BD调节性T细胞.doc

关关于于调调节节性性 T 细细胞胞 不同的亚群 类似的功能 调节性 T 细胞 Tregs 在维持机体免疫平衡方面具有非常重要的作用 Tregs 通过抑制其他 T 细胞的 功能而抑制免疫反应 一些自身免疫性疾病如多发性硬化症 活动性类风湿性关节炎 I 型糖尿病等 Tregs 的数量和功能均会发生变化 在许多恶性疾病如肺 胰腺和乳腺癌等已经发现 Tregs 明显增高 Tregs 也阻断抗肿瘤免疫反应从而导致死亡率上升 CD4 和 CD8 Tregs Tregs 目前确定的两个主要类别为 CD4 Tregs 和 CD8 Tregs CD4 Tregs 分为两类 天然 Tregs n Tregs 其表达 CD25 和 FoxP3 和适应性或者称为诱导性 Tregs i Tregs 天然 Tregs 源自胸腺的 CD4 细胞 该细胞 CD25 强阳性并 表达转录因子 和系标志 FoxP3 n Tregs 约占总 CD4 T 细胞的 5 10 并可以在 T 淋巴细胞发育的单阳性阶段首先 出现 2 由于具有与自身抗原的高亲和力而被阳性选择 该 信号传递时通过 T 细胞受体和胸腺基质细胞上的带有自身抗 原肽的 MCH II 复合体相互作用传递 3 n Tregs 属于细胞因 子非依赖型 适应性或诱导性 Tregs 来源于胸腺 CD4 单阳性细胞 他们分 化为 CD25 和 FoxP3 表达的 Tregs i Tregs 需要有足够的 同源抗原和特异的免疫调节因子如 TGF IL 10 及 IL 4 刺 激 4 FoxP3 是目前 Tregs 最特异的标记 尽管有报道一小部分 Tregs 中 FoxP3 阴性 转录因子 FoxP3 作为 Tregs 标志的发 现使科学家们能够更好地确定 Tregs 细胞群并且发现包括 CD127 在内的其 他的 Tregs 标志 CD127 的发现 从 Barbara Fazekas de St Groth 癌症医学与细胞生物学研 究所 悉尼 澳大利亚 Jeffrey Bluestone UCSF 的糖尿 病中心 旧金山 加州 美国 实验室的研究和 BD 生物 科学实验室证据表明 CD127 在调节性 T 细胞的表达是下 调的 与 FoxP3 的表达呈负相关 而且 调节性 T 细胞在 表达高和低水平 CD25 的细胞群中也是以不同水平存在的 CD127 的发现提供了 Tregs 的一个新的表面标记 5 6 从而可 以通过流式细胞仪分选活的 Tregs 进一步进行下游分析 CD127 是异构 IL 7 受体的一部分 异构 IL 7 受体是由 CD127 和通用 链组成 链在其他细胞因子受体 IL 2R IL 4R IL 9R IL 15R 和 IL 21R 也存在 CD127 表达于胸腺细胞 T 和 B 祖细胞 成熟 T 细胞 单核细胞 以及一些其他的淋巴细胞和骨骼细胞上 有研究显示 IL 7R 在成熟 T 细胞增殖和分化过程中其重要作用 体外实 验表明 CD127 的表达随着 T 细胞活化而下调 7 9 这是因为 FoxP3 与 CD127 启动子相互作用从而降 低 Tregs 的 CD127 表达 6 Treg 亚群 自然调节 T 细胞 nTregs 诱导调节 T 细胞 iTregs nTregsTr1Th3 显型CD4 CD25int high CD127lowCD4 CD25 CD4 CD25 from CD25 precursors 其他辅 助标记 CTLA4 GITR FoxP3 CD127low CD25low variable CD45RBlow FoxP3 CD25low variable CD45RBlow FoxP3 抑制Contact dependent granzyme B dependent makes TGF Through cytokines produces IL 10 Through cytokines produces TGF 靶细胞APC and T effector cellsT effector cellsNot yet Identified 包含 CD28 Thymic development and maintenance in periphery Not for development or function