艾滋病实验室质量管理与控制PPT课件.ppt

艾滋病实验室质量管理与控制 1 质量管理 Qualitymanagement QM 对确定和达到质量要求所需的职能和活动的管理 是制定和实施质量方针的一系列管理职能 通过质量体系来实现质量管理 实验室质量管理包括质量保证 质量控制和质量评价 2 一 质量保证 QA 质量保证是指从接收样本起 到实验室发出报告止 为确保实验室最终报告结果的正确性所进行的全过程 包括采取各种行政和技术上的措施和方法 为了提供足够的信任 表明实体能够满足质量要求 而在质量体系中实施 并根据需要进行证实的 全部有计划和有系统的活动 GB T65831994 为确保实验室所报告的最终结果的正确性所采取的所有程序控制 逆转录病毒检验实验室诊断及基本的质量控制里尔 康斯坦丁 3 质量保证 质量保证是确保实验结果质量的基本条件 其实施程度直接影响试验结果和最后报告的每个参数 质量保证取决于良好的质量控制程序 并经良好的质量评价程序加以鉴定 因此 要求所有的实验室工作人员有责任时刻注意解决影响实验结果的每个环节上可能出现的问题 4 质量保证 管理是关键 组织结构 岗位责任 硬件要规范 试剂 仪器 实验室环境 人员要合格 人员素质与培训 操作按文件 制度 操作指导 质量控制及质量记录 5 检测流程一览 病人填写检测申请单并抽取血样 样本接收区接收检测申请单及血样检查样本质量检查检测申请单样本编号 登记 检测实验室样本编排 登记样本制备 检测检查并核对检测结果填写检测结果表格检查检测结果表格检测结果留档 医护人员病人 检测结果的管理转送清单接收检测结果将检测结果放入病人的病历 转送样本及检测申请单 检测结果发送 门诊 实验室 门诊 转送到实验室 转送清单 6 行政支持 行政部门关心实验室发展 建设 人员稳定 足够经费 人员培训 新人员上岗前培训获得合格证书 接受复训 筛查实验室人员至少2年一次 确证实验室技术人员每年至少1次 检测人员应分为检验人 复核人 签发人 复核人和签发人应具备对检测过程进行分析和解决问题的能力 设施和环境条件 实验室设置 建筑 设备符合要求 HCV HBV及梅毒等血清学检测在满足实验室管理要求和保证生物安全的条件下 可以与HIV检测共享空间和设备 应避免交叉污染 实验区的准入制度 实验室良好的内务 检测方法和试剂的选择 所用试剂必须是经国家食品药品监督管理局注册批准 批批检合格 在有效期内的试剂 各实验室更换试剂批号时 应进行平行试验 所有试剂盒要严格按照要求条件保存 试剂盒拆封时要记录拆封时间 7 设备维护与校准酶标仪 温度计 高压灭菌校准移液器 ELISA加样量小 5 100 l 其准确性直接影响实验结果 利用称重法自检或者送质检院校准 水浴箱 经常检查水浴箱温度计所示的温度和水中 或温箱内 实测温度是否一致 允许有 1 的误差 洗板机 每个厂家设置洗板后的残留液有各自的规定 一般不超过2ul 定期检查管孔是否堵塞 酶标仪 经常维护其光学部分 防止滤光片霉变 定期检测校正 使其保持良好的工作性能 冰箱 必须每天检查温度 并做好记录 操作手册 标本收集和处理的要求 以及标本拒收的标准 方法的每个操作步骤 包括检验的计算和结果的解释 试剂 质控品的制备 4 标本的保存等等 8 HIV检测实验室文件和文件管理要求 1 建立标准操作程序文件 SOP 2 建立实验原始记录表 3 建立HIV抗体检测程序 4 填写检测结果表 5 建立标本的登记记录实验室收到标本后 有关参数应该及时登记在标本的登记记录中 包括受检者的姓名或代号 试管编号 性别 年龄 职业 送检单位 人群类别 检验结果 