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毕业论文+程功+定稿 齐齐哈尔大学毕业设计（论文）题目好食脉孢菌液态发酵产复合酶条件的研究学院食品与生物工程学院专业班级生物工程092班学生姓名程功指导老师邓永平成绩xx年6月14日齐齐哈尔大学毕业设计（论文）I摘要本论文对好食脉孢菌生产饲用复合酶液态深层发酵条件进行了研究，以提高生产复合酶的产量。 好食脉孢菌经过菌种活化，液体种子培养后接入到发酵培养基中，利用单因子变量实验优选出生产复合酶最适合的碳源种类，氮源种类，碳氮源的配比，无机离子种类及其浓度。 实验结果表明，最适碳、氮源分别为麸皮、玉米黄粉，比例为4:4，在此条件下，产酶活力分别为淀粉酶3144.85U/mL、蛋白酶397.53U/mL、纤维素酶1746.64U/mL、木聚糖酶1576.23U/mL、果胶酶723.38U/mL、脂肪酶296.03U/mL、植酸酶96.64U/mL。 FDA组织认为脉孢菌是少数几种可使用的安全生物，对医药、农业、和环境很重要的一类生物，同时也是遗传学和生物化学研究中非常重要的模式生物。 在我国南方，脉孢菌是酿造发酵食品时的优势生长菌，这种传统食品已有上千年的食用历史。 在远东利用可食用级丝状真菌脉孢菌制备食品（如印尼食品ontijon）也具有悠久的历史与其它真菌相比，脉孢菌具有生长快的特点，其最大比生长速率可达0.4h-1，是其它普通的工业真菌如黑曲霉（A.niger）和产黄青霉（P.chrysogennum）的两、三倍1。 对于好食脉孢菌发酵代谢产物的研究主要集中于类胡萝卜素的生产2。 经诱变后的好食脉孢菌可以产生蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶、木聚糖酶、果胶酶、脂肪酶、植酸酶。 国内外市场的饲用酶制剂种类有纤维素酶、-葡聚糖酶、淀粉酶、果胶酶、蛋白酶、植酸酶、木聚糖酶等，商品酶往往是由几种单一酶制剂按一定配方配比、稀释而成，其成本高，同时难以满足饲料底物成分复杂性的需要；且某些商品酶由于最适作用条件和禽畜肠胃环境关联性不强，又受动物的种类和生长阶段以及使用方法的影响，限制了酶的使用效果；另外，在加工过程中酶活力又有不同程度的损失。 因此，选育酶系丰富的生产菌株，并由该菌株生产高活力、高稳定性、适宜于在禽畜肠胃环境下发挥作用的饲用复合酶制剂是当前研究的迫切任务。 目前有多种方法可以改善植物源饲料品质，与目前普遍采用的物理、化学脱敏方法相比，微生物发酵法是利用微生物发酵产生的酶来降解饲料中的抗营养因子，并累积有益的代谢产物，是一种更加有效、环保的改善植物源饲料品质的方法。 微生物发酵生产的酶制剂被认为是一种最安全的饲料添加剂，被称为“天然”或“绿色”饲料添加剂3。 由于在饲料中添加一定量的酶制剂能有效的促进动物对饲料中营养物质的消化、吸收，增加饲料利用率，同时能增强动物的免疫力，并能较好地降低养殖业的料肉比和减少对环境的污染，因此饲用酶制剂的研究一直是国内外酶工程和饲料科学研究的热点。 齐齐哈尔大学毕业设计（论文）21.2饲用复合酶1.2.1饲用复合酶的涵义饲用复合酶是一类崭新的活性植物饲料添加剂,它是由多种消化酶经混合而成的制剂,它主要功能部分为内源性消化酶(蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶等)和外源性消化酶(植酸酶、半纤维素酶、纤维素酶、果胶酶等)4。 1.2.2饲用复合酶的作用植物饲料中使用复合酶的主要目的是为了提高饲料和养殖企业的经济效益,饲用复合酶应用于动物饲料中有以下几方面的作用。 补充动物内源酶的不足，提高动物对植物饲料的消化能力；分解植物饲料中的抗营养因子，从而提高饲料中营养物质的利用率和转化率；节约蛋白资源，降低饲料成本；改善肠道内微生物区系提高畜禽体内代谢激素水平，提高免疫机能；改变消化部位；减少饲料加工环节，提高经济效益；减少环境污染等等。 1.3微生物发酵产饲用复合酶的研究现状及存在的问题动物、植物、微生物都可以作为酶的。 