仪器分析实验指导书200803.doc

仪器分析课程实验指导书课程学时： 72 实验学时： 36 适用专业：制药、化工、环境工程编写日期： 2008.3 西北民族大学化工学院目 录实验一、大型仪器维护与保养的基本常识2实验二、气相色谱内标法分析白酒中的杂质4实验三、气相色谱内、外标法分析80%敌敌畏乳油的含量9实验四、亚硝化紫外分光光度法测定草甘膦含量11实验五、红外吸收光谱的测定及结构分析14实验六、液相色谱结构与操作方法16实验七、头孢拉定的液相色谱分析18实验一、大型仪器维护与保养的基本常识大型仪器泛指价值高、分析精度高，在科学研究工作具有的重要作用的分析仪器。它是科学研究工作的重要物质技术基础。因此，对于大型仪器，以及其实验室，各单位都专门制定了特殊的管理规定。对于我们的教学实验，尤其要强调的首要问题是安全，包括实验室仪器的安全和师生人身的安全；其次，每位同学必须了解一些常见仪器的维护与保养知识，以便顺利地完成实验课的学习。一、目的与要求1、掌握大型仪器实验室安全常识；2、了解大型仪器的基本维护与保养知识。二、实验室安全常识1、人身安全大型仪器实验室配备的燃气（氢气、乙炔等）属于易燃气体。因此，使用燃气时必须检漏。进入实验室后，必须牢固树立防火意识，严禁明火，杜绝吸烟等行为。实验室所用的剧毒、强腐蚀化学试剂，以及易燃、易爆、易挥发的化学试剂也是危机人身安全的重要隐患，必须在实验教师的指导下，严格按照规章程序操作，不可麻痹大意。另为，有些仪器配备放射性元素放射源，都是对人身具有严重健康威胁的物质，必须按照操作规程操作，才能避免不必要的危险。2、仪器安全大型仪器科学研究工作的重要物质技术基础，也是学校教学和学科建设的发展标志之一。因此，任何违章操作，以及有意和无意造成仪器的损坏，都将是严重的实验室工作事故，责任重大，要求同学们树立爱护和认真的态度，一切行为听从老师安排，不要随意乱动仪器设备。三、实验用仪器设备的安全注意事项（一） 气相色谱1、开机前先检查气路是否漏气。2、当用氢气作载气，以及分析有害、有毒化学物质时，必须将尾气通往室外，室内还要通风。3、做实验时不要触摸热导池检测器（TCD）和氢火焰离子化检测器（FID）的进样口和检测器，避免烫伤。也不要放置其它物品，防止着火。4、关机：当进样孔温度、柱温和检测器温度均低于50时，关闭色谱仪主机的开关，再氮气发生器的开关，最后关闭空气泵。5、微量注射器移取溶液时，必须注意液面上气泡的排除，抽液时应缓慢上提针芯，若有气泡，可将注射器针尖向上，使气泡上浮推出。不要来回空抽。注意不要将针心抽出，否则进样器会被损坏。进样时注意保护进样器的针头，以防将其弄弯或是折断。 6、使用TCD时应注意：确保热丝不被烧断。在检测器通电之前，一定要确保载气已经通过了检测器，否则，热丝就可能被烧断，致使检测器报废。同时，关机时一定要先关检测器电源，然后关载气。任何时候进行有可能切断通过TCD的载气流量的操作，都要关闭检测器电源。这是TCD操作所必须遵循的规则。载气中含有氧气时，会使热丝寿命缩短，所以，用TCD时载气必须彻底除氧。而且不要使用聚四氟乙烯作载气输送管，因为它会渗透氧气。载气种类对TCD的灵敏度影响较大。原则上讲，载气与被测物的传热系数之差越大越好，故氢气或氦气作载气时比氮气作载气时的灵敏度要高。当然，要测定氢气时就必须用氮气作载气。（二） 紫外-可见分光光度计1、避免太阳光直射，将室温保持在540之间，防尘、防振动。2、氘灯释放出的紫外线对人的皮肤和眼睛有害，因此不要直接注视氘灯，不要将皮肤直接暴露在紫外光线下。3、单色器是仪器核心，一般不宜拆开。仪器使用半年以上或搬动后，要进行波长读数校正。要经常更换单色器盒的干燥剂，以防潮。4、石英比色皿每换一种溶液或溶剂必须清洗干净，并用被测液荡洗三次。使用完毕后应立即冲洗干净，其光学窗面，必须用擦镜头纸或柔软的棉织品擦干水分，慎勿将光学窗面擦伤。