包括初筛 复检 确证 送检日期 报告日期 备注 必要时记录通信地址 9 HIV检测实验室文件和文件管理要求 6 建立HIV阳性标本的保存记录记录中填写阳性标本血清 血浆的储存量 标本储存温度 标本储存起始时间以及标本保管人姓名 所有经确认的阳性标本 包括实验室留存的标本 应送省级HIV抗体确认中心或省级卫生行政部门指定的单位保存 不得擅自处理 7 建立实验室安全措施 8 文件存档原始记录包括实验原始记录表 打印数据 膜反应条带或其照片 检测记录表 标本登记记录 标本保存记录以及仪器设备维修和校准记录等重要记录都应该妥善存档保存10年以上 推荐同时使用计算机保存各种文件和记录 内含病人姓名的所有工作记录一定要保密 10 写你所做的做你所写的 11 1 标准操作程序 SOP 艾滋病检测实验室要建立覆盖主要工作内容的SOP文件 SOP由各岗位工作人员起草 实验室主任审定 并应定期修订 修订应该在实验室主管人员的领导下进行 每年至少一次 所有工作人员要在所从事工作的SOP文件上签名表示已经阅读并掌握了有关内容 实验过程中应严格执行标准操作程序 SOP 不得擅自修改 12 SOP的应包括的内容 1 标题和编号 2 编写和修订日期 3 编写和修订人员姓名 4 方法 目的和应用范围 5 检测设备 6 试剂及有效期 7 安全防护相关步骤 8 结果的解释和报告 9 附录 包括相关的附加文件如标准表格 设备和试剂盒说明书等 13 标准操作程序 SOP 1 艾滋病实验室要建立覆盖主要工作内容的SOP文件 应至少建立以下SOP 10个 1 样品的接收 登记 处理 保存和运输 2 检测方法和步骤 3 试剂使用和保存 4 仪器的使用维护和校准 5 质量控制要求及程序 6 结果解释与报告 7 保密程序 8 实验室数据 相关文件记录与保存 9 不确定样品追踪和处理 10 实验室安全防护及实验室的清理和消毒 确证中心实验室SOP文件至少应包括 满足确证和筛查实验室SOP文件 并包括 阳性样品库管理 省级实验室网络质量保证及质量控制实施程序 省级试剂质量评价方案 实验室现场督导 检查和考核方法 供应品采购程序 14 SOP文件示例 1 目的 规范酶标仪的使用与维护 确保酶标仪的正常工作 2 范围 适用于雷勃MK3酶标仪 3 职责3 1科主任负责监督执行 3 2检测人员按照作业指导书的要求正确使用酶标仪并对其进行日常的清洁及维护工作 及时做好记录 15 SOP文件示例 4 仪器操作4 1开机 4 2酶标仪软件操作 4 3质量控制 5 维护与校准 6 相关文件MK3酶标仪使用说明书7 记录及表格MK3酶标仪使用维护记录 16 SOP文件示例 HIV样品的管理办法目的 确保HIV样品安全有序的流转 范围 适用于样品的接收 登记 处理 保存和运输 HIV抗体筛查检测方法和步骤目的 规范HIV抗体筛查检测方法和步骤 确保检测结果准确 范围 适用于HIV抗体检测 HIV筛查实验室质量控制目的 建立艾滋病实验室质量控制 保证HIV实验室检验结果的准确性 范围 HIV实验室所有样品筛查和复查的质量控制 17 SOP文件示例 HIV追踪与处理目的 规范相关样品的处理 范围 HIV抗体阴性而近期有过高危行为者的样品 不确定的样品 HIV抗体阳性的样品 HIV实验室生物安全防护目的 保护HIV检测人员的身体健康 控制传染源的交叉污染 范围 HIV实验室的生物安全防护 18 2 实验原始记录应按实验要求 设计试验操作原始记录表 标明空白对照 阳性对照 阴性对照 外部对照以及待检样品的位置 便于指导实验人员加样 要注明试剂盒厂家 测定方法 批号 效期 