动、植物的酶一般都是用含酶组织提取处理啊的，含酶组织范围有限，价格较贵，多作医药利用，不利于大量用作植物饲料酶源。 微生物种类繁多，分布广泛，繁殖快，生长周期短，适应性强，各国发酵工业相对都较完善发达，可大批量地生产，因此，应用微生物发酵生产饲用复合酶展示出了诱人的前景。 1.3.1国内外饲用复合酶的研究现状目前微生物发酵产饲用复合酶主要有以下2条途径通过单一菌种发酵获得饲用复合酶。 Fahini等以豆糠为主要培养基质固态培养Aspergillus japonicus生产木聚糖酶、纤维素酶和蛋白酶，活力分别为224.62U/g、8.84U/g、77.57U/g8；Gulati等以麸皮为主要培养基质固态培养Mucor indicusMTCC6333生产了植酸酶、磷酸酶、木聚糖酶、CMC酶、-葡糖苷酶和-淀粉酶，采用阴离子交换和凝胶过滤色谱对植酸酶进行了纯化，确定植酸酶最适作用pH和温度为6.0和709；张冲等固体培养黑曲霉WP1生产饲料用酶，将培养基组分优化后获得植酸酶943U/g，纤维素酶3089U/g，木聚糖酶651U/g，淀粉酶508U/g10。 还有文献报道以橘皮为原料固体培养黑曲霉AS3.3928生产纤维素酶和淀粉酶，发酵产物中纤维素酶活力可达1816U/g，淀粉酶活力达196U/g11；也有利用工程菌生产饲用复合酶的报道。 通过混菌发酵获得饲用复合酶。 许少春等利用三种黑曲霉混菌固态发酵生产含-半乳糖苷酶、-甘露聚糖酶和木聚糖酶齐齐哈尔大学毕业设计（论文）3的复合酶，发酵产物中酶活力分别可以达到 221、 894、10188IU/g12；彭爱铭等发现混合培养地衣芽孢杆菌TS-01和枯草芽孢杆菌TS-02可产较高活力的淀粉酶和蛋白酶，但产甘露聚糖酶和木聚糖酶活力较低13。 1.3.2微生物发酵产饲用复合酶研究中存在的问题微生物是生产饲用复合酶的主要。 见报道较多是由霉菌菌株所产的复合酶，主要研究通过组分优化方式提高复合酶的产量，在研究中还存在如下的问题大多利用固态发酵生产饲用复合酶，酶质量稳定性难以掌控，发酵水平和酶蛋白的产量较低；欠缺对饲用复合酶中各酶的纯化及性质的研究工作，难以开展针对不同使用对象、不同日粮类型的应用研究；微生物发酵生产饲料用酶的产量和活力还有进一步提高的空间。 1.4饲用复合酶的发展趋势与前景饲料工业发展到一定时期，饲用复合酶随之而产生。 工业、农业废渣直接作为饲料，动物不能有效地消化吸收饲料中的营养物质。 利用微生物发酵廉价的工业、农业残渣生产饲用复合酶是饲料工业发展的必然趋势。 饲用复合酶的发展将会改变饲料工业的结构，逐渐用植物源性饲料代替动物源性饲料，将会大幅度的提高工业、农业残渣的利用效率，降低养殖业的成本，提高经济效益，同时减少环境污染。 随着发酵技术的革新，饲用复合酶的发展也将会出现新的变化。 加快对产生复合酶的优良菌株的选育，同时优化发酵条件以提高复合酶的产量。 齐齐哈尔大学毕业设计（论文）4第2章材料与方法2.1菌种好食脉孢菌由齐齐哈尔大学食品与生物工程学院菌种保藏室提供2.2实验设备与试剂2.2.1设备装置实验仪器或装置见表2-1。 2.2.2试剂与材料实验试剂和材料见表2-2。 表2-1实验仪器或装置仪器名称型号生产厂家电子天平FA1104上海良平仪器仪表有限公司光学显微镜XS-212-201日本尼康血球计数板XB.K.25.上海市求精生化试剂仪器有限公司压力蒸汽灭菌锅YXQ-SG46-280S上海博讯实业有限公司医疗设备厂隔水式电热恒温培养箱PYX-DHS350-BS-上海跃进医疗器械厂生化培养箱SPX-150BS-天津市泰斯特仪器有限公司电热恒温鼓风干燥箱DHG-9000A型上海益恒实验仪器有限公司远红外快速恒温干燥箱YHG-30X35-BS上海跃进医疗器械厂恒温水浴槽DK-98-型重庆市银河实验仪器有限公司紫外可见分光光度计TU-1810北京普析通用仪器有限公司冷冻离心机Himac