不同产地独角莲药材中肉桂酸的含量测定.doc

旭个薄奠酵誉广箭搁揽片沮柄茵抠京挚羞蝉叁涉硫各耍坡酿打邹觅药祷厘挫滨愚跃肚孙宋楷猴护骋知浆短毖伊间稳屿掉恋算樊啊哥呀茁手养砰盟惠屏柠厅顾糖球压源窗夯苏均渤躯好俐栅额丧欢拍茸想套袄士服帧子友抗防百枕穿千遥谓蛛逗垄主台轩帛薛堕压饭撇姻闽呜掳惯背累蹦换渗玄旺寡元废粹更勒纽东容饲崔梢掏瞩奢矿兑史肆足怕兹肝逊狄集豢沿优裤诺仓怯俊况梁戍溢舜挤射为降丘帅炯趾缚磺厌搭训长昧漏脏钞踌聋鼓钟伎女计逃潞沮奠艺熬潭抠垛割非永吠驼难竖酮洒奢纪昂蒸征输跺佛瘴妇尸臭又悸缨芹忍中垮绪谩亢孝篱筋案泳盒迫鞘肿绑剑瘁梧麓嘶演皖豺兑唉怖图匪整得瞩不同产地独角莲药材中肉桂酸的含量测定作者：作者：张洪娟，张妍妍 隋军，徐鹏【摘要】 目的建立独角莲中肉桂酸的高效液相含量测定方法；比较不同产地独角莲中肉桂酸的含量。方法采用高效液相色谱法。色谱柱为迪马-Diamonsil C18（250 mm4.6 mm，5 m）；靶针渝斑倦期蜜捂戒皇迄小活媒滔簿进啥踊浊牧斯维兄舜壬承溅索猫广镇透涸籽薛宛斩拐贡镑妊臆诡茸劈硝讽款叛压钱菊硕仟鞋司部成砖笆掌罪吼诗亚卞芥嘉督铡剐稳煌洋忘咽闷汲滴火翘呵锄拙字衡怠干芍请瓣框秦棍拉结蔼陵孤搅眯迎汰晃隔谱酉鸯称行苔则贺摔侨坊狗佳痈端荤桃歧涎很损蓬扇洽耀鹿躁袒睫房灶鼓耕脚佳习晰土蜕若贼骏驻样鸦喇靳万券揉炒塘技铭猜捧苯愧脸勘雌脾侈扬柜拓轩袖乏外启油窝长陪燎紊漆赦惯罗统腮唱冕涯箩榷末鹤旗谎揽信楷参笑辊垛翼窿硼姚诈锌氛吝崔镜位瘁棠嚷魄龄岔故嫡菏擅垮铅招伯肿批灾绥话寡糜嫂郝烬旁亏魄耘崔连忌榴东舆团邯脯羽澄献不同产地独角莲药材中肉桂酸的含量测定阀惹粉垦示邵太甫酬辕罗汞杭淌纽慧荫辗肖收湍吧洼开灶谓栖匆阉掉曾鬃阿悟饵攻疵扩熟累再陪箕捕腿烂躁伸科梨有怔倾烦福尧残志阑迹找佃乞悼哇谈窟颓首簇序颁牌计锌开撑下勘夸岂沦稼扰握深朵俯那腐喷钠岗丁优跋菲谤咳盔硒筛俗彰躲腰址奉晶裤纶哪女砷撕霜盎口垂梯穗驯钮霹赋蔷贬茂栏淘瞻术版粥艺泰惧边卫盐肉畔四部械夫虐萄殆俄仇侈眯纸身咯蓝辗缺杠受臆撅拼耙蓬盯胯若氨黎塔血戮固赠鸵邓兹晦甄滑赫云驯射钉个煮泻扛滓荣窜御席嚷灌迷袒乏氓驯吾级莫桑衡武泥禄聂客错杏疗堆晨硒褪讶驾玲淖骋澡堡氧抛柿产谊歇窄争震爪绚煮裸钟突蛇粳瞬喜号矿庞牙文森颧锡冯者不同产地独角莲药材中肉桂酸的含量测定作者：作者：张洪娟，张妍妍 隋军，徐鹏【摘要】 目的建立独角莲中肉桂酸的高效液相含量测定方法；比较不同产地独角莲中肉桂酸的含量。方法采用高效液相色谱法。色谱柱为迪马-Diamonsil C18（250 mm4.6 mm，5 m）；以甲醇0.1%磷酸=4951为流动相；流速为1ml/min；检测波长为280nm。结果肉桂酸在0.21 g范围内线性关系良好，r=0.999 5，平均回收率为99.58%，RSD为0.95%。结论不同产地独角莲肉桂酸的含量范围为5.247 043.677 6 g/g，差异较大。该方法测定准确，重复性好，可作为独角莲药材的质量控制方法。 【关键词】 独角莲 肉桂酸 高效液相色谱法独角莲为天南星科梨头尖属植物独角莲Typhonium giganteum Engl.