实验五 激素对血糖浓度的影响.ppt

实验五激素对血糖浓度的影响 一 实验目的 1 掌握GOD POD法测定血糖的原理及方法 2 观察胰岛素 肾上腺素对血糖浓度的影响 3 了解家兔耳缘静脉取血的方法 二 实验原理 1 血糖是指血液中的葡萄糖 人体生理血糖水平维持在3 89 6 11mol l 2 血糖的来源与去路 3 血糖的激素调节 降低血糖 胰岛素升高血糖 肾上腺素 胰高血糖素 糖皮质激素和生长素等 胰岛素是唯一降低血糖的激素 胰岛素促进肝脏和肌肉将葡萄糖氧化合成糖原 又加强糖的氧化作用 故可以降低血糖 升高血糖的激素以肾上腺素作用迅速而明显 肾上腺素通过促进肝糖原分解而升高血糖 4 血糖测定的意义 临床 血糖检测是目前诊断糖代谢异常相关疾病的主要依据 科研 在代谢疾病的研究中 常测定血糖 在某些药物的研究中 也涉及血糖的测定 5 血糖测定的常用方法 1 葡萄糖 O2 H2O 2 4 氨基安替吡啉 苯酚 H2O2 葡萄糖酸 H2O2 葡萄糖氧化酶 GOD H2O 红色醌类化合物 过氧化物酶 POD 505nm 光吸收法测定 相对血糖浓度 6 GOD POD法原理 7 朗伯 比尔定律 当一束平行的单色光通过均匀 无散射的溶液时 在光强度 温度等条件不变的情况下 溶液吸光度与溶液的浓度及液层厚度的乘积成正比 标准管法测定未知样品含量 A标 KC标LA测 KC测L 722G型分光光度计的使用 1 接通电源 打开开关 调整波长 2 比色杯中加入空白及待测样品 并放入分光光度计中 注意 加入样品量不超过比色杯体积的3 4 3 调模式为 T 透射比 对空白对照进行调 0 开盖 和调 100 闭盖 4 调模式为 A 吸光度 测定待测样品的吸光度值 三 主要仪器与试剂 试剂 胰岛素 肾上腺素酒精 草酸钠 蛋白沉淀剂酶酚混合试剂 苯甲酸溶液葡萄糖标准贮存液 100mmol L 葡萄糖标准应用液 5mmol L 四 实验操作 1 准备 正常家兔两只 实验前预先饥饿16h 称体重 并记录 kg 兔子抓取方法 一手抓取颈背部皮肤 另一只手托臀部 2 制备抗凝管 在洁净 干燥的试管中放入一小勺抗凝剂 草酸钠 3 注射前取血 一般以耳缘静脉取血 拔毛 用乙醇擦洗 使血管充血 弹动几下 在耳缘静脉外侧远心端用三棱针扎破放血 将血液滴入抗凝管中 约取1 2ml 边收集边混匀 以防血液凝固 取血后用干棉球压迫血管止血 4 注射激素 取血后 一只注射胰岛素 0 75U kg 60min 另一只注射肾上腺素 0 5mg kg 30min 注射方法 皮下注射 肚皮朝上 掂起皮肤 刺入皮下有落空感 回抽无血 缓慢注入激素 5 制去蛋白血滤液 这是注射前的血液 制备方法 蛋白沉淀剂4ml 全血0 2ml 混匀 室温放置7分钟后 在漏斗上过滤 取滤液 标记为注射前的去蛋白血滤液 6 注射后取血并制备血滤液 方法同前 选择另一只耳朵 注意做好标记 注射胰岛素的家兔 取血后立即腹腔或皮下注射25 葡萄糖注射液10ml 以免家兔发生胰岛素性休克 7 GOD POD法测血糖 按下表操作 混匀 置37 水浴15min 调节波长505nm 以空白管调零 分别读取A测 A标 读取6个A值并记录 A肾前 A肾后 A标A胰前 A胰后 A标 五 结果与分析 按下式分别计算注射胰岛素或肾上腺素前 后血糖浓度 A测C测 C标 5mmol L A标5mmol L为葡萄糖标准应用液的浓度值 通过计算比较一下家兔注射前后血糖浓度的变化情况 正常人空腹血糖值 3 89 6 11mmol L 六 注意事项 1 采血时用耳缘静脉取血 注意安全 防止动物抓伤 采集时要边采集边混匀