CF15RX美国Beckman高速万能粉碎机FW80天津市泰斯特仪器有限公司酸度计PHS-25上海东靖实业有限公司高速匀浆机FT746天津市泰斯特仪器有限公司移液枪0.2mL/1mL/5mL北京青云卓立精密设备有限公司石英比色皿5mL宜兴市晶科光学仪器有限公司迥转式恒温调速揺瓶柜HYG-型上海欣蕊自动化设备有限公司三角瓶50mL/100mL/250mL四川蜀玻有限责任公司齐齐哈尔大学毕业设计（论文）5表2-2实验材料与试剂试剂材质或规格土豆市售玉米粕市售玉米黄粉市售麸皮市售豆饼市售玉米粉市售豆粕市售豆渣齐齐哈尔大学食堂可溶性淀粉AR天津市凯通化学试剂有限公司干酪素化学纯国药集团化学试剂有限公司羧甲基纤维素钠AR天津市凯通化学试剂有限公司木聚糖色谱纯Sigma公司果胶色谱纯Sigma公司橄榄油化学纯国药集团化学试剂有限公司植酸钠色谱纯Sigma公司葡萄糖AR天津市凯通化学试剂有限公司L-酪氨酸BR国药集团化学试剂有限公司D-木糖AR国药集团化学试剂有限公司D-半乳糖醛酸色谱纯Sigma公司聚乙烯醇1788化学纯天津市四通化工厂乙醇（95%）AR天津市凯通化学试剂有限公司磷酸氢二钠AR天津市凯通化学试剂有限公司磷酸二氢钠AR天津市凯通化学试剂有限公司磷酸二氢钾AR天津市凯通化学试剂有限公司氢氧化钠AR天津市凯通化学试剂有限公司盐酸AR天津市天力化学试剂有限公司琼脂福建省石狮市琼脂副食品加工厂酒石酸钾钠AR天津市凯通化学试剂有限公司3,5-二硝基水杨酸化学纯国药集团化学试剂有限公司苯酚AR沈阳市华东试剂厂钨酸钠AR汕头市西陇化工厂钼酸钠AR天津市科密欧化学试剂研发中心磷酸AR沈阳市时兴化工有限公司无水乙醇AR天津市凯通化学试剂有限公司溴水AR国药集团化学试剂有限公司齐齐哈尔大学毕业设计（论文）6续表2-2实验材料与试剂试剂材质或规格结晶乙酸钠AR天津市凯通化学试剂有限公司冰乙酸AR天津市凯通化学试剂有限公司氨水（25%）AR北京化工厂无水氯化钙AR天津市凯通化学试剂有限公司蛋白胨BR天津市光复精细化工研究所无水碳酸钠AR天津市凯通化学试剂有限公司硝酸（65%）AR北京化工厂蔗糖AR天津市凯通化学试剂有限公司钼酸铵AR天津市元立化工有限公司偏钒酸铵AR天津市科密欧化学试剂有限公司硫酸亚铁AR天津市凯通化学试剂有限公司氯化钾AR天津市科密欧化学试剂研发中心硫酸镁化学纯哈尔滨市新达化工厂三氯乙酸AR天津市光复精细化工研究所酚酞指示剂天津市科密欧化学试剂研发中心2.2.3主要溶液配制 （1）pH6.0磷酸缓冲溶液（0.1mol/L磷酸二氢钠磷酸氢二钠缓冲溶液）甲液称取35.814g磷酸氢二钠（分子量358.14）溶于蒸馏水中，定容至1000mL；乙液称取15.601g磷酸二氢钠（分子量156.01）溶于蒸馏水中，定容至1000mL；取甲液60mL，乙液940mL混合均匀后，测pH，并调pH，倒入试剂瓶中，于4冰箱备用。 （2）DNS试剂称取酒石酸钾钠182g，溶于500mL蒸馏水中，在40下水浴溶解，待完全溶解后，依次加入0.3g3,5-二硝基水杨酸，21g氢氧化钠，5g苯酚，搅拌至溶。 冷却后用蒸馏水定容至1000mL，室温下保存7-10天后使用。 （3）福林酚乙液在1000mL烧瓶回流装置内加入100g钨酸钠，25g钼酸钠，700mL蒸馏水，50mL85%磷酸，100mL浓盐酸，小火回流10小时。 加数滴浓溴水并摇匀，在通风橱进行煮沸15分钟，冷却后加蒸馏水定容到1000mL。 （4）1mg/mL葡糖糖标准溶液将葡萄糖于105干燥至恒重，精确称取100mg，加蒸馏水于容量瓶中定容到100mL。 （5）1mg/mL木糖标准溶液齐齐哈尔大学毕业设计（论文）7将D-木糖于105干燥至恒重，精确称取100mg，加蒸馏水于容量瓶中定容至100mL。 （6）0.1%半乳糖醛酸标准溶液将D-半乳糖醛酸于105干燥至恒重，精确称取100mg，用少量蒸馏水溶解后，定容至100mL，4冰箱保存备用。 （7）100g/mL L-酪氨酸标准溶液将L-酪氨酸于105干燥至恒重，精确称取0.1000g，用0.5mol/L盐酸溶解，溶于100mL蒸馏水中，其浓度为1000g/mL，再吸取此液10mL，用蒸馏水定容至100mL，即配制成100g/mL的酪氨酸标准溶液。 （8）100g/mL无机磷标准溶液精确称取105干燥至恒重的磷酸二氢钾0.2195g，磷酸二氢钠0.2518g，用双蒸水溶解，定容至50mL，即含磷1mg/mL作原液。 取原液10mL定容至100mL（含磷100g/mL），用于测定。 （9）0.4%果胶溶液准确称取0.8g果胶，加入200mLpH6.0磷酸缓冲液中，在50温水中溶解。 冷却室温后定容至200mL。 4冰箱保存备用。 （10）1.0%木聚糖溶液准确称取2.0g木聚糖，加入200mLpH6.0磷酸缓冲液中，在50温水中溶解。 冷却室温后定容至200mL。 4冰箱保存备用。 （11）0.6%淀粉溶液准确称取3g可溶性淀粉，加入500mLpH6.0磷酸缓冲液中，在沸水中溶解。 冷却室温后定容至500mL，4冰箱保存备用。 （12）1.0%羧甲基纤维素钠溶液准确称取5g羧甲基纤维素钠，加入500mLpH6.0磷酸缓冲液中，在沸水中溶解。 冷却室温后定容至500mL，4冰箱保存备用。 （13）1.0%酪蛋白溶液准确称取2g干酪素，加入少量0.5mol/L NaOH溶液溶解，加入一定量pH6.0磷酸缓冲液中，在沸水中溶解。 冷却室温后定容至200mL。 4冰箱保存备用。 （14）植酸钠溶液准确称取0.84g植酸钠，用乙酸-乙酸钠缓冲溶液（pH5.5）溶解，并定容至100mL（该溶液现配现用）。 （15）脂肪酶底物溶液准确称取40g聚乙烯醇，加蒸馏水800mL，在沸水浴中加热，搅拌，直至全部溶解，冷却后定容至1000mL，用干净的双层纱布过滤，取滤液备用。 取上述滤液150mL，加橄榄油50mL，用高速匀浆机处理6分钟（分两次处理，间隔5分钟，每次处理3分钟），齐齐哈尔大学毕业设计（论文）8即得乳白色聚乙烯醇乳化液。 该溶液现配现用。 （16）0.5mol/L NaOH溶液准确称取20g氢氧化钠，用蒸馏水溶解并定容至1000mL。 （17）pH7.5磷酸缓冲液分别称取1.96g磷酸二氢钠和39.62g十二水磷酸氢二钠，用蒸馏水溶解并定容至500mL。 调节溶液的pH到7.50.05。 （18）酚酞指示液准确称取1g酚酞，用95%乙醇溶解并定容至100mL。 （19）0.4mol/L碳酸钠溶液准确称取42.4g无水碳酸钠，用蒸馏水溶解并定容至1000mL，存放在试剂瓶中。 （20）0.4mol/L三氯乙酸溶液准确称取65.4g三氯乙酸，用蒸馏水溶解并定容至1000mL，存放在棕色试剂瓶中。 （21）pH5.5乙酸乙酸钠缓冲液准确称取30.02g结晶乙酸钠，1.11g无水氯化钙，用一定量蒸馏水溶解，再加入1.48mL冰乙酸，用蒸馏水定容至1000mL。 （22）植酸酶颜色终止液钼酸铵溶液准确称取100g钼酸铵，加入一定量蒸馏水溶解，加入10mL25%氨水，用蒸馏水定容至1000mL。 钒酸铵溶液准确称取2.35g偏钒酸铵，溶于200mL蒸馏水中，60搅拌加入22.75%硝酸（7mL浓硝酸+13mL蒸馏水）20mL，用蒸馏水定容到1000mL。 颜色终止液250mL钼酸铵溶液加入250mL钒酸铵溶液，然后，边搅拌边缓慢加入65%的硝酸165mL，冷却用蒸馏水定容至1000mL，现配现用。 2.3发酵液的制备2.3.1培养基斜面培养基（PDA培养基）将200g土豆切条放锅中，加1000mL水，煮沸30分钟，用6层纱布过滤，补水至1000mL，加入20琼脂，20g葡萄糖，PH自然。 121灭菌30分钟，倒斜面，用于活化菌种。 液体种子培养基称取15g麸皮加500mL水，浸泡1小时，煮沸1小时，过滤取汁，加入7.5g蛋白胨，冷却至室温，补加所失水分，条pH在5.0-6.0之间。 121灭菌30分钟。 揺瓶产酶发酵培养基碳源，氮源，碳氮源比，无机离子种类及浓度根据实验需要而定。 齐齐哈尔大学毕业设计（论文）92.3.2实验方法2.3.2.1斜面培养取好食脉孢菌菌种保藏斜面1支，用接种环接入PDA培养基，与28恒温培养3天，与4冰箱保存备用。 2.3.2.2种子制备制备孢子悬液，用无菌水洗下斜面上的孢子，并用接种环挂下孢子，倒入装有玻璃珠的三角瓶中，在震荡器震荡30分钟。 