火棉胶制片法新.ppt

火棉胶制片法 王卅 关键词 火棉胶 消化纤维 韧性 简便软硬组织联合切片胶棉液旋转切片法 火棉胶简介火棉胶制片的优点火棉胶制片的局限性软硬组织联合切片 火棉胶简介 火棉胶是一种消化纤维 它易燃烧 且能溶于丙酮 丁香油 无水酒精乙醚的混合液 火棉胶不能遇水 遇水则变成白色乳状混浊液 所以盛装火棉胶的容器不能有水 火棉胶制片的优点 火棉胶能弥补石蜡制片的不足 其韧性强 在制片过程中不经加工过程 能减少组织的收缩和硬化 切片不易曲卷及破碎 能保持组织原有结构和形态的完整性 对于较大的较坚硬的组织和囊状易塌陷的器官等的制作较好 其优越性是石蜡切片所不能替代的 此外 切片染色也比较鲜艳 适用于动物大脑 眼球等组织的切片 步骤较石蜡简便 火棉胶制片的局限性 火棉胶制片的浸胶包埋所需时间长 所以在病理诊断中应用较少 其切片不能太薄 约20 40um 石蜡约为10um左右 且不易连成带 火棉胶制片方法的应用 火棉胶制片方法已在软硬组织联合切片中 在皮肤微血管切片中以及在人子宫切片等实例中得到了很好的应用 效果颇佳 软硬组织联合切片中火棉胶切片制作 取材用10 甲醛或福尔马林液进行固定 时间一般为1周左右 固定后进行冲洗 由于骨质中含有大量钙元素 硬度大 故应进行脱钙处理 用8 盐酸 8 甲醛 4 冰乙酸按2 2 1比例配成混合酸 将标本浸入其中 每3天换一次新液 直到组织块成橡胶样硬度为止 脱水步骤与石蜡制片相同 火棉胶的配制要将固体火棉胶块放入100 乙醇及乙醚的等量混合液中即可逐渐溶解 若将火棉胶先放入100 乙醇内12 14h 然后再加入乙醚则溶解的速度更快 浸胶将组织块浸2 4 8 12 15 的火棉胶中各7 14天 浸胶过程火棉胶应存放在暗处 并注意盖上瓶盖 包埋选用卧式染缸或硬纸盒作包埋用盒子 缸内涂一层凡士林 取出浸胶后的标本 将切面朝下放入切片盒中 倒入12 火棉胶溶液 高于1cm 防止胶冷却收缩 材料露在外面 修胶粘胶切片用推拉式切片机进行切片 染色用苏木精伊红火棉胶切片染色法进行染色 切片在染色时不需要脱去火棉胶 直接按以下程序进行 1 用一弯头尖的细玻璃棒将切片从80 的乙醇内挑出 放入蒸馏水中洗去乙醇 2 置苏木精中10 20min 3 水洗5min 4 用1 的乙醇盐酸液脱色 直到褪去颜色为止 然后将切片挑起 待滴下乙醇染液不再有色 封固用树胶进行封固 注意用明胶粘贴剂进行粘贴 切片法中的一些改良 传统的火棉胶配制比较繁琐 费时费力 现在市售的火棉胶一般是液态的胶棉液 便于使用 省时省力 在火棉胶的切片制作的步骤中 还可以用旋转切片机进行切片 旋转式切片机主要用于石蜡切片 所以人们又称之为石蜡切片机 但旋转式切片机代替滑动切片机切火棉胶切片 使用起来十分方便 效果也好 附 旋转切片机使用方法 同石蜡切片法相似 但得采用湿切的方法 每切一片时需用蘸有70 究竟的湿毛笔湿润一下刀口及材料切面 如果做连续切片 可以用吸水纸将一张张切开隔开 按顺序叠放在70 酒精中保存 用火棉胶包埋的含骨质等较硬的组织材料 则要采用拉切的办法 即将切片机微调装置上仅仅有25个刻度 即25微米 则可采用 顺 逆 顺 旋转手轮的办法来解决 在包埋前的材料准备过程中 某些步骤可依据所选材料及实验特点而作简化 如在观察皮肤微血管切片中 由于只研究血管 不观察细胞的微细结构 所以脱水过程仅以脱水彻底及不影响切片操作为宜 所以并不需要由低到高浓度逐步进行酒精脱水而直接进行高浓度酒精脱水 火棉胶切片的保存 火棉胶切片的保存常规应浸于70 80 酒精中 用有机玻璃做容器 但经实验 两周后出现了 溶胀现象 有机玻璃标本盒变形 变软 表面粗糙发毛 有时呈乳白色 火棉胶切片干缩 变形 其原因使因为70 酒精分子渗透力最强 最活泼 故最