操作人员和复核人员姓名及检测日期 19 3 结果报告分析结果及发出检测报告前 应注意须在试剂盒及外部质控品结果满足要求的前提下 对样品进行分析 试剂盒及外部质控品不合格 样品需要重新检测 复核人对检测结果进行仔细复核并对结果提出结论 签发人对试验结论进行审核 分析 总结 签字 20 4 HIV标本的保存记录包括HIV标本的类型 贮存量 贮存温度 贮存起始时间以及标本保管人 复核人姓名 21 5 样品登记和保存收到样品后 建立唯一编码 及时登记有关信息 包括受检者姓名或代号 试管编号 性别 年龄 职业 送检单位 人群类别 检验结果 送检日期 报告日期 备注 必要时记录通信地址 等 HIV阳性样品的保存记录应包括HIV阳性样品的类型 贮存量 贮存温度 贮存起始时间以及样品保管人姓名 22 5 文件存档实验原始记录表 打印数据 免疫印迹试验的膜反应条带或其照片 检测记录表 样品登记 样品保存记录以及仪器设备维修和校准记录 人员培训记录等都应该妥善存档保存10年以上 最好同时使用计算机保存各种文件和记录 23 快速检测原始记录酶联检测原始记录试剂验收记录实验室废弃物处理记录高压灭菌器使用记录样品登记记录生物安全柜功能检查洗板机功能检查高压灭菌器功能检查仪器设备使用记录消毒剂使用记录 24 二 质量控制 QC 质量控制是指为确保实验工作正常进行而在每一步实验过程中必须采取的各种措施 是对检验结果的即时性评价 通过对质控结果的连续观察 监测实验室结果的精密性 为达到质量要求所采取的作业技术和活动 1 质量控制包括作业和活动 其目的在于监视过程 并排除质量环节中所有阶段中导致不满意的原因 以取得经济效益 2 质量控制和质量保证的某些活动是相互联系的 GB T65831994 在每一次实验过程中所必须采取的一切监测手段以确保实验工作的正常进行 逆转录病毒检验实验室诊断及基本的质量控制里尔 康斯坦丁 25 实验前质量控制 采集标本前病人的准备 正确的标本采集方法 准确及时的运送标本 实验前正确地处理和保存标本 实验中质量控制 质控品的准备 试剂盒的评价 开展Levey Jennings质控图质控 或 即刻法 质控 实验后质量控制 实验后准确填写检验结果 及时发出报告 正确地解释检验结果的临床意义 26 基本要求 标准1 试剂种类必须使用经卫生部批准或注册 经过中国药品生物制品检定所批批检定合格的国产或进口HIV抗体初筛和确认检测试剂 初筛用的HIV检测试剂必须是HIV 1 2混合型 在选用试剂时应优先选择经过临床评估质量优良的试剂盒 2 必须使用在有效期内且保存条件符合要求的诊断试剂3 必须按照SOP中规定的要求进行操作包括进行检测的实验条件如阳性对照和阴性对照的设置 试剂 标本加样量 孵育时间 反应温度 洗涤程序和次数等 4 标本质量在实验前必须检查所有待检标本的质量 如有脂血 溶血或污染的标本原则上不能使用 必须重新采集标本 若无法重新采集标本 必须在室主管批准下使用 在检测结果中应该注明该份标本的情况 5 标本使用冰冻的标本待全部融化后必须充分摇匀 27 一 抗体检测的统计学室内质量控制 在所有实验中必须包含有试剂盒内部对照质控血清和室内质控品 外部对照质控血清 1 内部对照质控血清内部对照质控血清是指每个试剂盒内厂方提供的一套阴性和阳性对照2 外部对照质控血清外部对照质控血清是各级实验室为了监控每次检测的重复性和稳定性以及检验试剂盒批间差异而设置的一套阴性和阳性对照血清 设立外部对照还可以提示标本处于临界值状态时的检验操作情况 28 1 外部对照质控血清的组成 理想的外部对照应该包括阳性对照 弱阳性对照 临界值对照和阴性对照 