用血球计数板计算孢子悬液的孢子浓度，确定接种量（每瓶接入106个孢子）。 将适量孢子悬液接入到装有50mL液体种子培养基的250mL三角瓶中，于28、150rpm摇床上培养15小时。 2.3.2.3摇瓶发酵培养以1%的接种量将种子接入装有50mL发酵培养基的250mL三角瓶中，28、150rpm震荡培养72小时。 2.3.2.4粗酶液的制备将发酵液用冷冻离心机在10000r/min、4条件下离心10分钟，取上清液即为粗酶液。 2.4复合酶活力的测定2.4.1淀粉酶的活力测定2.4.1.1淀粉酶活力定义采用3,5-二硝基水杨酸法（DNS法），葡萄糖标准曲线见图2-1，2-2。 酶活力定义40pH6.0的条件下，1mL酶液在1小时水解0.6%淀粉生成1mg还原糖所需要的酶量，规定为一个酶活力单位，以U/mL表示。 y=3.4526x-0.0454R2=0.9947-0.200.20.40.60.811.200.050.10.150.20.250.30.35OD值葡萄糖含量/mg图2-1葡萄糖标准曲线齐齐哈尔大学毕业设计（论文）10y=4.1693x+0.0408R2=0.994700.20.40.60.811.200.050.10.150.20.25OD值葡萄糖含量/mg图2-2葡萄糖标准曲线2.4.2蛋白酶活力测定采用Folin-酚法，酪氨酸标准曲线见图2-3。 酶活力定义1mL酶液在40pH6.0的条件下，1小时水解酪蛋白生成相当于1g酪氨酸所需要的酶量，规定为一个酶活力单位，用U/mL表示。 y=96.774x-1.6613R2=0.9969-xx0406080100酪氨酸糖含量/g12000.20.40.60.811.2OD值图2-3酪氨酸标准曲线2.4.3纤维素酶活力测定（DNS法）采用3,5-二硝基水杨酸法（DNS法），葡萄糖标准曲线见图2-1，2-2。 酶活力定义1mL酶液在40pH6.0的条件下，1小时水解羧甲基纤维素钠生成1mg还原糖所需要的酶量，规定为一个纤维素酶活力单位，以U/mL表示。 2.4.4木聚糖酶活力测定采用3,5-二硝基水杨酸法（DNS法），葡萄糖标准曲线见图2- 4、2-5。 酶活力定义1mL酶液在45pH6.0的条件下，1分钟水解木聚糖生成1mg同木糖的还原糖所需要的酶量，规定为一个木聚糖酶活力单位，以U/mL表示。 齐齐哈尔大学毕业设计（论文）11y=4.9865x+0.0468R2=0.993200.20.40.60.811.21.41.6木糖含量/mg1.8200.050.10.150.2OD值0.250.30.350.4图2-4木糖标准曲线y=5.2351x-0.0109R2=0.9969-0.200.20.40.60.811.21.41.61.8200.050.10.150.2OD值0.250.30.350.4木糖含量/mg图2-5木糖标准曲线2.4.5果胶酶活力的测定采用3,5-二硝基水杨酸法（DNS法），半乳糖醛酸标准曲线见图2-6。 酶活力定义1mL酶液在45pH6.0的条件下，1分钟水解果胶生成1mg半乳糖醛酸所需要的酶量，规定为一个木聚糖酶活力单位，以U/mL表示。 y=2.9144x+0.0077R2=0.999600.20.40.60.811.200.10.2OD值0.30.4半乳糖醛酸含量(mg)图2-6半乳糖醛酸标准曲线齐齐哈尔大学毕业设计（论文）122.4.6脂肪酶活力的测定1mL酶液，在40pH7.5条件下，1分钟水解底物产生1mol的可滴定的脂肪酸，即为一个酶活力单位，以U/mL表示。 2.4.7植酸酶活力的测定在一定温度下，1mL酶液每小时从一定浓度的植酸钠溶液中释放1nmol的无机磷为一个酶活力单位，以U/mL表示。 y=35.947x+0.1073R2=0.999801020304050607000.20.40.60.811.21.41.61.8OD值无机磷含量/g图2-7定磷标准曲线2.5液体培养工艺条件研究2.5.1氮源的确定实验以3%的麸皮作为碳源，选择合适的氮源。 