Not involved 体内作 用 Suppression of autoreactive T cells Mucosal immunity inflammatory response Mucosal immunity inflammatory response 体外扩 增 Expandable using TCR CD28 stimulation and IL 2 CD3 IL 10 rehnoic acid CD3 TGF 调调节节性性 T 细细胞胞的的鉴鉴别别 FoxP3 经典的 Tregs 标志 尽管已有多种标志可以用于 Tregs 的鉴别 但在 FoxP3 发现之前尚未有特异的 Tregs 标志 目前 FoxP3 作为唯一的 Tregs 特异标志已经在 Sakaguchi 和 Rudensky 的研究中报道过 FoxP3 也称 Scurfin IPEX 和 JM2 是转录因子 forkhead 或 winged helix 家族的转录抑制因子 13 它在所有 CD4 Tregs 中表达 并具有调节活性 FoxP3 的突变与鼠遗传性自身免疫性皮屑疾病和人 的 IPEX 疾病 免疫调节异常 多发内分泌疾病和肠病 X 染色体综合症 密切相关 14 FoxP3 对于确定分选出的 Tregs 的纯度和产量 及鉴定确定的 Tregs 都非常有用 但是 它不适用于 分离活的 Tregs 因为 FoxP3 的染色必须要固定细胞并破膜 所以这 CD127 是更好的选择 FoxP3 染色 来自于 BD 生物科学的人 FoxP3 单克隆抗体 克隆 259D C7 与人 FoxP3 转录因子所有已鉴定过的亚 型都能反应 并且也与猕猴 恒河猴和狒狒有交叉反应 BD Pharmingen 的人 FoxP3 抗体和缓冲液试剂盒是一种高效地用来检测 FoxP3 阳性 Tregs 的试剂盒 这种简单易行的缓冲液体系可以使研究者只用很少的步骤就能完成细胞固定和破膜 但如果用冻存样 品的方法至少需 72h 支持新的目标标记列表 FoxP3 是一种经常用于调节 T 细胞鉴定 分离和表征的标记物 但是 Tregs 依然是目前研究的热点 并且文献中发表了新型目标标记物的列表 为了支持这些新的发现 BD Bioscience 也不断地研发出新的高质量试剂和溶液 CD39 增强 Tregs 的鉴别 以前研究发现 CD39 主要位于 B 细胞 树突细胞和某些 T 细胞亚型 现在的研究表明 CD39 与 FoxP3 共表达于人和小鼠的 CD4 Tregs 15 这一发现也增加到 Tregs 不断增加的表面标记物列表中 列表中 有诸如 CD25 CD45RA HLA DR 和 CTLA 4 等表面标记物 这些标记物对于 CD4 Tregs 的识别和 功能鉴定是至关重要的 细胞外 ATP 和它的代谢产物是调节大部分细胞和器官功能的有效调节分子 细胞 ATP 释放的是组织 破坏的标记和激活免疫系统的一种危险 信号 CD39 水解细胞外 ATP 或者其他三磷酸苷 成为相 应的核苷酸 如 AMP 等 细胞外的单磷酸核苷很好被可溶性或者膜结合的 5 外核酸酶 CD73 降 解为核苷 如腺苷 然后 细胞外周的腺苷介导抗炎症性的 T 细胞反应 CD39 和 CD73 的共表达 被认为是 Tregs 介导免疫抑制的一个关键机制 16 17 BD Pharmingen 的抗人 CD39 Clone T 66 单克隆抗体是人 Tregs 的新型标记物 并且提供 PE 及 APC 标记的即用型流式细胞术试剂盒 T 66 能够识别 ENTPD1 ENTPD1 是一种胞外酶 属于核苷 三磷酸二磷酸酶类家族 ENTPDase 该家族的成员参与胞外核苷酸的分解代谢 控制胞外核苷三 磷酸的量 NTPs CD152 CTLA 4 细胞毒性 T 淋巴细胞抗原 4 CTLA 4 或 CD152 在对 Tregs 的抑制功能中是至关重要的 18 在 zheng 等人的一项研究中 将 CD152 转染 CD25 FoxP3 T 细胞 得到具有抑制功能且并不表达 FoxP3 19 其他研究组的研究也表明 阻断 CD152 也减弱 Tregs 细胞的抑制活性 CD152 的异常表达在自身免 疫疾病如风湿性关节炎等中也有一定作用 19 CD152 在树突细胞中介导抑制活性是通过下调树突细胞 