为了除去有色物质的污染，可采用3mol/L盐酸和等体积酒精混合液洗涤吸收池，再用自来水、蒸馏水冲洗。测量时要防止溶液溅入样品室。盛有溶液的吸收池也不宜在样品室放置过长时间。5、光电器件应避免强光照射，或受潮积尘。检测器要保持干燥和绝缘性，必要时可将检测器暗盒拆开，用乙醚脱脂棉洗涤绝缘处，再用吹风吹干。（三） 红外吸收光谱1、由于仪器中的反射境均由KBr压制而成的，KBr易潮解，故因保持室内干燥，侍测样品中更不能含有水份。 2、注意观察主机内的干燥器是否变色，并及时更换。 3、将有腐蚀性的材料放在准备室中，在准备室中准备样品。 4、避免储如升降机、电冰箱或其他电动机引起的过度的振动。 5、避免静电的产生和强磁场的干扰。 6、不要看激光光束或是盯着反射光，以防损伤眼睛。四、预习报告和实验报告写作要求1、每次做实验前必须认真预习实验内容，书写预习报告，并在上课时带到课堂供老师检查和批阅。未写预习报告者不准进入实验室。2、预习报告书写要求：主要书写实验目的、实验原理、实验方法、注意事项，以及预习时发现的问题。书写要整齐、内容要简明扼要，不能照抄指导书，否则，按抄袭论处。3、实验报告书写要求：主要书写实验目的、实验原理、实验方法、实验用仪器、试验用试剂、实验现象、试验结果，以及结果的讨论。重点要对实验现象和试验结果，以及实验中发现的问题进行讨论，并回答书后面的思考题。实验二、 气相色谱内标法分析白酒中的杂质一、目的与要求1.熟悉气相色谱工作原理和操作方法2.掌握内标法定量公式及其应用二、实验原理气相色谱法是以气体(称载气)为流动相的柱色谱分离技术。其原理是利用被分离分析的物质(组分)在色谱柱中的气相(载气)和固定(液)相之间分配系数的差异，在两相间作反复多次(103106次)的分配，使得原来的微小差别变大，从而使各组分达到分离的目的。根据色谱图进行组分的定量时，所用定量方法主要有归一化法，内标法和外标法三种。当试样组分不能全部从色谱柱流出，或有些组分在检则器上没有信号时，就不能使用归一化法，而采用内标法或外标法定量。内标法就是把内标物和被测混合物放在一起进行分析，在同一张色谱图上出现样品和内标物的色谱峰。因此，内标物必须和样品组分分开，而且内标物要尽可能靠近被测样品的峰。用相应的校正因子校准待测组分的峰值并与内标物质的峰值进行比较，按下式求得待测组分的含量：Wi= (msAifs,i / mAs ) 100% (1)式中fs，i为组分i与内标物质相比的校正因子。m和ms分别为试样和内标物的质量。fs，i定义为：样品中各组分的定量校正因子(fi)与标准物的定量校正因子(fs)之比，即：fs，i= fi / fs = miAs / Aims (2)三、仪器与试剂仪器: CSI-200气相色谱仪（美国热电）；氢火焰离子化检测器；热导池检测器；程序升温装置，毛细管色谱柱，数据处理装置；SGK-2LB低噪音空气泵；SGN-300高纯氮发生器；SGH-300高纯氢发生器。试剂: 乙酸乙酯，正丙醇，异丁醇，正丁醇，叔丁醇，乙醇(均为分析纯)。四、实验步骤1开机：. 接通电源后，先打开SGK-2LB低噪音空气泵的电源开关，待其压力达到0.4MPa后再打开SGN-300高纯氮发生器和SGH-300高纯氢发生器的电源开关。. 待SGN-300高纯氮发生器和SGH-300高纯氢发生器的压力均达到0.4MPa后再打开FID和TCD的电源开关。打开色谱工作站：双击桌面上的快捷键，系统则提示你打开通道，其中：通道1是FID，通道2是TCD。根据实验要求选择通道，然后点击“OK”。填写完“实验信息”后，再修改“方法”，之后点击“数据采集”查看基线，再进行零点校正。进样之后，按下“采集数据”或是按下主机旁边的A（FID）或B（TCD）按键，系统便开始采集数据。