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第七章芳香胺类药物的分析 常见的芳胺类药物 对氨基苯甲酸酯类药物的基本结构 第一节芳胺类药物的分析 苯佐卡因 盐酸丁卡因 盐酸普鲁卡因胺 酰胺类药物的基本结构 非那西丁 对乙酰氨基苯乙醚 对乙酰氨基酚 扑热息痛 醋氨苯砜 盐酸利多卡因 盐酸布比卡因 一 结构与性质 一 具有芳伯氨基或潜在的芳伯氨基 可用重氮化 偶合反应鉴别或亚硝酸钠滴定法测定含量 二 酯键或酰胺键易水解 三 具脂烃胺侧链 弱碱性 可与生物碱沉淀试剂发生沉淀反应进行鉴别或非水碱量法测定含量 四 游离碱多为碱性油状液体或低熔点固体 难溶于水 易溶于有机溶剂 其盐酸盐具有一定的熔点 易溶于水和乙醇 难溶于有机溶剂 六 UV 七 IR 五 某些特征取代基 如酚羟基 的反应 二 鉴别试验 一 重氮化 偶合反应 芳香第一胺类鉴别反应 直接 盐酸普鲁卡因 对氨基水杨酸钠 苯佐卡因 盐酸普鲁卡因胺 盐酸普鲁卡因Ch P 2005 鉴别 4 本品显芳香第一胺类的鉴别反应 附录 取供试品约50mg 加稀盐酸1ml 必要时缓缓煮沸使溶解 放冷 加0 1mol L亚硝酸钠溶液数滴 滴加碱性 萘酚试液数滴 视供试品不同 生成由橙黄到猩红色沉淀 间接 对乙酰氨基酚 非那西丁 醋氨苯砜 贝诺酯 对乙酰氨基酚Ch P 2005 鉴别 2 取本品约0 1g 加稀盐酸5ml 置水浴中加热40分钟 放冷 取0 5ml 滴加亚硝酸钠试液5滴 摇匀 用水3ml稀释后 加碱性 萘酚试液2ml 振摇 即显红色 二 三氯化铁反应对乙酰氨基酚 三 与重金属离子反应1 与铜和钴离子反应 2 羟肟酸铁盐反应 3 与汞离子的反应 四 水解产物的反应 1 盐酸普鲁卡因Ch P 2005 鉴别 1 取本品约0 1g 加水2ml溶解后 加10 氢氧化钠溶液1ml 即生成白色沉淀 加热 变为油状物 继续加热 产生的蒸气 能使湿润的红色石蕊试纸变为蓝色 热至油状物消失后 放冷 加盐酸酸化 即析出白色沉淀 2 苯佐卡因Ch P 2005 鉴别 1 取本品约0 1g 加氢氧化钠试液5ml 煮沸 即有乙醇生成 加碘试液 加热 即生成黄色沉淀 并发生碘仿的臭气 五 氯化物的反应药典附录 一般鉴别试验 1 沉淀反应 2 氧化还原反应 六 制备衍生物测熔点 1 三硝基苯酚衍生物 盐酸利多卡因Ch P 2005 鉴别 取本品0 2g 加水20ml溶解 1 取溶液10ml 加三硝基苯酚试液10ml 即生成沉淀 滤过 沉淀用水洗涤后 干燥 依法测定 附录 C 熔点为228 232 熔融时同时分解 盐酸布比卡因Ch P 2005 2 硫氰酸盐衍生物 盐酸丁卡因Ch P 2005 鉴别 1 取本品约0 1g 加5 醋酸钠溶液10ml溶解后 加25 硫氰酸铵溶液1ml 即析出白色结晶 滤过 结晶用水洗涤 在80 干燥 依法测定 附录 C 熔点约为131 盐酸布比卡因Ch P 2005 鉴别 2 取本品 精密称定 按干燥品计算 加0 01mol L盐酸溶液制成每1ml中含0 40mg的溶液 照紫外 可见分光光度法 附录 A 测定 在263nm与271nm的波长处有最大吸收 其吸光度分别为0 53 0 58与0 43 0 48 七 UV 八 IR 盐酸布比卡因Ch P 2005 鉴别 3 本品的红外光吸收图谱与对照的图谱 光谱集324图 一致 三 特殊杂质检查 一 对乙酰氨基酚 1 有关物质 杂质来源中间体 副产物及分解产物 对氯乙酰苯胺杂质对照品法 检查方法TLC 其他杂质参比杂质对照品法 2 对氨基酚 杂质来源中间体 水解产物 反应原理 检查方法对照法 取本品1 0g 加甲醇溶液 1 2 20ml溶解后 加碱性亚硝基铁氰化钠试液1ml 摇匀 放置30min 如显色 与对乙酰氨基酚对照品1 0g加对氨基酚50 g用同一方法制成的对照液比较 不得更深 0 005 二 盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查 