在每次实验时应设置一个单一浓度水平的质控品即弱阳性对照 这个弱阳性对照的值以设定在该试剂盒Cut off值的2 3倍为宜 29 2 外部对照质控血清的来源和选择 1 通过向有关机构购买获得2 通过实验室制备获得 比较经济的方法 混合试剂盒内部对照血清 等量分装 混合HIV抗体阳性或阴性人血清 3000转 分钟离心15分钟 用0 2 m生物滤膜过滤除菌后再进行56 30分钟加热灭活处理 弱阳性对照可以通过使用HIV抗体阴性的正常人血清梯度稀释HIV抗体强阳性血清并经标定后得到 弱阳性对照的OD值以2 3倍于Cut off为宜 30 ELISA反应强度曲线 OD 样品强度 31 3 外部对照质控血清的保存 1 外部对照血清或血浆的一次制备量应该足够本实验室一年使用2 外部对照血清应该均一 无菌3 外部对照血清标定后应该等量分装 每个分装的量应足够一周使用4 外部对照应该分类作好标记 使用不同颜色的标签5 外部对照血清应该存放在 70 如无条件则存放在非自动除霜的 20 冰箱6 外部对照血清一旦融解以后应该存放在2 8 一周后必须弃去 不能重新冻存 32 4 外部对照质控血清的使用 每一次实验必须使用外部对照质控血清 建立质控图 以便监控实验操作的一致性和结果的准确性 同时可以了解各批试剂盒之间的误差 批间差异 33 5 质控规则及使用 实验室在报告实验结果之前必须评价质控数据 可通过图形记录的检查或由计算机审核结果来决定 目前许多质控规则已被采用 常用的是12S和13S规则 34 质控规则 12S13S随机误差22S系统误差31S系统误差41S系统误差R4S随机误差7x系统误差7T向上或向下的趋势8x系统误差9x系统误差10 x系统误差 35 控制规则的使用 用功效函数图评价 1 单个规则 例如12S或1 S 联合控制规则 例如12S与1 S联合 12S与 S与R4S联合 Westgard多规则质控 1 S与 S与R4S与 S与 X 平均数和极差控制方法 1 S与累积和联合规则 36 质控规则的使用应检出随机误差和系统误差 即具有高的检出分析误差的能力 同时应具有较低的假失控概率 考察试验系统的可靠性应采用多标准质控方案 多规则质控方法能提高误差检出 并具有低的假失控概率 37 统计质量控制方法 Levey Jennings控制图方法Westgard多规则控制方法累计和方法平均数和极差方法趋势分析方法利用病人数据分析方法 即刻法 质控方法 Grubbs 38 质控图 X X S X S X 2S X 2S 39 二 质控图的建立及应用 1 建立质控图参数2 绘制质控图3 质控图的判断和分析4 考察试验系统的可靠性可采用多标准质控方案的要点5 绘制和分析质控图的要点6 变异系数 CV 分析7 灰区 40 1 建立质控图参数 对HIV抗体检测 ELISA 外部对照质控血清的评价采用多次测定的S OD值的均值上下各两个标准差的范围 即外部对照S OD值的95 可信限为x 2s 各个外部对照的标定即确定外部对照的均值和可信限 可用几个统计学参数如均值 x 标准差 s 以及变异系数 cv 来确定可信限 算术平均值 x 代表一组S CO值的平均值 为了统计学上有显著性意义 应该采用至少20次 天 所测得的外部对照质控血清S CO值结果计算出平均值 如果仅做少量批次的检测 也至少做5个批次的检测 每个批次中不少于4个质控物测定结果 以建立一个临时性的平均值和标准差 当达到20批次数据后 替代临时性的平均值和标准差 标准差 s 是描述样本与均数之间离散程度的一个指标 是与对照值的均值有关的预期范围 变异系数 cv 是反映各次S