G试验过去与现在ppt.ppt

G试验 过去与现在 南京军区南京总医院呼吸与重症医学科赵蓓蕾2015年7月 二 G试验的现状 三 G试验的影响因素 四 G试验的临床应用策略 一 G试验简介 一 G试验简介 IFI的诊断方法 影像学组织病理学 细胞学培养血清学方法 抗体检测真菌抗原和菌体成分检测半乳甘露聚糖 Galactomannan GM 1 3 D 葡聚糖分子生物学方法 PCR unavailable 传统方法 赵蓓蕾 侵袭性真菌感染的诊断方法 中华结核和呼吸杂志 2007 11 半乳甘露聚糖 galactomannan GM 1 3 D 葡聚糖 1 3 beta d glucan BDG 其他菌体成分 或抗原 烯醇化酶 48kD烯醇化酶为假丝酵母菌属特异性抗原假丝酵母菌热敏抗原隐球菌荚膜多糖抗原组织胞浆菌抗原真菌代谢产物D 阿拉伯糖醇 真菌菌体成分与代谢产物检测 赵蓓蕾 文昱婷 等 中华结核和呼吸杂志2007 30 11 839 43文昱婷 赵蓓蕾 等 中华结核和呼吸杂志2008 31 4 287 90吕沛华 赵蓓蕾 等 中华结核和呼吸杂志 2007 30 1 31 34吕沛华 赵蓓蕾 等 中华医院感染杂志 2007 11 GM检测与G试验 半乳甘露聚糖 GM 诊断阈值 1 5敏感性72 7 大鼠 78 6 病人 特异性84 2 87 5 随感染时间延长 诊断IPA的敏感性增高有可能判断疗效与预后赵蓓蕾 文昱婷 等 中华结核和呼吸杂志 2007 30 11 839 43文昱婷 赵蓓蕾 等 中华结核和呼吸杂志 2008 31 4 287 901 3 D葡聚糖 BDG 诊断阈值20ng L Fungitec G试剂盒 敏感性84 特异性91 不能区分曲霉与念珠菌感染吕沛华 赵蓓蕾 等 中华医院感染杂志 2007 17 11 1328 31吕沛华 赵蓓蕾 等 中华结核和呼吸杂志 2007 30 1 31 34 7 G试验 早期诊断价值 1 BG值升高平均早于发热5d早于呼吸道症状平均10 7d早于HRCT检查平均9 3d对于念珠菌血症 G试验是首选检查 2 1 高蕾 周新 中国感染与化疗杂志 2008 3 2 123 125 2 J Clin Microbiol 2008 46 1009 1013 G试验 BDG检测 1 3 D 葡聚糖 1 3 beta d glucan BDG 由D 葡萄糖聚合而成 以 1 3 糖苷键连接的葡萄糖残基骨架作为主链 分枝状 1 6 糖苷键连接的葡萄糖残基作为侧链广泛存在于除接合菌外的真菌细胞壁中 占真菌细胞壁成分的50 以上 在酵母菌中含量最高 其他微生物如细菌 病毒 以及动物 人体细胞均无此成分 G试验 BDG检测原理能特异性激活自鲎变形细胞溶解产物提取的G因子 因此一般用G试验方法检测常用的检测试剂盒有Fungitec G和Glucatell主要试剂G因子来自于不同种的鲎诊断IFI的推荐阈值Fungitec G 20ng LGlucatell 60ng L G试验 临床意义血浆BDG检测是筛选IFI的有用方法诊断IFI的敏感性 特异性约80 90 浅表真菌感染或真菌定植 BDG极少释放入血液中有效的抗真菌治疗能降低血浆BDG水平 连续检测有助于判断病情变化和治疗反应不能区分曲霉与酵母菌感染不能用于新生隐球菌感染和曲霉球的诊断肺曲霉球 曲霉呈寄居状态而非侵袭性感染新生隐球菌为 葡聚糖 且具有厚荚膜 存在问题 影响因素多不同的研究结果之间存在较大差异各实验室之间差异大 质量控制诊断阈值临床应用价值有待进一步的评价 二 G试验的现状 相关指南 欧洲指南 G试验已作为微生物学证据列入欧洲IFD的诊断指南 中国感染与化疗杂志2008年9月20日第8卷第5期ChinJInfectChemother September2008 Vol 8 No5侵袭性真菌病修订定义 欧洲癌症研究和治疗组织 侵袭性真菌感染协作组和美国国立变态反应和感染病研究院真菌病研究组 EORTC MSG 共识组微生物学标准直接检查 细胞学 直接镜检或培养 1 痰液 支气管肺泡灌洗液 支气管刷标本 或鼻窦抽取液呈霉菌阳性 显示下列中1项 呈现真菌成分显示为霉菌培养检出霉菌 即曲霉 镰刀霉 接合菌和赛多孢菌 间接检查 检测抗原或细胞壁组分 2 曲霉病 血浆 血清 支气管肺泡灌洗液或脑脊液标本检测出半乳甘露聚糖抗原3 IFD 除外隐球菌属和接合菌 血清1 3 D葡聚糖检测阳性 ESCMID guidelineforthediagnosisandmanagementofCandidadiseases2012 