稳态荧光分析方法与应用进展.ppt

稳态荧光分析方法与应用进展 北京大学化学学院邹明健许潇李娜2009年1月9日 TheDiscoveryandDevelopmentoftheGreenFluorescentProtein GFP 绿色荧光蛋白 2008诺贝尔化学奖OsamuShimomura1960sMartinChalfie1990sRogerY Tsien s today http nobelprize org 分子荧光产生机理 JablonskiDiagram 荧光分光光度计结构示意图 荧光信号 荧光寿命荧光光谱荧光强度随光谱变化成像 荧光物质在样本中分布的空间信息 强度寿命 可获得的信息 分子结构信息 荧光发射波长 荧光寿命 大分子表面荧光物质的荧光强度随溶剂极性的变化等等分子浓度信息 荧光强度增强或猝灭分子在溶剂中的状态 荧光光谱的红移或者蓝移 静态或动态猝灭 荧光寿命的变化等等分子间的相互作用 荧光猝灭 荧光寿命 共振能量转移 新的荧光峰的产生分子的大小 分子的转动速度对偏振光的消偏等 一般稳态荧光仪的功能 2D荧光光谱 荧光强度 激发 发射 波长3D 荧光光谱 激发波长 发射波长 荧光强度同步荧光光谱 固定Dl 以一定波长差同时扫描激发和发射单色器 Dl Stokes位移 荧光强度 激发 发射 波长共振光散射 固定Dl 0nm 荧光偏振技术 平面偏振光激发样品 荧光动力学方法导数荧光方法 三维荧光分析方法应用 天然与人工处理琥珀的三维荧光光谱 亓利剑等 宝石和宝石学杂志 2005 7卷 1期 10 16 同步荧光分析方法的应用 恒波长同步荧光分析多环芳烃和生物大分子的检测小分子与蛋白相互作用的热力学研究恒能量同步荧光分析多环芳烃的检测可变角同步荧光分析天然产物检测高背景体系中微量组分的检测 生活污水的同步荧光谱 SFS 研究 lex 248nm Wat Res Vol 29 No 6 pp 1599 1602 1995 280nm 280nm 2020 3 17 11 可编辑 carotene在表面活性剂中的同步以及3D荧光光谱 unpublishedresults 大气样品中对苯二酚与间苯二酚的同步荧光测定 AnalBioanalChem 2004 378 1648 1651 Dl 15nm 共振光散射原理和应用 光散射共振光散射 LS Abs1993年Pasternack等用共振光散射技术研究了卟啉类化合物在核酸上的聚集 首次将该技术应用于分析化学 黄承志等利用光散射技术研究了生物大分子体系的散射光谱 金纳米 AuNPs 共振光散射测定糖原 AuNPsAuNPs和500ng mL 1糖原 Talanta76 1207 1211 2008 J Phys chem B accepted 共振光散射研究亚甲基蓝 MB 在核酸分子骨架上的组装 MB在DNA分子骨架上的组装 Huangetal Bull Chem Soc Jpn 72 1501 1508 1999 DNAmg mL00 40 81 2 TheRLSspectrapfMBwithDNA pH8 14 荧光偏振技术 1926年 Perrin 以平面偏振光激发荧光分子时 静止的荧光分子则发射与入射光相同偏振面的偏振光 各向异性 偏振 由于分子存在旋转翻滚运动 发射光的偏振平面与入射光会有差异 产生消偏振 消偏振vs分子运动大分子 如蛋白质 运动缓慢 发射光偏振度较高 小分子 旋转与翻滚速度快 发射光有不同程度的消偏振现象 获得分子的大小以及分子之间相互作用的信息 免疫分析激素 受体作用蛋白 多肽相互作用DNA 蛋白相互作用以及酪氨酸激酶分析等方面的研究 荧光偏振免疫分析 FPIA 荧光分析法 第三版 许金钩王尊本 科学出版社 2007 荧光分析法 稳态荧光 时间分辨荧光 2D荧光 3D荧光 同步荧光 共振光散射 脉冲时间分辨 频域时间分辨 偏振荧光 荧光成像