检查方法TLC杂质对照品法 杂质来源水解产生 精密量取本品 加乙醇稀释使成为每1ml中含盐酸普鲁卡因2 5mg的溶液 作为供试品溶液 取对氨基苯甲酸对照品 加乙醇制成每1ml中含30 g的溶液 作为对照品溶液 照薄层色谱法 附录 B 试验 吸取上述两种溶液各10 l 分别点于含有羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶H薄层板上 用苯 冰醋酸 丙酮 甲醇 14 1 1 4 为展开剂 展开后 取出晾干 用对二甲氨基苯甲醛溶液 2 对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液100ml 加冰醋酸5ml制成 喷雾显色 供试品溶液如显与对照品溶液相应的杂质斑点 其颜色与对照品溶液的主斑点比较 不得更深 一 亚硝酸钠滴定法1 原理具芳伯氨基的药物 四 含量测定 具游离芳伯氨基的药物可用本法直接测定 具潜在芳伯氨基的药物 如具酰胺基药物 对乙酰氨基酚等 经水解 芳香族硝基化合物 如无味氯霉素 经还原 也可用本法测定 2 主要测定条件 1 加入适量KBr加速反应KBr为催化剂 NaNO2 HCl HNO2 NaClHNO2 HCl NOCl H2O 在盐酸存在下 重氮化反应的机理为 1 K1 2 K2 K1 300K2加入KBr 可增大被测溶液中NO 的浓度 所以能加快重氮化反应速度 2 加过量盐酸加速反应 在不同酸中重氮化反应的速度为 HBr HCl H2SO4 HNO3 盐酸1 2 5 6 加入盐酸 重氮化反应速度加快 重氮盐在酸性溶液中稳定 防止生成偶氮氨基化合物 而影响测定结果 3 室温条件下滴定10 30 4 滴定速度 先快后慢滴定管尖端插入液面下2 3处 滴定液一次大部分放下 近终点时方改为慢速滴定 3 指示终点的方法 1 永停滴定法Ch P 2005 BP 2004 永停滴定法 附录 A 用作重氮化法的终点指示时 调节R1使加于电极上的电压约为50mV 取供试品适量 精密称定 置烧杯中 除另有规定外 可加水40ml与盐酸溶液 1 2 15ml 而后置电磁搅拌器上 搅拌使溶解 再加溴化钾2g 插入铂 铂电极后 将滴定管的尖端插入液面下约2 3处 用亚硝酸钠滴定液 0 1mol L或0 05mol L 迅速滴定 随滴随搅拌 至近终点时 将滴定管的尖端提出液面 用少量水淋洗尖端 洗液并入溶液中 继续缓缓滴定 至电流计指针突然偏转 并不再回复 即为滴定终点 2 电位法USP 28 3 外指示剂法KI 淀粉糊剂或试纸2NaNO2 2KI 4HCl 2NO I2 2KCl 2NaCl 2H2O 4 内指示剂法中性红不可逆指示剂 4 测定方法盐酸普鲁卡因Ch P 2005 取本品约0 6g 精密称定 照永停滴定法 附录 A 在15 25 用亚硝酸钠滴定液 0 1mol L 滴定 每1ml亚硝酸钠滴定液 0 1mol L 相当于27 28mg的C13H20N2O2 HCl 二 非水溶液滴定法脂烃胺侧链 具弱碱性 三 分光光度法对乙酰氨基酚在0 4 氢氧化钠溶液中 于257nm波长处有最大吸收 其紫外吸收光谱特征 可用于其原料及其制剂的含量测定 对乙酰氨基酚原料 片剂 咀嚼片 泡腾片 注射液 栓剂 胶囊 颗粒 对乙酰氨基酚Ch P 2005 取本品约40mg 精密称定 置25ml量瓶中 加0 4 氢氧化钠溶液50ml溶解后 加水至刻度 摇匀 精密量取5ml 置100ml量瓶中 加0 4 氢氧化钠溶液10ml 加水至刻度 摇匀 在257nm的波长处测定吸光度 按C8H9NO2的吸收系数为715计算 即得 USP 28 对照法 例精密称取对乙酰氨基酚42mg 置250ml量瓶中 加0 4 氢氧化钠溶液50ml溶解后 加水至刻度 摇匀 精密量取5ml 置100ml量瓶中 加0 4 氢氧化钠溶液10ml 加水至刻度 摇匀 在257nm的波长处测定吸光度为0 594 按C8H9NO2的吸收系数为715计算百分含量 W 42mg V 250ml5ml 100mlD 