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丙二酸对琥珀酸的竞争性抑制 主讲人 葛静制作人 胡波 实验目的 实验原理 实验材料与仪器 实验步骤 实验结果记录 注意事项 实验讨论 实验目的 1 学习和掌握竞争性抑制作用的特点 2 观察丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用 PPT模板下载 实验原理 化学结构与酶作用的底物结构相似的物质 可与底物竞争结合酶的活性中心 使酶的活性降低甚至丧失 这种抑制作用称为竞争性抑制作用 琥珀酸脱氢酶 是机体内参与三羧酸循环的一种重要的脱氢酶 其辅基为FAD 如心肌中的琥珀酸脱氢酶在缺氧的情况下 可使琥珀酸脱氢生成延胡索酸 脱下的氢可将蓝色的甲烯蓝还原成无色的甲烯白 这样 便可以显示琥珀酸脱氢酶的作用 实验材料与仪器 器材 大白鼠 手术剪 滴管镊子 纱布 漏斗 量筒 烧杯 研钵刻度吸量管试管及试管架 恒温水箱 试剂 0 2mol L琥珀酸溶液 0 02mol L琥珀酸溶液0 2mol L丙二酸溶液0 02mol L丙二酸溶液 1 15mol LPH 7 4磷酸盐缓冲液 0 02 甲烯蓝 1 酶提取液的制备 取大白鼠的骨骼肌 用冷水洗3次 加入1 15mol L磷酸缓冲液pH在7 4 在研钵中碾碎 然后用纱布过滤 用干净的烧杯收集过滤的备用 实验步骤 2020 3 16 8 可编辑 2 取试管6支 编号 在按图步骤操作 试管6 酶提取液在100 水浴中保温 3 各管溶液立即混均匀 沿试管壁加入液体石蜡 约0 5cm 各管置于37 的水浴中保温 切勿摇动试管 随时观察比较各试管颜色的变化 记录褪色时间 实验结果记录 注意事项 1 酶提取液的制备应操作迅速 以防止酶活性降低 2 加入液体石蜡的作用是隔绝空气 以避免空气中的氧气对实验造成影响 因此加石蜡时试管壁要倾斜 注意不要产生气泡 3 37 水浴保温过程中 不能摇动试管 避免空气中的氧气接触反应溶液 使得还原型的甲烯白重新氧化成蓝色 4 37 水浴保温过程中 要注意随时观察各试管的褪色情况 5 实验结果结束后 一定要洗干净试管内的液体石蜡 实验讨论 1 酶提取液中有琥珀酸脱氢酶活性 表1所示 在试管1中没有抑制剂 但琥珀酸依然能脱氢 使得甲烯蓝反应得甲烯白 2 各管的褪色有明显的时间差别 褪色时间随 I S 逐渐增大 而增大 3 丙二酸对琥珀酸脱氢酶抑制作用的类型是竞争性抑制 其特点 最大反应速率Vmax不变 米氏常数Km增大 竞争性抑制可以通过增大底物浓度来减轻抑制程度 4 本实验中5号 6号试管的作用是做对照 5号试管和1号试管做对照 说明酶提取液中有琥珀酸脱氢酶的存在 6号
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