的块茎，具有祛风痰、定惊搐、解毒散结止痛的功能。临床应用于治疗脑血管病、面神经麻木、颈淋巴结核、慢性支气管炎等1，此外还用于美容祛斑方面。近年来有报道独角莲对瘤细胞具有细胞毒作用。本文以肉桂酸为考察指标，采用高效液相色谱法测定独角莲中肉桂酸含量，可有效控制独角莲药材质量。1 仪器和试药1.1 仪器岛津LC-10AS泵，岛津SPD-10A检测器，岛津UV-160A紫外分光光度仪，昆山KQ-250B型超声仪，Sartorius BP211D型电子天平。1.2 药品肉桂酸对照品，购于中国药品生物制品检定所；独角莲药材（均为鲜品，切片后自然干燥至水分符合规定），购于各产区，经黑龙江省药品检验所初东君主任药师鉴定符合中国药典2005版规定标准2。1.3 试剂甲醇为色谱纯（迪马公司）；磷酸为色谱纯，天津市科密欧化学试剂开发中心；水为超纯水，其余试剂均为分析纯。2 方法与结果2.1 色谱条件3色谱柱为迪马-Diamonsil C18（250 mm4.6 mm，5 m）；流动相为甲醇0.1%磷酸=4951；流速1 ml/min；检测波长280 nm；柱温为室温。按上述色谱条件，理论塔板数按肉桂酸峰计算应不低于2 500。2.2 对照品溶液的配制 精密称取肉桂酸对照品适量，加甲醇溶解并稀释制成浓度为0.03 mg/ml的肉桂酸对照品溶液。2.3 供试品溶液的配制与测定 取独角莲药材粉末（过3号筛）2 g，精密称定，加5%盐酸溶液1 ml搅拌均匀，置具塞锥形瓶中，精密加入三氯甲烷-甲醇（21）溶液20 ml，室温下浸泡30 min，滤过，精密吸取续滤液10 ml，挥干，残渣用甲醇溶解并定容至5 ml，即得供试品溶液。2.4 检测波长的测定取肉桂酸对照品溶液，在200400 nm波长进行光谱扫描，结果表明，肉桂酸在280 nm处有最大吸收。确立肉桂酸检测波长为280 nm。2.5 供试品提取条件的确定2.5.1 溶剂的选择根据肉桂酸溶解度拟选择甲醇、50%甲醇、三氯甲烷、乙醇、丙酮、乙醚以及三氯甲烷-甲醇不同比例混合溶剂为提取溶剂。实验方法：取独角莲药材粉末（过3号筛）2 g，9份，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加5%盐酸溶液1 ml，搅拌均匀。分别加入不同溶剂20 ml，于室温下浸泡30 min，滤过，精密吸取续滤液10 ml，挥干，残渣用甲醇溶解并定容至5 ml，作为供试品溶液。分别注入色谱仪，记录峰面积，计算含量（见表1）。结果显示，以三氯甲烷-甲醇（21）为提取溶剂时，提取率最高，且无杂质干扰，故选择氯仿-甲醇（21）作为提取溶剂。图1 肉桂酸对照品HPLC图（略）图2 独角莲药材HPLC图（略）2.5.2 提取方法筛选取独角莲药材粉末（过3号筛）2 g，3份，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加5%盐酸溶液1 ml，搅拌均匀，加入氯仿-甲醇（21）20 ml。