100 5 片剂 吸收系数法定量 例取标示量为0 3g的对乙酰氨基酚片10片 总重为3 3660g 称出44 9mg 置250ml量瓶中 加0 4 氢氧化钠溶液50ml及水50ml 振摇15min 加水至刻度 摇匀 用干燥滤纸滤过 弃去初滤液 精密量取续滤液5ml 置100ml量瓶中 加0 4 氢氧化钠溶液10ml 加水至刻度 摇匀 在257nm的波长处测的吸光度为0 583 按C8H9NO2的吸收系数为715计算本片剂的标示量 片剂 吸收系数法 四 比色法 五 荧光法 荧光探针技术使荧光衍生化试剂与本身无荧光或荧光效率低的化合物反应 其产物具有强荧光 从而使检测灵敏度大大提高 激发波长 ex400nm发射波长 em485nm测定荧光强度 标准曲线法定量 六 HPLC法盐酸普鲁卡因注射液 可同时测定盐酸普鲁卡因及其降解产物对氨基苯甲酸离子抑制色谱法内标法定量 七 生物样品分析 一 分光光度法测定人唾液中对乙酰氨基酚的含量 1 预处理方法唾液 三氯醋酸去蛋白2 测定方法分光光度法 二 对乙酰氨基酚急性中毒的血药浓度检测分析 1 预处理方法血浆 硫酸锌去蛋白 乙醚提取 氮气流挥干 水溶解2 测定方法加预柱 反相高效液相色谱法测定 第二节苯乙胺类药物的分析 苯乙胺类药物的基本结构 常见的苯乙胺类药物 盐酸苯乙双胍 盐酸克仑特罗 盐酸麻黄碱 硫酸沙丁胺醇 一 结构与性质 1 脂烃胺基侧链 显弱碱性2 酚羟基 易氧化变色 可发生三氯化铁反应3 具手性碳原子 具旋光性 4 溶解性游离碱难溶于水 易溶于有机溶剂 其盐可溶于水5 UV6 IR7 取代基 具芳伯氨基的盐酸克仑特罗可用重氮化 偶合反应鉴别 亚硝酸钠滴定法测定含量 二 鉴别试验 1 三氯化铁反应2 氧化反应3 与甲醛 硫酸反应4 UV与IR 5 与亚硝基铁氰化钠反应 Rimini反应 脂肪族伯胺的专属反应 6 双缩脲反应侧链具有氨基醇结构的盐酸麻黄碱 盐酸伪麻黄碱可用此反应鉴别 三 特殊杂质检查 杂质来源原料残存检查方法含量测定法 UV法 一 酮体的检查 检查原理利用酮体在310nm波长处有最大吸收 而药物本身在此波长处几乎没有吸收 规定一定浓度溶液在310nm波长处的吸收度限制酮体的量 例中国药典 2005年版 规定肾上腺素中检查酮体的方法为 取本品 加盐酸溶液 9 2000 制成每1ml中含2 0mg的溶液 于310nm波长处测定 吸光度不得过0 05 已知酮体在310nm波长处的百分吸收系数为453 肾上腺素在该波长处无吸收 计算肾上腺素中酮体的限量 二 有关物质检查盐酸去氧肾上腺素 硫酸沙丁胺醇等药物检查方法 TLC中高低浓度对比法配制两种浓度对照溶液 三 盐酸苯乙双胍中有关物质的检查检查方法 纸色谱法 PC 分离后 甲醇萃取 照分光光度法于232nm波长处测定吸光度 控制吸光度以控制有关物质的量 四 含量测定 一 非水溶液滴定法原料药脂烃胺基侧链 显弱碱性 二 溴量法盐酸去氧肾上腺素及其注射液 重酒石酸间羟胺反应摩尔比为1 3 三 比色法盐酸克仑特罗栓具芳伯氨基 可发生重氮化 偶合反应 对照法定量 偶合剂N 1 萘基 乙二胺遇亚硝酸也能显色 干扰比色测定 所以在重氮化后 应加氨基磺酸铵将剩余的亚硝酸分解除去 再加偶合试剂N 1 萘基 乙二胺 四 提取酸碱滴定法 提取中和法 提取容量法 1 原理与方法 盐类可溶解于水 不溶于有机溶剂 游离碱不溶于水 易溶于有机溶剂 依据性质 1 碱化 2 有机溶剂提取 3 中和法测定 直接滴定法用于碱性较强的有机碱 剩余滴定法用于碱性较弱的有机碱 酸滴定液返提后剩余滴定法用于对热不稳定的有机碱 1 碱化试剂最常用氨水 2 提取溶剂 提取溶剂选择的原则 常用的提取溶剂最常用氯仿 2 测定条件的选择 提取溶剂的用量及提取次数通常应提取4次 第一次用量至少应为水液体积的一半 以后几次应各为第一次的一半 3 提取终点的确定用合适的沉淀反应确定 4 指示剂的选择 5 乳化的预防和消除 仪器简单 试剂常用 但操作繁琐 费时 精密度差 准确度差 主要用于制剂分析 3 特点 4 应用 硫酸苯丙胺及