CD80 和 CD86 的表达 进而影响抗原呈递细 胞激活其他 T 细胞的能力 20 关于 CD152 的研究促进了我们对于 Tregs 功能的理解 已知的 Tregs 细胞类型 现有的标记物以及新 兴的标记物将极大地促进 Tregs 研究的新发现 已有报道的人类调节性 T 细胞标记 这份表格集锦了人类调节性 T 细胞研究的中最常用到的试剂 我们的试剂品种在不断扩展 敬请访问 来获得最新产品信息 抗原人类表型参考文献编号 CCR4positive21 22 CCR6positive22 CCR7positive23 CD4positive12 24 25 CD11ahigh26 27 CD25positive28 CD39positive and negative subsets29 CD45RApositive30 CD45R0positive31 CD46positive10 CD54 ICAM 1 high CD62Llow and high subsets32 CD69positive33 CD103positive34 CD122 IL 2R positive CD127low5 6 CD134 OX 40 positive and negative subsets35 CD152 CTLA 4 high36 37 CD154 CD40L positive38 CD223 LAG 3positive39 40 46 CXCR4positive33 CXCR5positive33 CXCR6positive33 FoxP3positive41 42 GITRhigh43 GPR83positive44 Granzyme Bpositive45 IL 10positive46 IL 35positive47 MHCIIpositive48 Neuropilin 1positive49 Perforinpositive50 TGF positive51 调调节节性性 T 细细胞胞的的富富集集 利用 CD4 CD25 和 CD127 富集 Tregs Tregs 含量低 为了下游实验富集往往是必要的 已有几种富集全部 Tregs 或其亚群的方法 虽然 FoxP3 是目前公认的 Tregs 最特异的指标 但因其位于细胞内而限制了它在分离活的 Tregs 中的应用 其他用于富集的有阴性选择的 阳性选择的或联合使用 一种已报道的阴性选择方法是除去表达 CD127 和 CD49d 的细胞 10 阳性选择是收集表达 CD4 阳性和 CD25 强阳性的细胞 联合的方法包括 在细胞分选前使用磁珠除去非目的细胞群 一个最好的富集方法是收集 CD4 CD25 和 CD127 细 胞 利用 CD4 和 CD25 富集 Tregs 在人类 最初的 Tregs 亚群的分析表明只有体外高水平表达 CD25 约占总 CD4 T 细胞 2 3 的细 胞在体外才有抑制功能 11 12 这是相对于把高表达 CD25 的细胞都当做 Tregs 的小鼠细胞而言 4 5 而 且表达低到中等水平 CD25 的细胞在体外没有抑制活性 另外 CD25 表达的高与低水平缺乏统一标准并且用流式细胞仪分选人的活 Tregs 时有一定局限性 结果 许多研究者仅选择高表达 CD25 的细胞 明显减少 Tregs 分选产量 这些结果迫使要想得到高 产量的人 Tregs 必须寻找除了 CD4 和 CD25 外其他的表面标记 cvscc 用 CD127 判定和分离人的活 Tregs 用 CD4 CD25 和 CD127 染色人 CD4 T 细胞可以富集活的 Tregs 细胞进行进一步 培养或其他的体外实验 用这种方法 通过细胞分选可快速分出活的 Tregs 细胞 BD Pharmingen 的人调节 T 细胞试剂盒 将三色试剂混在一起 利用 CD4 CD25int highCD127low圈门简化了富集活 Tregs 细胞过程 这种方法分选的 CD25int highTregs 细胞的回收率增加了 2 4 倍 而且减少了 CD25 int效应细胞的 污染 用磁珠分选预富集 CD4 细胞可以增加人 Treg 细胞的产量 人 Tregs 占全部 CD4 细胞的小部分 一种增加 Tregs 产量的方法是用 BD IMagTM 磁珠技术预富