2设置实验条件1：柱温：80(或者程序升温70-100 25/分)；气化温度：150；氢火焰离子化检测器温度：150；载气：氮气：50mLmin-1;氢气：50mLmin-1;空气：500mLmin-1。3标准溶液制备：在10mL容量瓶中，预先放入约3/4的4060乙醇水溶液(根据白酒度数决定)，然后分别加入4.0L乙酸乙酯、正丙醇、异丙醇、异丁醇、正丁醇和叔丁醇，并用乙醇水溶液稀释至刻度，混匀。4含内标物的样品制备:预先用白酒（二锅头）样品荡洗10mL容量瓶，移取4.0L叔丁醇至容量瓶中，再用样酒稀释至刻度，摇匀。5注入2.0L标准溶液至色谱仪中分离，记下各组分保留时间，再重复两次。6用标准物（以下分析纯的溶液：乙酸乙酯、正丙醇、异丙醇、异丁醇、正丁醇和叔丁醇）对照，确定它们在色谱图上的相应位置，标准物注入量约0.1L，并确定适合的衰减值。7注入2.0L样品溶液分离，方法同步骤5、6，并重复两次。8关机：按下操作面板上的“HEAT ON”键，停止加热。对于FID则还需将火焰熄灭！等到各项温度均降到50以下后，再将TCD和FID的电源开关关闭。之后，关闭氢气发生器和氮气发生器。按下空气泵上的“排水开关”数秒钟，将其中的水分排出，再将空气泵的电源开关关闭。最后，待各台仪器都降至室温时，将其用丝绒盖住。五、结果计算1.确定样品中测定组分的色谱峰位置。2.计算以叔丁醇为标准的平均相对校正因子。3.计算样品中测定的各组分的含量(以三次测定的平均值)。六、注意事项1开机：首先打开低噪音空气泵，待压力达到0.4MPa时方可打开氮气发生器和氢气发生器。约10分钟后等有氮气产生并通过气柱后方可打开气相色谱仪的电源开关。2经常检查气路是否漏气。3当分析有害化学物时，必须注意提供必要的通风条件。在使用热导池检测器（TCD）时这一点是特别重要的。4当使用氢火焰离子化检测器（FID）时，在检测器中有一束很小的火焰。必须注意不要触摸或是盖住检测器。5做实验时不要触摸热导池检测器（TCD）和氢火焰离子化检测器（FID）的进样口和检测器，避免烫伤。也不要放置其它物品，防止着火。6关机：当进样孔温度、柱温和检测器温度均低于50时，关闭色谱仪主机的开关，再氮气发生器的开关，最后关闭空气泵。7微量注射器移取溶液时，必须注意液面上气泡的排除，抽液时应缓慢上提针芯，若有气泡，可将注射器针尖向上，使气泡上浮推出。不要来回空抽。注意不要将针心抽出，否则进样器会被损坏。进样时注意保护进样器的针头，以防将其弄弯或是折断。 8使用TCD时应注意：确保热丝不被烧断！在检测器通电之前，一定要确保载气已经通过了检测器，否则，热丝就可能被烧断，致使检测器报废！同时，关机时一定要先关检测器电源，然后关载气。任何时候进行有可能切断通过TCD的载气流量的操作，都要关闭检测器电源。这是TCD操作所必须遵循的规则！载气中含有氧气时，会使热丝寿命缩短，所以，用TCD时载气必须彻底除氧。而且不要使用聚四氟乙烯作载气输送管，因为它会渗透氧气。载气种类对TCD的灵敏度影响较大。原则上讲，载气与被测物的传热系数之差越大越好，故氢气或氦气作载气时比氮气作载气时的灵敏度要高。当然，要测定氢气时就必须用氮气作载气。9使用FID时应注意：FID虽然是准通用型检测器，但有些物质在此检测器上的响应值很小或无响应。这些物质包括永久气体、卤代硅烷、H2O、NH3、CO、CO2、CS2、CCl4等等。所以，检测这些物质时不应使用FID。FID是用氢气和空气中燃烧所产生的火焰使被测物质离子化的，故应注意安全问题。在未接上色谱柱时，不要打开氢气阀门，以免氢气进入柱箱。测定流量时，一定不能让氢气和空气混合，即测氢气时，要关闭空气，反之亦然。无论什么原因导致火焰熄灭时，应尽快关闭氢气阀门，直到排除了故障，重新点火时，再打开氢气阀门。FID的灵敏度与氢气、空气和氮气的比例有直接关系，因此要注意优化。一般三者的比例应接近或等于1：10：1，如氢气3040ml/min，空气300400ml/min，氮气3040ml/min。