CO值相对于均值离散程度的一个指标 可以用来衡量检测的重复性或精密度 41 计算公式为 xx ns计算公式为 xn x 2s n 1cv计算公式为 scv x100 x 42 2 绘制质控图 质控图是把检测数据与计算出的 控制限 进行比较的图 包含一条中心横线和其上 下两条平行的控制线 并有按时间顺序点入的质控血清测定值 43 质控图的绘制步骤 1 在常规条件下 对同一批血清连续测定20次 天 或以上 获得一组S CO值 求均数 x 和标准差 s 超出2s或3s的数据不应删除 2 将均值 x 和标准差 s 分别在质控框架图中标示出来 以S CO值作纵座标 Y轴 每一次 天 试验作横座标 x轴 绘制质控图 44 3 从第21次起 将每次检测的质控血清的结果依次点入该质控框架图中 检验进入质控状态 4 建议将内部对照质控血清和外部对照质控血清的结果绘制在同一个质控图中 45 3 质控图的判定和分析 告警 外部对照的S CO值超出 2s 系统处于告警状态 应予以注意 是否可以继续检测需要进一步观察 失控 外部对照的S CO值超出 3s 称为失控 则本次实验结果不能被接受 可能是系统误差或外部对照滴度下降造成 位移 如果几个连续质控对照值 3 5次 都落在均值 中心线 的一边则称之为位移 通常表示存在大的变化 失控 引起位移的原因有使用新批号的试剂盒 使用新试剂 实验员的更换 孵育温度的改变 仪器 移液器 故障等 趋势 当几个连续质控对照值 5 7个 几乎按一个方向分布时称之为趋势 失控 通常由参数的缓慢改变引起 如试剂失效和移液器逐渐不准确等 发生漂移和趋势的最常见的原因是试剂 如酶标记物 或对照的失效 46 Westgard标准多标准质控 47 4 绘制和分析质控图的要点 1 分析数据时 超出2s或3s的数据不应删除 2 由专人负责建立质控图 每月定期召开质控分析会 讨论本月的质量控制情况 3 建议长期和稳定地使用一种质量好的试剂 更换不同厂家的试剂后 须重新绘制质控图 改用新批号试剂如外部质控品测定出现较大变化也应重新制作质控图 使用新批号或不同厂家的试剂 必须在质控图上注明使用日期 4 发现质控结果失控 应填写报告单 上交质量负责人 分析原因并决定是否发出检测报告 5 使用新批次的外部质控品时 如测定值出现较大变化 须重新绘制质控图 变异系数 cv 小于20 表示外部质控品处于稳定状态 48 即刻法 质控 即刻法 质控统计方法 在连续测3次后 即可对第3次检验结果进行质控 具体计算方法如下 1 将测定值从小到大排列 x1 x2 x3 xn x1为最小值 xn为最大值 2 计算x和s3 计算SI上限值和SI下限值SI上限 X最大值 x sSI下限 x X最小值 s 49 50 1 当SI上限和SI下限n3s值时说明该值已在3s范围之外 属 失控 数值处于 告警 和 失控 状态应舍去 需重新测定该质控血清和病人样品 舍去的只是失控的这次数值 其它测定值仍可继续使用 51 52 质控图 53 失控情况处理及原因分析 处理 如发现质控数据违背了控制规则 操作者应填写失控记录或失控报告单 上交实验室负责人 由负责人作出是否发出与失控质控品相关的那批标本检验报告的决定 原因分析 立即重测同一质控品此步主要是用以查明是否为人为误差或偶然误差 如是偶然误差 则重测的结果应在允许范围内 在控 如果重测结果仍不在允许范围 应进行下一步操作 打开一瓶新质控品 重测失控项目如果新开的质控品结果正常 那么原来的质控品可能过期或者室温放置时间太长而变质 或者被污染 如果结果不在允许范围 则进行下一步 检查仪器状态查明光源是否需要更换 