莲藕茎尖组培繁殖法.doc

莲藕茎尖组培繁殖法莲藕茎尖组培，主要用于优良新品种的快速繁殖。其繁殖速度可用以下公式计算：y=mxn式中，y为年繁殖数，m为无菌母株数，x为每个培养周期增殖的倍数，n为全年可增殖的周期次数。 用上式算出的年繁殖数为理论值，年实际产苗数应再乘以移栽成活率，即年实际产苗数 = 年繁殖数(出瓶实数)移栽成活率。 莲藕茎尖组培的工艺流程为：各种培养基的配制与灭菌 外植体的采选、处理与无菌接种 诱导外植体生长与分化(初代培养) 促进中间繁殖体大量增殖(继代增殖) 壮苗与生根培育 炼苗 出瓶与露天栽培。 莲茎尖组培的优点主要是：繁殖速度快，其年繁殖系数(1：1 000)比常规无性繁殖(1：10)增加100倍左右，可加快纯良种的推广速度和减少留种用地；脱毒或减毒(如僵藕病毒)；不带病菌(如腐败病的真菌)；适合良种的工厂化育苗；可离体保存优良新品种的原种；便于运输和携带。其缺点是组培苗当年不能采收莲子或食用藕，生产周期比常规无性繁殖多1年，且组培苗的成活率较低。 花莲、藕莲和子莲的茎尖组培方法，除培养基配方不同外，其余基本相同。现将福建省建宁县莲子科学研究所与福建省农林大学果树研究所首次以子莲(建选17号)茎尖为外植体的组培方法介绍如下。(1)取材时间与组培条件冬眠期至萌芽期为选取外植体的最佳时间。组培时，保持温度25：2，相对湿度7080，光照强度l 500勒，每天照光12个小时。(2)培养基配制初代茎尖分化培养基：MS液体培养基+ZT(玉米素)2毫克升+CA3(赤霉酸)0.5毫克升+3蔗糖+0.7琼脂。继代增殖培养基：MS液体培养基+6- BA(6-苄基腺嘌呤)3毫克升+NAA(a-萘乙酸)0.5毫克升+5蔗糖+0.7琼脂。生根培养基：MS液体培养基+6-BA 0.5毫克升+IBA(吲哚丁酸)0.1毫克升+NAA 1毫克升+5蔗糖+0.7琼脂。培养基的pH值调至5.8左右。培养基装入培养瓶后用高温(121)、高压(107.87 千帕)灭菌。MS培养基是最常用的植物组织培养的培养基，其成分与含量(毫克升)为：硝酸铵，1650；硝酸钾，1900；磷酸二氢钾，170：硫酸镁，370；氯化钙，440；硫酸亚铁，27.8；乙二胺四乙酸二钠，37.3；硫酸锰，22.3；硫酸锌，8.6；硼酸，6.2；碘化钾，0.83；钼酸钠，0.25；硫酸铜，0.025；氯化钴，0.025；甘氨酸，2；肌醇(环己六醇)，100；维生素B1(盐酸硫胺素)，0.1；维生素B3(烟酸)，0.5；维生素B6(盐酸吡哆醇)，0.5。(3)诱导芽分化的初代培养切取建选17号长2厘米左右的顶芽，洗净后依次用洗衣粉溶液清洗浸泡15分钟，70酒精浸泡30秒钟，0.1升汞杀菌1015分钟，无菌水冲洗45次。用解剖刀剥去外层叶鞘,切取长为25毫米的茎尖，接种到初代培养基中。经2530天的培养，即可分化出初代培养苗(23个芽的丛生芽)。初代培养的诱导率和分化率为100和94.29。(4)继代增殖培养将上述初代培养苗在无菌条件下切分成几个单芽或带1个腋芽的茎段(只有l2个芽的可不切分)，逐一转人增殖培养基中培养2530天，待新丛芽长成后，按上述方法再增殖。全年约可繁殖12代，但以前8代为佳(繁殖代数高，变异率高，影响纯度)，继代增殖系数约为1：4.6。(5)生根培养将继代培养苗切成带一叶一芽的茎段，接入生根培养基中培养20天，基本上都可长出较多的根，成为营养器官齐全的组培苗。(6) 顺化将已长根且长势正常的组培苗拿到室外，移栽前先闭瓶炼苗57天，再敞瓶2天(须严防污染)，使渐近田间环境条件、(7)移栽和下田基质的成分为70灭菌土和30灭菌泥炭土。从瓶中取出已锻炼的组培苗，洗净其根部附着的培养基，栽入23厘米深的浅水灭菌基质中。覆盖有透气孔的塑料薄膜保湿，温度保持2025，并适当遮荫，710天后组培苗陆续成活，并长出新叶。成活10天后可揭膜，在叶面上喷洒适量营养液。在组培苗尚未长出新根、新叶时，应加强管理，注意控制水位、光照、温度和湿度，否则植株极易死亡。经3周培养即可转至大田种植。种植前期，晴天注意适当遮荫，防止阳光曝晒而造成萎蔫；雨天注意加盖塑料膜和排水，防止雨水冲刷。至翌年春移栽时，最大的种藕重400克，节间长12.5厘米，直径3.6厘米。不同时期移栽的组培苗的成活率及当年所结藕数均不同，以5月中旬至7月移栽为宜，成活率可达82左右。在这段时间内，越早移栽所结藕数越多(35支)，藕越粗壮。组培苗(试管苗)是一个活体植株，移栽困难，成活率低，而且不能长久存放，不便长途运输。为了解决这些问题，武汉市蔬菜科学研究所于2000年首次进行了试管藕诱导技术的研究，并已初获成功。该技术对藕莲、子莲和花莲均适用。诱导藕莲试管藕的培养基的成分为：初代茎尖分化培养基，MS+6-BA 1.5毫克升+NAA 0.5毫克升+3蔗糖+0.6琼脂；继代增殖培养基，MS+6BA 0.5毫克升+NAA 0.5毫克升+3蔗糖+0.6琼脂；诱导试管藕培养基，MS+6-BA1毫克升+NAA 0.5毫克升+GA(赤霉素)1毫克升+8，蔗糖+0.6琼脂。培养基的pH值为5.8。培养温度、每天光照时间与光照强度分别为,2426、10个小时和1 5002500勒。鄂莲4号较易诱导试管藕(诱导率为86)，其试管藕一般46节，藕长35厘米，主藕粗0.30.5厘米，单支重1克左右。试管藕最好先在大棚苗田内繁育成微型藕(清水土培)，至翌年春再转入大田种植。据武汉市蔬菜科学研究所介绍，用长1.53.5厘米的顶芽的茎尖进行初代培养，其继代增殖系数可高达1：6。选择生长势强和繁殖系数高(生长5个芽以上)的继代培养苗诱导试管藕，诱导率可达85。用试管藕繁育微型藕的最佳定植时间为4月下旬至5月上旬，并要选择无污染和已长有根与叶的大试管藕做种，移栽前须炼苗35天，栽前先用15毫克升赤霉素浸泡试管藕10分钟。用试管藕繁育微型藕的繁殖系数为1：4，微型藕单支重可达0.20.3千克。微型藕是一个完整的休眠器官小藕