为防止检测器被子污染，检测器温度设置不应低于色谱柱实际工作的最高温度。一旦检测器被污染，轻则灵敏度明显下降或噪声增大，重则点不着火。消除污染的办法是清洗，主要是清洗喷嘴表面和气路管道。具体方法是拆下喷嘴，依次用不同极性的溶剂（如丙酮、氯仿和乙醇）浸泡，并在超声波水浴中起声10min以上。还可用细不锈钢丝穿过喷嘴中间的孔，或用酒精灯烧掉喷嘴内的油状物，以达到彻底清洗的目的。有时使用时间长了，喷嘴表面会积炭（一层黑色沉积物），这也会影响灵敏度。可用细砂纸轻轻打磨表面而除去。清洗之后将喷嘴烘干，再装在检测器上进行测定。10色谱峰过大过小，应利用“衰减”键调整。11若气源为钢瓶提供则应注意气瓶温度不要超过40，在2米以内不得有明火。使用完毕，立即关闭氢气钢瓶的气阀。注：1设置实验条件：A、TCD的设置：1. 进样孔（INJECTOR）相关参数的设置：按下操作面板上橙色按钮，待显示屏右上角有“”在闪烁，按下“INJECTOR”键，根据需要修改参数。设置温度：在“Injector Set-up Set Temperature”中输入实验所需温度T（80）。设置进样方式：在“Injector Set-up Set Mode”中选择分流进样（split）或不分流进样（splitless）。设置压力：在“Injector Set-up Edit Gas Method”中输入实验所需压力P（0P50psi）。若需设置n个程序段的压力时，如下操作：Gas Initial Time 060.0 mins x minsGas Ramp 1 09.9 y psi/mUpper Pressurp 1 050.0 z psiUpper Time 1 060.0 mins mins Gas Ramp n+1 09.9 0 psi/m2. 柱子（COLUMN）相关参数的设置：待“”在显示屏右上角闪烁后，按下“COLUMN”键，根据需要修改参数。在“Column Set-up Edit Method”中设置温度：a.恒温：在“Col Initial Temp”中输入实验所需温度T(20T200）；在“Col Initial Time”中输入恒温所需要的时间t（0t60.0mins）。b.程序升温，依次按提示设置初始温度、第一阶段温度、第n阶段温度（n5），若只需要设置n个程序段时，如下操作：Col Initial Temp 20 200.0 T Col Initial Time 0 60.0 x mins Col Ramp 1 0 40.0 y /m Col Upper Temp 1 T 300.0 z Col Upper Time 1 0 60.0 mins Col Ramp n+1 0 40.0 0 /m 3. 检测器（DETECTOR）相关参数的设置：待“” 在显示屏右上角闪烁后，按下“DETECTOR”键，根据需要修改参数。设置检测器温度：选择“Detector Set-up Set Temperature”,输入实验所需温度T（100T320）。选择灯丝类型：选择“Detector Set-up Filament Temp”，“Temp 1”=160； “Temp 2”=240；“Temp 3”=320。打开灯丝：选择“Detector Set-up Filament”,利用方向键（操作面板上的两个蓝色按纽）选择“on”。调整灵敏度：选择“Detector Set-up Range”，当R=1时，灵敏度最小；R=10时，灵敏度最大。调整基线： a.粗调：选择“Set TCD Back-off Coarse B/O=127”；b.细调: “Set TCD Back-off Fine B/O=127”利用方向键调整该值的大小。调整极性：选择“Set TCD Polarity”，+ve为极性；-ve为非极性。