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_虎红平板凝集试验(RBPT):实验原理:该试验又称为板式孟加拉红平板凝集实验。由于所用的抗原是酸性(PH3.63.9)带色的抗原,该抗原与被检血清作用时能抑制血清中的IgM类抗体的凝集活性,检查出的抗体是IgG类,因此提高了该项反应的特异性。器材与试剂:虎红平板凝集抗原、载玻片、移液器、枪头方法:在载玻片上加抗原30l,加入30l被检血清,混匀。在5min内观察结果,轻摇载玻片,出现凝集颗粒为阳性,否则为阴性。试管凝集试验(SAT):实验原理:布鲁氏菌侵入机体后,会刺激机体产生特异性抗体,这种抗体可与相应的布氏菌抗原发生特异性结合,在电介质作用下,就会形成肉眼可见的凝集反应,也就是用已知抗原查未知抗体。器材与试剂:布病试管凝集抗原、生理盐水、试管、移液管、移液器、小烧杯、枪头、试管架方法:1.准备试管:取9支试管放在试管架中编号。1号管为血清对照管,28号为试验管,9号为抗原对照管。 2.血清稀释:1号管加入2.3ml生理盐水,2号不加,3号9号各加入0.5ml生理盐水。1号管加入0.2ml被检血清,混匀后各吸0.5ml加入2、3号管。从3号开始做倍比稀释,8号吸0.5ml弃去。 3.加入抗原:10倍稀释抗原(用烧杯,1ml抗原9ml生理盐水),从2号开始每支加0.5ml稀释后抗原,从2号开始,血清被稀释浓度为1:25、1:50、1:100、1:200、1:400、1:800、1:1600 4.凝集试验标准比浊管的配制(判定透明程度的依据):取5支试管,编号,取稀释后的抗原再做2倍稀释。管号抗原稀释液(ml)盐水(ml)清亮度标记10.001.00100%+20.250.7575%+30.500.5050%+40.750.2525%+51.000.000%充分混匀,将所有试管放入温箱中37培养2022小时取出,在室温下放置12小时后观察结果。 5.结果判定:1号管清亮透明,9号管均匀浑浊(对比)假如试验管包括6号之前都透明,取出6号管比较,若其与2号比较管相近,则被检血清结果为1:400,+牛血清凝集价在1:100以上时,该血清样品为布病阳性,血清凝集价在1:50时,该血清样品为疑似反应,经34周后须再做一次检查,扔为疑似反应者判为阳性,凝集价在1:50以下则为阴性反应。羊和猪血清在1:25凝集为可疑,在1:50或以上凝集为阳性。总结:RBPT在使用时操作方便、快捷,适用于大规模的筛选检疫,但易出现假阳性。SAT特异性高,检测比较准确,但操作麻烦,费时费力,不适用于大规模的筛选检测,不能区分人工免疫和自然感染。先用RBPT筛选,阳性样
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