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老年痴呆动物模型 小组成员 老年痴呆症简介所谓老年痴呆症 又称阿尔茨海默 Alzheimer sdisease AD 是发生在老年期及老年前期的一种原发性退行性脑病 指的是一种持续性高级神经功能活动障碍 即在没有意识障碍的状态下 记忆 思维 分析判断 视空间辨认 情绪等方面的障碍 疾病类型 1 血管性痴呆症 这类型的痴呆症多为血管病变所导致2 脑神经细胞退化性的痴呆症 其特征性病理变化 为大脑皮层萎缩 并伴有 淀粉样蛋白 amyloid AP 沉积 神经原纤维缠结 neurofibrillarytangles NFT 大量记忆性神经元数目减少 以及老年斑 senileplaque SP 的形成 以下介绍老年痴呆小鼠模型 建模目的 建立老年痴呆 AD 小鼠模型 用于AD及其治疗药物的研究 所需材料 NIH小鼠 蛋白定量 双缩脲法 测定试剂盒 乙酰胆碱酯酶 AchE 活性测定试剂盒和超氧化物歧化酶 SOD 活性测定试剂盒 D2半乳糖 生化试剂 亚硝酸钠 分析纯 建模方法 选用NIH小鼠 腹腔注射D2半乳糖120mg和亚硝酸钠90mg 每天1次 连续60d 制备老年痴呆动物模型 通过水迷宫试验 脑组织匀浆蛋白质含量 乙酰胆碱酯酶 AchE 和超氧化物歧化酶 SOD 活性的测定 脑组织病理切片HE染色和刚果红染色 比较老年痴呆模型小鼠和正常小鼠的差异 建模步骤 1 雌性NIH小鼠40只 20 24g 每组20只 随机分为空白对照组和AD模型组 造模方法为 小鼠每日腹腔注射D2半乳糖120mg kg和亚硝酸钠90mg kg 连续60d 空白对照组腹腔注射等体积生理盐水 2 水迷宫试验 自动记录水迷宫装置为80cm 50cm 20cm的茶色有机玻璃槽 中国医科院药物所研制 内设起点 终点 台阶 和多处盲端 水深9cm 水温24 27 记录小鼠从起始点放入至找到台阶的时间 寻找潜伏期 若超过120s则以120s计 给药完毕后第1天 各组小鼠进行训练 使其找到台阶 第2 4天加长路程 记录各组小鼠的寻找潜伏期 3 脑内相关指标的测定 行为学试验结束后 每组取10只小鼠禁食12h 断头处死 取全脑 嗅脑除外 置玻璃匀浆器中 加入预冷生理盐水制成10 g ml 脑匀浆 3000r min离心10min 取上清液置冰浴中 测定蛋白含量和AchE SOD活性 按试剂盒说明书所述步骤操作 取样量均为50ml4 病理检查 各组余下小鼠腹腔注射戊巴比妥钠60mg kg麻醉 仰卧固定于手术台上 剪开胸腔 暴露心脏 用生理盐水和4 多聚甲醛进行心脏灌注固定 至四肢僵直为止 取全脑和 颊部皮肤组织置4 多聚甲醛溶液中固定24h 石蜡包埋切片 常规HE染色和刚果红染色 统计方法 数据以平均值 标准差表示 使用SPSS810统计软件处理 用t检验进行统计学分析 预防措施 1 改善劳动环境2 忌酒和戒烟3 保持精神愉快利于长寿及精神健康4 饮食调节 既要防止高脂食物引起胆固醇升
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