B、FID的设置：1. 进样孔（INJECTOR）相关参数的设置：(同TCD)2. 柱子（COLUMN）相关参数的设置：（同TCD）3. 检测器（DETECTOR）相关参数的设置：待“” 在显示屏右上角闪烁后，按下“DETECTOR”键，根据需要修改参数。设置检测器温度：选择“Detector Set-up Set Temperature”,输入实验所需温度T（100T320）。调整灵敏度：选择“Detector Set-up Range”，当R=2时，灵敏度最大；R=10时，灵敏度次之；R=100时，灵敏度再次之；R=1000时，灵敏度最小。调整基线：a.粗调：选择“Set TCD Back-off Coarse B/O=127”；b.细调: “Set TCD Back-off Fine B/O=127”利用方向键调整该值的大小。（以上的每步参数设置完成之后都需按“ENTER”键以确定。若输入错误则可按“CLEAR”键将其清除。）当参数设置完成之后，按下操作面板上的“HEAT ON”键对进样孔、柱子以及检测器进行升温；若采用了程序升温则按下“RUN”键。对于FID则需将氢气点燃。七、思考题1. 本实验中选叔丁醇作内标，它应符合哪些条件。2. 配制标准溶液时，把叔丁醇的浓度定为0.04是任意的吗?将其它各组分的浓度也定为0.04，其目的是什么?3. 要使白酒的分离进一步得到改进，可采取哪些方法?八、参考书目1. 汪昆体，罗传秋，周啸.聚合物近代仪器分析(第1版).北京：清华大学出版社，1991.2. 傅若农，顾峻岭.近代色谱分析(第1版).北京：国防工业出版社，1998.3. 刘虎威.气相色谱方法及应用.北京:化学工为出版社,2000.4. 朱良漪,孙亦梁,陈耕燕.北京:化学工为出版社,1997.实验三、气相色谱内、外标法分析80%敌敌畏乳油的含量（FID和TCD两个实验）一、目的与要求1.熟悉气相色谱工作原理和操作方法2.掌握内、外标法定量公式及其应用二、实验原理气相色谱法是以气体(称载气)为流动相的柱色谱分离技术。其原理是利用被分离分析的物质(组分)在色谱柱中的气相(载气)和固定(液)相之间分配系数的差异，在两相间作反复多次(103106次)的分配，使得原来的微小差别变大，从而使各组分达到分离的目的。外标法是在同一分析条件下，依据标准物质和被测物质的响应信号（峰面积或峰高）值确定被测物质含量的色谱分析方法。按下式求得待测组分的含量：mi= （msAi / As ） 100% (1)式中mi、ms分别为试样和标准物的质量；Ai 、As 分别为试样和标准物的峰面积。 内标法就是把内标物和被测混合物放在一起进行分析，在同一张色谱图上出现样品和内标物的色谱峰。内标物不仅必须和样品组分分开，而且内标物要尽可能靠近被测样品的峰。用相应的校正因子校准待测组分的峰值并与内标物质的峰值进行比较，按下式求得待测组分的含量： Wi= (msAifs,i / mAs ) 100% (2)式中fs，i为组分i与内标物质相比的校正因子。m和ms分别为试样和内标物的质量。fs，i定义为：样品中各组分的定量校正因子(fi)与标准物的定量校正因子(fs)之比，即fs，i= fi / fs = miAs / Aims (3)三、仪器与试剂仪器: CSI-200气相色谱仪（美国热电），带热导池检测器、氢火焰离子化检测器、程序升温装置、毛细管色谱柱、数据处理装置。试剂: DDVP标准品（要求含量99%以上）；丙酮(均为分析纯)，甲苯；内标物：联苯。试样：80%DDVP乳油。四、实验步骤（一）外标法1开机：柱温：180；气化温度：200；检测器温度：200；载气：氮气：50mLmin-1;氢气：50mLmin-1;空气：500mLmin-1。2标准溶液制备：准确称取0.1（0.0001）g DDVP标准品于5mL容量瓶中，然后加入丙酮稀释至刻度，混匀。