氮源的种类分别为5%豆粕粉、5%玉米黄粉、5%干豆渣、5%豆饼粉、5%玉米粕和5%蛋白胨，装液量为250mL三角瓶装50mL，初始PH为5.0，培养温度为28，摇床转速150r/min，避光震荡培养72小时，将发酵液4，10000r/min离心10分钟，取上清液测定酶活。 2.5.2碳源的确定由上步实验确定氮源为玉米黄粉，选择合适的碳源。 碳源的种类分别为3%蔗糖、3%葡萄糖、3%麸皮、3%玉米粉和3%土豆汁。 装液量为250mL三角瓶装50mL，初始PH为5.0，培养温度为28，摇床转速150r/min，避光震荡培养72小时，将发酵液4，10000r/min离心10分钟，取上清液测定酶活。 2.5.3碳氮源配比的确定由上步实验确定碳源为麸皮。 选用碳源、氮源干重比分别为7: 1、6: 2、5: 3、4: 4、3: 5、2: 6、1:7进行发酵实验。 装液量为250mL三角瓶装50mL，初始PH为5.0，培养温度为28，摇床转速150r/min，避光震荡培养72小时，将发酵液4，10000r/min齐齐哈尔大学毕业设计（论文）13离心10分钟，取上清液测定酶活。 2.5.4培养基中无机离子种类及浓度的确定在已优化的基本发酵培养基的基础上，选取CaCl、KCl、MgSO 4、FeSO4四种无机盐组分，浓度分别为0.01%，0.1%进行实验，以确定对菌体产酶有明显激活作用的离子及其最适浓度。 装液量为250mL三角瓶装50mL，初始PH为5.0，培养温度为28，摇床转速150r/min;避光震荡培养72小时，将发酵液4，10000r/min离心10分钟，取上清液测定酶活。 齐齐哈尔大学毕业设计（论文）14第3章结果与讨论3.1氮源筛选结果微生物生长和产物合成都需要氮源。 氮源主要用于菌体细胞物质和含氮代谢物的合成。 培养基中使用的氮源可分为两大类无机氮源和有机氮源。 常用的有机氮源有花生饼粉、黄豆饼粉、棉子饼粉、玉米浆、酵母粉、鱼粉、蛋白胨等。 本论文利用玉米黄粉、蛋白胨、玉米粕、豆粕、豆渣和豆饼六种有机氮源对好食脉孢菌产饲用复合酶培养基中的氮源进行研究。 表3.1-1淀粉酶氮源吸光值平均吸光值酶活力/(U/mL)123玉米黄粉0.0320.0200.0330.0341079.820.0350.0170.036蛋白胨0.0050.0140.0110.0122549.500.0040.0120.012玉米粕0.0210.0090.0020.01595.820.0180.0080.003豆粕0.0010.0050.0340.01925315.960.0000.0060.032豆渣0.0060.0340.0310.0331028.040.0040.0320.035豆饼0.0080.1020.0080.0082500.0060.0950.011齐齐哈尔大学毕业设计（论文）15表3.1-2蛋白酶表3.1-3纤维素酶氮源吸光值平均吸光值酶活力/(U/mL)123玉米黄粉0.1360.1380.1130.132366.850.1380.1500.119蛋白胨0.1250.0880.0850.0968346.260.1180.0830.082玉米粕0.8930.0590.0420.0482518.050.9370.0470.045豆粕0.0400.8010.0000.041514.130.0430.7280.001豆渣0.0120.0090.0030.01100.0110.0120.002豆饼0.1190.0380.0400.03912.680.1070.0430.035氮源吸光值平均吸光值酶活力/(U/mL)123玉米黄粉0.0360.0330.0470.039167449.140.0380.0350.046蛋白胨0.0040.0090.0070.00716700.0050.0080.010玉米粕0.0240.0100.0090.01516734.880.0270.0120.009豆粕0.0150.0130.0110.0126700.0160.0120.009豆渣0.0080.0370.0460.03925450.570.0050.0330.041豆