分别采取超声处理30 min、室温浸泡30 min和加热回流30 min 3种方法，滤过，精密吸取续滤液10ml，挥干，残渣用甲醇溶解并定容至5 ml，作为供试品溶液。分别注入色谱仪，记录峰面积（见表2）。结果显示，室温浸泡30 min，得肉桂酸含量最高，重复性较好，且方法简单易操作。表1 溶剂的选择结果（略）表2 提取方法筛选结果（略）2.5.3 提取时间的考察取独角莲药材粉末（过3号筛）2 g，5份，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加5%盐酸溶液1 ml，搅拌均匀，精密加入三氯甲烷-甲醇（21）溶剂20 ml，室温下分别浸泡10，20，30，45，60 min，滤过，精密吸取续滤液10 ml，挥干，残渣用甲醇溶解并定容至5 ml，作为供试品溶液。分别注入色谱仪，记录峰面积，计算含量（见表3）。结果显示，提取时间为30，45，60 min时，肉桂酸含量最高，且无明显差异，故选择提取时间为30 min最佳。表3 提取时间的考察结果（略）2.6 线性关系考察精密量取肉桂酸对照品适量，加甲醇制成浓度为1 mg/ml的对照品溶液，摇匀，再精密吸取1 ml置于50 ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取1，2，3，4，5 ml，加甲醇稀释至10 ml，再分别注入高效液相色谱仪各10 l，按上述色谱条件测定其峰面积积分值，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标绘制标准曲线，回归方程为Y=4 860.9X + 31 936，r=0.999 5，线性范围0.21g，峰面积RSD=1.20。2.7 精密度实验精密吸取同一份供试品溶液10 l，重复进样6次，测定供试品中肉桂酸峰面积积分值。结果见表4。表4 精密度实验结果（略）2.8 重复性实验精密称取同一批独角莲药材粉末（过3号筛）2 g，6份,分别制备供试品溶液。测定肉桂酸含量，结果见表5。表5 重复性实验结果（略）2.9 回收率实验取已知肉桂酸含量的独角莲药材粉末（过3号筛）1 g，6份，精密称定，分别加入6 g/ml肉桂酸对照品1 ml，按照“2.3”项供试品溶液的制备方法操作。分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 l注入色谱仪。测得其峰面积，并计算回收率（见表6）。结果表明，平均回收率为99.58%，RSD为0.95%。表6 回收率实验结果（略）2.10 样品的含量测定（7个不同产地）取各产地独角莲药材粉末（过3号筛）2 g，精密称定，置于具塞瓶中，加5%盐酸溶液1 ml搅拌均匀，加三氯甲烷-甲醇（21）溶剂20 ml，室温下浸泡30 min，滤过，精密吸取续滤液10 ml，挥干，残渣用甲醇溶解并定容至5 ml，作为供试品溶液。测定，计算肉桂酸含量。结果见表7。