3.样品的制备:准确称取0.12（0.0001）DDVP样品于容量瓶中，再用丙酮稀释至刻度，摇匀。4.定性分析：分别注入0.5L标准溶液和样品溶液于色谱仪中分离，记下各组分保留时间，并重复两次。依据保留时间确定DDVP的保留时间以定性。5.定量分析：按照以下顺序：标样-样品-样品-标样，分别注入0.5L标样和样品溶液分离，然后用两针标样的平均值作为标准值，以两针样品的均值作为样品的值按（1）是计算。（二）内标法1开机：柱温：174；气化温度：200；检测器温度：200；载气：氢气：50mLmin-1。2标准溶液制备：准确称取联苯0.16-0.19（0.0001）g 和DDVP标准品0.21-0.22（0.0001）g于5mL容量瓶中，然后加入1毫升甲苯，摇动混匀。3.样品的制备:准确称取联苯0.16-0.19（0.0001）g 和含DDVP 0.21-0.22（0.0001）g样品于5mL容量瓶中，然后加入1毫升甲苯，摇动混匀。4.定性分析：分别注入4L内标溶液和敌敌畏标品溶液于色谱仪中分离，记下各组分保留时间，并重复两次。依据保留时间确定DDVP和内标的保留时间以定性。5.定量分析：按照以下顺序：标样-样品-样品-标样，分别注入4L标样和样品溶液分离，然后用两针标样的平均值作为标准值，以两针样品的均值作为样品的值按（2）和（3）是计算。五、结果计算1.确定样品中测定组分的色谱峰位置2.计算样品中测定的成分的含量(以三次测定的平均值)六、注意事项1.必须先通入载气，再开电源，实验结束时应先关掉电源，再关载气。2.色谱峰过大过小，应利用“衰减”键调整。3.微量注射器移取溶液时，必须注意液面上气泡的排除，抽液时应缓慢上提针芯，若有气泡，可将注射器针尖向上，使气泡上浮推出。不要来回空抽。4.注意气瓶温度不要超过40，在2米以内不得有明火。使用完毕，立即关闭氢气钢瓶的气阀。七、思考题比较内标法和外标法的优缺点?八、参考书目1. 汪昆体，罗传秋，周啸.聚合物近代仪器分析(第1版).北京：清华大学出版社，1991.2. 傅若农，顾峻岭.近代色谱分析(第1版).北京：国防工业出版社，1998.实验四、亚硝化紫外分光光度法测定草甘膦含量 （绘制标准曲线和含量测定两个实验）一、实验目的：1. 了解紫外-可见分光光度计的结构及工作原理2. 掌握SPECORD 50型紫外-可见分光光度计的使用方法。二、实验原理：利用物质在紫外、可见光区的分子吸收光谱进行被测物质定性和定量分析的方法称为紫外、可见光光度法。紫外、可见吸收光谱主要产生于价电子在电子能级间的跃迁，所以它是研究物质电子光谱的分析方法。其分析的依据是吸收光谱以不同波长的光依次通过一定浓度的被测物质，并分别测定每个波长的吸光度，以波长为横坐标，吸光度A为纵坐标，所得到的曲线，称为吸收光谱。紫外吸收光谱的特点：图形比较简单、特征性不强。当不同的分子含有相同的发色团，它们的吸收光谱的形状就大体相似，所以该法的应用有一定的局限性。但紫外光谱对含有共轭体系的分子，或分子中共轭程度来确定未知物的结构有独特的优点。所以紫外光谱是对有机物进行定性鉴定及结构分析的一种重要辅助手段。三、方法提要 试样在酸性溶液中与亚硝酸钠反应，生成亚硝基草甘膦，在243 nm波长下，测定该化合物的吸光度，从而计算出试样中草甘膦含量。四、仪器与试剂：1SPECORD 50型紫外可见分光光度计；带盖石英比色皿；2容量瓶（若干）；3. 硫酸（GB 625）:1+1溶液； 4. 溴化钾（GB 649）:250g/L溶液；5. 亚硝酸钠（GB 633）:6.9g/L溶液，现配现用；6. 草甘膦标准品：已知纯度，称量前在105干燥2h。五、实验操作步骤（一）、开机：接通电源，打开机箱后的电源开关。系统开始自检，大约在3分钟后，系统自检完成。预热约半小时后即可测样1。