荡萃取，离心l0min(300r/min)，吸取氯仿层，余液再萃取1次，氯仿层合并后取8.0ml置另一具塞离心管中，加0.2M盐酸3.5ml振荡，离心5min，取盐酸层在277nm处以0管为对照，测定各管吸光度值。回归方程 ：X=140.5A+0.3306，r=0.9998 X=116.IA+0.118l r=0.9998平均回收率：士SD81士2维生素C标准溶液的制备：以兔血浆为溶剂, 制备含维生素C200g/ml的标准溶液。（） 样品的测定将采取的血样于4000r/min转速下离心5min,吸取血浆500l，加蒸馏水150l, 加水使液体总量均为0.65ml。混匀后加2.5 ml氯仿振荡萃取，离心l0min(300r/min)，吸取氯仿层，余液再萃取1次，氯仿层合并后取8.0ml置另一具塞离心管中，加0.2M盐酸3.5ml振荡，离心5min，取盐酸层在277nm处以空白为对照，测定各管吸光度值。II.高效液相色谱法（1）仪器与色谱条件岛津LC4A型高效液相色谱仪,分析柱为Spherisorb C18(4.6250,5m,中国大连色谱技术研究开发中心);流动相为甲醇0.01 M磷酸二氢钠(2080);检测波长为320nm;流速为1mlmin-1;检测器灵敏度为0.04AUFS;记录纸速为2mmmin-1。（2）样品的测定样品的预处理:取血浆0.5ml,加入内标苦味酸(0.1%) 15l及甲醇2ml,混合30s,离心10min (3000rmin-1),取上清液经0.22m微孔滤膜过滤,取20l进行分析。血浆中甲硝唑标准曲线的制备:分别取10ml具塞试管,各加入空白血清、乳汁0.5ml,再精密加入甲硝唑溶液适量,使之浓度分别为5.12,10.25, 20.50, 41.00, 61.50gml-1,按上述的方法操作。回收率与精密度试验:用空白血浆制成每1ml含甲硝唑10.25, 20.50, 41.00g的样品,按前项下的方法操作,所得峰面积比代入标准曲线计算测得量,以测得量与添加量之比计算方法回收率(%)。另按上述方法操作,分别于1d内和1周内测定5次,计算日内与日间精密度。四、记录与参数计算表 实验测定记录兔血药浓度g/ml0.511.52.02.53.54.55.5AC(g/ml)数据整理及参数计算:以血药浓度为纵坐标，以时间为横坐标做血药浓