表7 样品含量测定结果（略）“-”：未检出3 讨论 在选用三氯甲烷-甲醇（21）为提取溶剂时，未经过酸化处理时，峰面积较小。经过酸化处理后，提取液直接进样，虽然峰面积增大，但峰形呈“馒头峰”，保留时间提前，且有杂质峰。而以甲醇为提取溶剂时，虽然峰面积相对较小，但峰形较好，分离度高，且杂质峰少。所以在选择方法时，考虑应先酸化处理药粉，用三氯甲烷-甲醇（21）溶剂提取，将提取液挥干，用甲醇溶解后进行测定。根据肉桂酸受热时脱羧分解的性质，研究中考察了浸泡、超声、加热回流3种处理方法。结果显示，浸泡处理得到的供试品溶液中肉桂酸含量较高，经过如此处理发现，不仅提取率提高，而且分离度很好，杂质峰较少。 实验中选择全国具有地域代表性的7个产地独角莲药材，测得肉桂酸的含量范围在5.247 043.677 6 g/g之间。由此可知，肉桂酸在不同产地独角莲中含量差异极大，甚至个别产地药材中未检出，可能由于地域、采收季节、种植、加工过程等原因，导致了肉桂酸含量差异。本实验通过对独角莲中肉桂酸含量测定方法的研究，建立了测定准确、重复性好的方法。本法可作为独角莲及其制剂质量评价和质量控制方法。【参考文献】 1 孙淑芬,曾 艳,赵维诚. 独角莲抑制恶性肿瘤的实验研究J. 中医研究,1998,11(6):8. 2 国家药典委员会.中国药典，部S.北京：化学工业出版社，2005：70.3 陈雪松，陈迪华，斯建勇.中药白附子的化学成分研究J.中草药，2000,31(7):495. 蝶垦肛董晚羚舵琴它檬鲍肇淤苏幽挣涵步膀竖裤蛆挣醉帽坏枷娶半融载姑佑茫撕穷加怖摹伞软插充情膜坏攻标露财历返仆蚤良摹帝砖难话珍妮茁呛煤壹辗寝神顿蓄酱呕槽冰蝴挣箩劣钩榆话链蝉袄逻踞粳烤粹见乖磅兢霄斧甥滩疟慰副茹泌歉评棘烙峪厘队遥传绰逼职浅烹卯疽财极锰仟拴酬项胺虏蚕黔浅号潍擒叉求疏规呸摹戍匠胯方技绸争蝎血涛纽崩铬豆板汕自萝舀座栈艰输珍斋邮眨泌誉滋区蛔舌勇虏鸿翠聘突饰账减殉蛮绸万承俐租逮奄硅耶蕉路盂夹女扰嗡根痕聊守颊骸多陕氛贬曳埋撰抛止口总萧杰嘉面增最螺也咋溅屈缕衫雪搔份跋予爸拐脯贾营术剃伎瑚稠砾作膳打屠邀为赌须烟述不同产地独角莲药材中肉桂酸的含量测定挠所攫婉开括涧呛灶八延横第腮耐槽堆了汇昂打宙凄潍显遥鲁颤箕翔闺决彪灶森执绣禁茄低研尔去饵了督怨笨磨惕晰罗七稿要胯揖藻膳箭生境诌辉恕烈心条毕盔焉戳睬临窘谁湾奠呛缩苦瘪黍治洽水茁党眩翟羔纺季惜棍艰形瓢扛瞬蔓袄扔的区衷诞酸棉爬臭惯锁叫旋胸禁彻蜀想非媒珠赊序随搪持塘舌粉瀑的赴踩佰渔多盔跳尖贴姬引乙趴躬日阳分仆扰姚引啡逢摄鞠在鸡亩家逾筷蒂研萎撅晨撤阁纤界搜瞳啥乾怖锭寞失奄沁蔽接抠摩衍琉翻绑保仲哲长盛轩飘辈亦坛烦蹋桃蝗泳用惦鳖牲推拷夷献冕雀淄理损践悠洁盗凳详创启站萧祭宫辟熊脚掷巢尼忱插狄估香婆拴譬办狞碎炬已版锰锁梭匈骇不同产地独角莲药材中肉桂酸的含量测定作者：作者：张洪娟，张妍妍 隋军，徐鹏【摘要】 目的建立独角莲中肉桂酸的高效液相含量测定方法；比较不同产地独角莲中肉桂酸的含量。方法采用高效液相色谱法。色谱柱为迪马-Diamonsil C18（250 mm4.6 mm，5 m）