（二）、标准曲线的绘制：1.标样溶液的配制称取含草甘膦0.1g（精确至0.2mg）的草甘膦标准品（75.7%）于250mL容量瓶中，用蒸馏水溶解并稀释至刻度，摇匀。2. 亚硝化的反应用移液管吸取上述标样溶液0.0（空白实验）、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL分别置于5个100 mL棕色容量瓶中，各加入30mL蒸馏水，2 mL硫酸溶液，1mL溴化钾溶液，混合后用移液管加入2.0 mL亚硝酸钠溶液后，立即将瓶塞塞紧，充分摇匀，在室温下（室温不低于15）静置反应30min,用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。3. 绘制标准曲线 2以草甘膦浓度比 (p （g/mL） /（g/mL）)为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。（三）、吸收曲线的绘制：1. 溶液的配制称取含草甘膦约0.1g（精确至0.2mg）的水剂试样于250 mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。2. 绘制吸收曲线3用移液管吸取（二）中1条中的溶液5.0mL于100mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。以蒸馏水为参比，绘制出草甘膦的吸收曲线。（四）、草甘膦含量的测定：1. 亚硝化反应及吸光度的测定用移液管吸取（二）中1条中溶液5.0 mL于100 mL棕色容量瓶中，按（二）中 2条中操作步骤进行亚硝化反应，并测定其吸光度A14.2. 实验溶液（未亚硝化）吸光度测定。用移液管吸取（二）中1条中溶液5.0mL于100mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。以蒸馏水为参比，在243nm波长下，用1cm石英比色皿测定其吸光度A2。实验溶液中亚硝基草甘膦的吸光度A = A1- A2。从标准曲线上查吸光度A相对应的草甘膦浓度p(ug/mL).3. 结果计算草甘膦内随即实验中草甘膦的质量百分含量X2按下式计算：X2=p100250w100/m5106 = pw/2m 式中：p从标准曲线上查得的草甘膦浓度，g/mL； m草甘膦试样的称样量，g； W草甘膦标样的纯度，%（m/m）。六、实验要点及注意事项：1 仪器不工作时不要开灯，若工作间歇时间短，可不关灯或停机。一旦停机，则应等待灯冷却后再重新启动，并预热15min。2 吸收池在使用后应立即冲洗干净，其光学窗面必须用擦镜纸或柔软的棉织品擦干水分，慎勿将光学窗面擦伤。3 测量时要防止溶液溅入样品室。盛有溶液的吸收池也不宜在样品室放置过长时间。4 保持光源及检测系统的电压稳定。5 避免太阳光直射，将室温保持在540之间，防尘、防振动。6 紫外线对人的皮肤和眼睛有害，因此不要直接注视氘灯，不要将皮肤直接暴露在紫外光线下。 注：1 操作面板简述：1 打开电脑、主机电源。2 双击WinASPECT。3 联机：MeasurementInitialize Device。一、 扫描：1 设置参数：单击Parameters.ModeMeas. ModeScan Mode设定扫描范围Range(nm)保存/OK。2 做参比：将参比放入光路，单击Reference。3 扫描：将样品放入光路，单击Start measurement。二、 测吸光度：1 设置参数：单击Parameters。ModeMeas. ModeWavelengths设定测定波长保存。2 扣背景：单击Reference。3 测吸光度：单击Start measurement。三、 工作曲线：1 设置参数：单击Parameters。