diagnosticprocedures 相关指南 欧洲临床微生物与感染性疾病学会 ESCMID 2012念珠菌血症诊断指南 推荐级别 相关指南 美国指南 G试验已作为微生物学证据列入美国IFI的诊断指南 传染病信息2014年02月28日第27卷第1期InfectDisInfo Vol 27 No 1 February28 20142013年美国 感染性疾病微生物学实验室诊断应用指南 简介 病原及标本处理部分表6医疗相关和医院获得性肺炎及呼吸机相关性肺炎实验室诊断Table6Laboratorydiagnosisofhealthcare associatedpneumonia hospital acquiredpneumoniaandventilator asso ciatedpneumonia 相关指南 中国指南 G试验作为诊断标准已纳入肺部真菌感染患者诊断标准与治疗原则中 中华结核和呼吸杂志2007年11月第30卷第11期ChinJTubercRespirDis Novembert2007 Vol 30 No 11肺真菌病诊断和治疗专家共识中华医学会呼吸病学分会感染学组中华结核和呼吸杂志编辑委员会共识中声明 G试验 1 3 D葡聚糖 GM试验阳性是肺部真菌病的临床诊断中微生物学证据之一 三 影响G试验的因素 G试验的影响因素 临床方面标本溶血 黄疸和脂肪血 标本中存在葡聚糖酶采集 处理过程中污染疾病某些细菌败血病患者 尤其是链球菌败血症 G 杆菌败血症诊疗操作应用纤维素膜进行血液透析患者医疗物品中含有葡聚糖 棉纱布 海绵某些血液制品可能含有葡聚糖白蛋白 凝血因子 免疫球蛋白等药物抗肿瘤类药物 香菇多糖 裂殖菌多糖 磺胺类药物 多粘菌素E 厄他培南 头孢噻肟 头孢吡肟 氨苄西林 舒巴坦 等食物 蘑菇类实验室方面 影响G试验结果的实验室因素 1试剂因素2设备因素3实验条件4标本要求 2020 3 10 20 可编辑 1 试剂因素 金山川VSFungitell 诊断试剂盒 符合率敏感性特异性 金山川诊断试剂盒 Fungitell 诊断试剂盒 检测相同血清样本 评估 3家三甲医院288样本 符合率分析 阳性符合率为93 6 阴性符合率为90 7 总符合率为91 7 由Kappa分析可知 Kappa值为0 844 P 0 001 两者有很好的一致性 敏感性和特异性分析 考核试剂的敏感性为81 11 特异性为87 16 与临床实验结果相符 与血培养 组织病理血结果比较 Fungitell AssociatesofCapeCod Inc CapeCod MA Clin VaccineImmunol 2011 DelBono 2113 7 受试分组 G试验结果 Clin VaccineImmunol 2011 DelBono 2113 7 3组患者的BG水平 324 162 27 Clin VaccineImmunol 2011 DelBono 2113 7 敏感性 特异性 阳性预测值 阴性预测值与阈值的关系 Clin VaccineImmunol 2011 DelBono 2113 7 敏感性 特异性 阳性预测值 阴性预测值与阈值的关系 Clin VaccineImmunol 2011 DelBono 2113 7 具备开机自检程序 提示用户仪器性能信息 具备问题诊断程序 指导客户处理仪器问题 完善用户管理系统 提高安全性 操作简便 记录并自动生成最终检测报告 2 设备因素仪器升级优势 S型450波长比色法 X型405波长碱处理法 广州某医院典型对比差异数据分析 X型仪器优于S型仪器 试验应在无菌 无灰尘 无电流干扰和无震动的环境中进行 建议使用生物安全柜 试验时应尽量避免阳光直接照射 试验环境温度为10 30 试验中使用的所有器具和耗材均应符合无菌 无热源要求 操作者应有一定防护措施 至少应戴口罩 手套 不能有滑石粉 帽子和工作服 3 实验条件 使用无菌无热原的真空血清采血管 公司推荐使用BD真空采血管 标本为血清 标本采集应无菌操作 按照3000r min 1600g 10min的规范方法分离血清 黄疸 溶血和脂肪血视为特殊标本 4 标本要求 Clin VaccineImmunol 2011 DelBono 2113 7 G试验对于念珠菌血症的诊断似乎可靠 但需要仔细解释其阳性或阴性结果 密切结合临床 10 SinghN PatersonDL ClinMicrobiolRev 2005 18 44 69 四 G试验的临床应用策略 提高特异性和阳性预测值 11 MunozP Gu