比色杯是否需要清洗或更换 进行仪器维护 重测失控项目 如果结果不在允许范围 则进行下一步 检查试剂此时可更换试剂以查明原因 如不是试剂问题 进行下一步 用新的校准液重新校准仪器重测失控项目 排除校准的问题 请专家或公司工程师帮忙如果前五步都未能得到在控结果 可能是仪器出现了较大故障 应与仪器厂家联系请求他们的技术支援 54 纠正和纠正措施 实验室必须建立纠正措施的政策 以维护实验室有准确和可靠的检验结果 纠正 是指对不合格工作所进行的处置 纠正措施 包括调查确定问题的根本原因而采取的最大限度消除问题根本原因 从而防止问题再发生的措施 两者最大区别是前者不涉及消除产生不合格的根本原因而有可能导致再犯 而后者必须调查问题的根本原因从而可以防止问题的再发生 1 实验室的仪器或检测系统没有达到所规定的操作性能要求 2 质控结果超出实验室确立的控制限 此时应对不能接受的那次操作的检验结果进行评估 以决定检验报告是否受到不利影响 是否可以发出 3 如发出的检验结果有错误 实验室必须 立即通知申请者或者使用此错误报告的人员 立即对申请者或者使用此错误报告的人员发出纠正过的报告 保存原来以及纠正报告的副本至少10年 55 质量评价 ExternalQualityAssessment EQA 一 定义质量评价是一种手段 用于判定实验室测定结果的质量 通常使用有关权威机构提供的一套质控品 质量控制参比血清 从外部来评价实验室的工作 即对数个实验室的检测结果进行统计分析和评价 这种评价方式常称为室间质量评价 EQA 质量评价用于评价质量保证体系的效果 其目的在于帮助发现其质控与质保系统有无问题 各实验室可根据上一级提供的质评检验报告的结果 检查其质量控制状况 质量评价又称质量检验 常用于对实验室所产生的结果进行评估 通常包括评价小组对实验室工作的外部评价和内部评价 质量评价是对质量控制和保证计划有效性的监控 逆转录病毒检验实验室诊断及基本的质量控制里尔 康斯坦丁 56 三 质量评价 EQA 内部质量评价外部质量评价 57 内部质量评价本实验室组织的质量评价 实验室定期应组织内部质量评价 包括样品的接收 检测 保存至发出检测报告的各个环节 58 外部质量评价由实验室之外的机构或单位组织 包括质量保证和质量控制工作的评价 职能工作考核主要时评价实验室质量保证工作 能力验证或室间质量评价主要是评价实验室质量控制工作 是检验实验室对未知样品获得正确结果的能力 59 外部质量评价包括职能考核和能力验证职能考核 问卷调查和现场评价能力验证 指利用实验室间的比对确定实验室的检测能力 实施内容和程序主要包括 1 组织者2 频度3 样品来源及构成4 考核结果及判定标准5 程序 60 必要性是监督检验质量 得到质量保证的重要途径之一 作为一种有系统 有组织的外部约束和横向参比措施 不仅有助于提高各参评实验室的检测质量 增加实验室间检验结果的可比性 还通过试剂评价 方法比较和技术交流等方式 促进了实验方法的进步和检验试剂的优化 这些工作都直接或间接地提高了检验质量 61 室间质量评价体系 1 国家艾滋病参比实验室和个别省级HIV抗体确认中心接受国际相关机构的质量评价 2 国家艾滋病参比实验室对全国各省 自治区和直辖市的HIV确认中心实验室和其他HIV抗体确认实验室进行质量评价 并负责提供质量评价标本 标准以及有关文件 3 省级HIV确认中心实验室对所在省份内各级HIV抗体初筛实验室进行质量评价 62 室间质评方式 一 现场督导的方式事先不通知 临时派调查员到实验室进行实地调查 这种调查要考虑到以下几点 1 保证调查组人员的资格 素质和技术水平 2 调