饼0.0100.0090.0120.0103300.0080.0110.012齐齐哈尔大学毕业设计（论文）16表3.1-4木聚糖酶表3.1-5果胶酶氮源吸光值平均吸光值酶活力/(U/mL)123玉米黄粉0.1620.2360.1920.1981675174.820.1580.2450.196蛋白胨0.1750.2060.1920.1928335041.740.1730.2130.198玉米粕0.0910.0530.0530.065331862.820.0980.0520.045豆粕0.0750.0740.0380.063331813.020.0770.0750.041豆渣0.0640.0990.0950.08652390.640.0610.0960.104豆饼0.0670.1120.0910.091672519.580.0720.1200.088氮源吸光值平均吸光值酶活力/(U/mL)123玉米黄粉0.0700.0070.1150.09351401.060.0770.0090.112蛋白胨0.0450.0240.0330.033167521.820.0410.0210.035玉米粕0.0500.0080.0060.053810.780.0560.0090.004豆粕0.0160.0410.0150.023373.680.0120.0380.016豆渣0.0120.0450.0140.024388.200.0170.0480.008豆饼0.0410.0410.0520.04333669.900.0440.0350.047齐齐哈尔大学毕业设计（论文）17表3.1-6脂肪酶氮源空白耗碱量/mL样品耗碱量/mL平均耗碱量/mL酶活力/(U/mL)123玉米黄粉3.755.175.435.155.345319.025.555.455.32蛋白胨6.457.747.726.617.7425258.487.637.886.66玉米粕9.359.9810.7010.2510.322194.4810.0510.7510.20豆粕10.3513.0012.7512.9512.822494.4013.xx.6112.42豆渣9.809.9111.0710.8810.605160.9810.0211.1210.63豆饼4.806.426.096.436.3383307.686.506.156.44表3.1-7植酸酶由以上表3.1-1至3.1-7可得表3.1-8如下，由可以看出最佳的氮源为玉米黄粉。 氮源吸光值平均吸光值酶活力/(U/mL)123玉米黄粉0.0910.0890.1020.09316720.760.0870.0980.092蛋白胨0.0030.0050.0010.002331.140.0020.0040.001玉米粕0.0020.0030.0050.0041.500.0020.0010.003豆粕0.0870.0670.0120.07617.040.0860.0640.009豆渣0.0620.0580.0620.06013.560.0670.0540.057豆饼0.0010.0030.6240.00150.960.0010.0010.586齐齐哈尔大学毕业设计（论文）18表3.1-8氮源的筛选结果氮源（5%）蛋白酶(U/mL)淀粉酶(U/mL)纤维素酶(U/mL)木聚糖酶(U/mL)果胶酶(U/mL)脂肪酶(U/mL)植酸酶(U/mL)豆粕粉14.13315.9601813.02373.68494.4017.04玉米黄粉66.851079.82449.145174.821401.06319.0220.76干豆渣01028.04450.572390.64388.xx0.9813.56蛋白胨46.2649.5005041.74521.82258.481.14豆饼粉12.68002519.58669.90307.680.96玉米粕18.0595.8234.881862.82810.78194.401.503.2碳源筛选结果碳源对微生物生长代谢的作用主要为提供细胞的碳架，提供细胞生命活动所需的能量，提供合成产物的碳架。 