ModeMeas. ModeWavelengths设定测定波长保存。2 设定工和曲线参数及绘制工作曲线：QuantLabCalibrationGeneral设定Designation、Operator、Regression model、Calibration Unit、No. of Standards、Parameter File参数值单击右侧Standards填写标准曲线的浓度值单击StartAll-by standards开始测样单击OK。七、思考题：1.试样溶液浓度过大或过小，对测量有何影响？应如何调整？实验五、红外吸收光谱的测定及结构分析（操作、固体、液体样品测定三次实验）一、实验目的与要求：1.掌握红外光谱法进行物质结构分析的基本原理，能够利用红外光谱鉴别官能团，并根据官能团确定未知组分的主要结构；2.了解红外光谱测定固体样品的制备方法；3.学会傅立叶红外光谱仪的使用。二、原理红外吸收光谱法是通过研究物质结构与红外吸收光谱间的关系，来对物质进行分析的，红外光谱可以用吸收峰谱带的位置和峰的强度加以表征。测定未知物结构是红外光谱定性分析的一个重要用途。根据实验所测绘的红外光谱图的吸收峰位置、强度和形状。利用基团振动频率与分子结构的关系，来确定吸收带的归属，确认分子中所含的基团或键，并推断分子的结构，鉴定的步骤如下：(1)对样品做初步了解，如样品的纯度、外观、来源及元素分析结果，及物理性质(分子量、沸点、熔点)。(2)确定未知物不饱和度，以推测化合物可能的结构；(3)图谱解析首先在官能团区(40001300cm1)搜寻官能团的特征伸缩振动；再根据“指纹区”(1300600cm-1)的吸收情况，进一步确认该基团的存在以及与其它基团的结合方式。傅里叶变换红外光谱仪（Fourier transform infrared spectroscopy, FTIR）是红外光谱仪器的第三代。主要由迈克尔逊干涉仪和计算机两部分组成，原理如图所示。由红外光谱S发出的红外光经准直为平行红外光束进入干涉仪系统，经干涉仪调制后得到一束干涉光。干涉光通过样品Sa，获得含有光谱信息的干涉光到达探测器D上，由D将干涉光信号变为电信号。此外的干涉信号是一时间函数，即由干涉信号绘出的干涉图，其横坐标是动镜移动时间或动镜移动的距离（动镜以恒速移动同样与距离相关），对这种包含有光谱信息的时域干涉图，人们难以进行光谱解析。因而通过模/数转换器送入计算机，由计算机进行傅里叶变换的快速计算，即获得以波数为横坐标的红外光谱图，即为频域的光谱。并通过数/模转换器送入绘图仪而绘出光谱仪。这就是人们十分熟悉的光谱图。三、仪器与试剂Nicolet 380型傅立叶红外光谱仪；手压式压片机(包括压模等)；玛瑙研钵；样品架；盐片；可拆式液体样品池；玻璃棒。KBr(光谱纯)；对硝基苯甲酸；苯甲酸钠；苯乙酮；丙酮；无水乙醇；滑石粉。四、实验步骤1.开机：（1）先打开红外主机电源开关，再打开电脑。（2） 双击EZ OMNIC智能附件Transmission E.S.P. 确定。3样品的制备与测试：（1） 固体样品的制备与测试：制备：采用压片法：将12mg固体样品与100200mgKBr粉未混匀，在玛瑙研钵中研磨成为2m的粉未，放入压模内，用压片机压片，保压5min，制成厚约1mm，直径约5mm的透明薄片。测试：将制备好的样品片装于样品托架上，打开主机舱盖，将样品架放入光路中，盖好舱盖,点击采集采集样品（或是单击快捷键“Col Smp”采集）采集背景和样品光谱。按屏幕提示操作。待扫描结束后，取出样品架，取下薄片，按要求将模具、样品架等清理干净，妥善保管。（2） 液体样品的制备与测试：制备：液体薄膜法制备试样：将盐片从干燥器中取出，在红外灯下用少许滑石粉混入几滴无水乙醇磨光其表面。再用几滴无水乙醇清洗盐片后，置于红外灯下烘干备用。将盐片放在可固定架上，在盐片上滴一滴试样，将另一盐片平