ww植物组织中硝态氮测定2010-4.ppt

植物体内硝态氮含量的测定 小白菜 绿叶片 叶柄两个小组合作 一个小组测叶片 另一个小组测叶柄 二者必须是同几株上的材料 三 实验材料 先做 样品中硝酸盐的提取 四 操作步骤 材料剪碎 混匀 精确称取1 0g 3份重复 放入具塞试管 加去离子水至10ml 沸水浴中提取30min 最好2次 本实验提取1次 塞子封口 橡皮筋捆扎在一起 同几株小白菜 一组叶片 另一组叶柄 注 2个小组合作 结果共用 一起分析 10ml需要很准确 一 测定意义 1 作为施肥指标 植物体内硝态氮含量可以反映土壤氮素供应情况 包括 硝态氮 亚硝态氮 2 鉴定蔬菜及其加工品质 蔬菜类作物特别是叶菜和根菜中常含有大量硝酸盐 在烹调和腌制过程中可转化为亚硝酸盐而危害健康 因此 硝酸盐含量又成为蔬菜及其加工品的重要品质指标 叶绿体 胞质 叶片中多还是叶柄中多 人体摄入的硝态氮81 2 来自蔬菜 当人摄取硝酸盐量较大时 体内的NO3 还原成NO2 进入血液 将血液中的血红素变成高铁蛋白 引起肌体中毒 NO2 还可间接与次级胺结合形成强制癌物质 亚硝胺 咸菜的淹制初期咸菜内会大量积累硝酸盐 硝酸盐含量升高数倍或数十倍 当咸菜淹制成熟后硝酸盐含量减少 很低 所以 咸菜没有淹制完成之前 不要食用 青菜放置时间延长一天 体内的硝酸盐含量会不断增加 购买蔬菜后及时食用 不要放置时间过长 减少硝酸盐的积累 3 植物组织中硝态氮代谢过程 硝态氮 高度氧化状态 不能直接合成其它有机化合物 还原后才能利用 如何还原的 NO3 NO2 NH4 aa 细胞质 硝酸还原酶NADH提供氢体 叶绿体 亚硝酸还原酶铁氧还蛋白Fd提供电子 二 测定原理 水杨酸法 在浓酸条件下 NO3 与水杨酸反应 生成硝基水杨酸 硝基水杨酸在碱性条件下 pH 12 呈黄色 最大吸收峰的波长为410nm 在一定范围内 其颜色的深浅与含量成正比 可直接比色测定 三 材料 小白菜 所用仪器 试剂已备好在实验台上 四 操作步骤程序 C g ml 110 99D410 6 30 S22P型分光光度计 2 样品中硝酸盐的提取3 样品液的测定 比色4 结果计算 1 标准曲线的制作 学生不做 过滤到25ml容量瓶 去离子水冲洗残渣 定容 材料剪碎 混匀 精确称取1 0g 3份重复 放入具塞试管 加去离子水10ml 沸水浴中提取20min 塞子封口 橡皮筋捆扎在一起 自来水冷却 2个小组合作 结果共用分析 同几株材料 一组叶片 另一组叶柄 2 样品中硝酸盐的提取 容量瓶 漏斗洗刷一遍 3 样品液的测定 比色 4支试管 空白试管 样品试管3支 加5 水杨酸 硫酸0 4ml 在磁盘中加 移液管立即冲洗 冷却比色 410nm 加9 4ml8 NaOH 加0 2ml蒸馏水 各加0 2ml样品液 试管洗刷一遍 防止不净致重复间误差较大 使用强酸 强碱注意安全 如意外发生外溅 立即用水冲洗和擦洗 两组合作测定须用同一台分光光度计 室温放置20min 溶液加到试管底部 以免影响结果重复性 波长调节旋钮 样品室 显示屏 功能键 测定溶液加到比色杯的2 3 空白对准光路调零 调100透光度 透射比 调零键 开盖 空白对在光路上 调100 按钮 合上比色池的盖 开盖调0 闭盖调100 调模式至吸光度 分光光度计 比色杯用水冲洗 擦镜纸擦净 比色杯倒液不超2 3 用完后及时洗净 废液 因含浓酸 碱 倒在专门收集容器内 切勿倒入水池内 测定结束后 将试管彻底洗刷干净 因含强碱 倒置在试管架上 注意事项 式中 C 标准方程计算得NO3 N浓度 g ml V 提取样品液总量 体积 ml W 样品鲜重 g 4 结果计算 课后计算 NO3