碳源在制作微生物培养基或细胞培养基时有重要的作用，为微生物或细胞的正常生长，分裂提供物质基础。 碳源分为有机碳源和无机碳源。 常用的有机碳源为葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、淀粉、纤维素等；无机碳源为CO2和一些碳酸盐。 本论文利用麸皮、土豆汁、玉米粉、葡萄糖和蔗糖有机碳源作为碳源，研究好食脉孢菌产饲用复合酶的最佳碳源。 根据实验得以下结果。 表3.2-1淀粉酶碳源吸光值平均吸光值酶活力/(U/mL)123麸皮0.0420.0270.0330.03432757.110.0380.0300.036土豆汁0.0010.0350.0410.03652894.710.0010.0330.037玉米粉0.0080.0080.0020.0081112.320.0060.0100.001葡萄糖0.0070.0080.0110.0091174.860.0060.0130.009蔗糖0.0050.0040.0050.0048912.190.0040.0060.005齐齐哈尔大学毕业设计（论文）19表3.2-2蛋白酶表3.2-3纤维素酶碳源吸光值平均吸光值酶活力/(U/mL)123麸皮0.1510.0320.1210.1317566.530.1370.0370.118土豆汁0.0860.0780.0630.0791736.010.0900.0860.072玉米粉0.0210.0130.0320.026255.270.0250.0090.027葡萄糖0.0100.0010.0000.0057500.0090.0030.000蔗糖0.0370.0090.0430.0413.260.0420.0070.038碳源吸光值平均吸光值酶活力/(U/mL)123麸皮0.0050.0040.0080.0065339.510.0080.0040.010土豆汁0.0420.1020.1180.10552403.310.0350.0920.110玉米粉0.0030.0060.0010.003266.540.0010.0020.005葡萄糖0.0050.0050.0050.005308.230.0030.0040.008蔗糖0.0010.0060.0030.0055318.660.0030.0040.005齐齐哈尔大学毕业设计（论文）20表3.2-4木聚糖酶表3.2-5果胶酶碳源吸光值平均吸光值酶活力/(U/mL)123麸皮0.0240.0420.0350.0385953.260.0250.0440.033土豆汁0.0110.1090.0990.105752713.560.0150.1120.103玉米粉0.0000.0010.0030.00450.210.0000.0000.005葡萄糖0.0000.0010.0040.00324.030.0020.0050.004蔗糖0.0100.0250.0200.018416.660.0150.0230.015碳源吸光值平均吸光值酶活力/(U/mL)123麸皮0.0720.0780.0560.06583997.770.0680.0670.054土豆汁0.0140.1440.1230.1341991.150.0150.1480.121玉米粉0.0010.0040.0010.002777.840.0030.0040.003葡萄糖0.0100.0030.0030.00825158.720.0090.0050.003蔗糖0.0000.0020.0000.00267.640.0010.0050.003齐齐哈尔大学毕业设计（论文）21表3.2-6脂肪酶氮源空白耗碱量/mL样品耗碱量/mL平均耗碱量/mL酶活力/(U/mL)123麸皮3.005.455.505.265.342468.425.405.215.23土豆汁3.154.784.694.564.728315.634.754.824.77玉米粉3.024.344.524.004.287253.444.154.594.12葡萄糖3.513.753.803.823.772