急性白血病的诊断分型PPT课件.ppt

急性白血病的诊断 分型和预后 2020 3 18 1 白血病的概念 白血病是造血干 祖细胞发生恶变 2020 3 18 2 白血病的概念 分化障碍增殖失控原始和幼稚细胞增生累积凋亡受阻浸润其它器官和组织原始和幼稚细胞 白血病细胞 2020 3 18 3 白血病的概念 临床表现 正常造血受到抑制 乏力 面色苍白 发热 出血浸润 肝脾淋巴结肿大 皮肤 中枢神经系统等浸润 2020 3 18 4 急性白血病分型 FAB分型 细胞形态学及细胞化学染色AML M0 M1 M2 M3 M4 M5 M6 M7ALL L1 L2 L3WHO分型 2008年修订MICM 2020 3 18 5 MICM整合诊断 M 形态学 细胞化学 病理I 免疫学 包括免疫组化 流式细胞分析C 染色体 荧光标记探针的原位杂交 FISH M 分子生物学 白血病融合基因 基因突变 克隆性基因重排 正常基因表达水平过高 2020 3 18 6 MICM整合诊断对恶性血液病进行诊断和分型重复性更好 更客观并且能更好地帮助判断预后指导制定治疗方案及策略 监测疗效 2020 3 18 7 细胞形态及细胞化学分析的优缺点 优点 直观 镜下直接观察细胞形态 对MDS的诊断 一些少见的 大的恶性细胞的确定优于流式细胞分析恶性细胞的比例更准确 简单快速 有显微镜即可完成报告缺点 人为因素影响大难以鉴别细胞的成熟阶段 B T等系列的恶性细胞细胞较成熟时 难以鉴别良恶性不能提供太多的预后信息 形态M 2020 3 18 8 病理及免疫组织化学的优缺点 标本直接固定 不容易损失信息 恶性细胞比例更客观 对一些抽不出或少见细胞 仍可诊断 如伴骨髓纤维化 MM 淋巴瘤 转移癌 组织细胞 巨噬细胞 树突细胞 何杰金细胞等可以直接观察到组织结构 容易确定恶性细胞的组织部位诊断慢 受诊断者个人经验及知识水平影响大对一些组织结构无破坏 细胞形态改变不大的细胞 难以鉴定良恶性及成熟度有些恶性细胞在液体中 难以获取组织标本 难以判断组织结构 形态M 2020 3 18 9 FCM的工作原理 摘自FlowCytometry FirstPrinciple 流式I 2020 3 18 10 FCM检测的参数 FSC 细胞大小SSC 细胞内颗粒多少及细胞内构造的复杂性FL 3 10多种 荧光素耦联的单克隆抗体 流式I 2020 3 18 11 正常BM细胞的图形 CD45 SSC 流式I R8 幼稚细胞群 正常骨髓中此群细胞数量极低或空缺 2020 3 18 12 流式I 流式细胞术判断急性白血病 20 或者25 以上细胞表达早期标志 CD34 HLA DR TdT 或者不表达成熟标志系别标志 髓系B系T系 2020 3 18 13 白血病细胞的系列特异性标志 如有2系或以上的特异性标志 可诊断为急性混合性白血病 流式I 2020 3 18 14 AML 病例1 流式I 2020 3 18 15 ALL 病例2 流式I 2020 3 18 16 FCM的优缺点 优点 一次可检测数万至数十万个细胞上的数十种标记 可同时检测每个细胞的六个以上参数 敏感性高 分析全面更容易区分良恶性 恶性细胞的系列及成熟度可帮助确定免疫治疗的靶点并监测疗效 如CD20 CD19是监测MRD覆盖面最广的方法 快速 简便 重复性好缺点 不能确定组织结构 一些罕见的大细胞不能分析到 一些细胞粘附性高 难以抽出 因此对HL等难以确诊 判断恶性细胞的比例不如形态准确 对M6 MDS的诊断不如形态预后价值不如染色体和基因 流式I 2020 3 18 17 诊断误区举例 原始细胞增多是诊断前体恶性血液病尤其AL的重要指标 但原始细胞应根据免疫学标志 基因 染色体证实为恶性造血前体细胞一些形态上的原始细胞可以是正常造血细胞 尤其见于儿童感染后 G CSF GM CSF等刺激或化疗后或移植后 2020 3 18 18 病例3儿童B ALL 化疗3年后停药 来我院复查 骨髓涂片8 的幼稚细胞 2020 3 18 19 流式幼稚B淋巴细胞增生 未见异常表型 2020 3 18 20 病例4NK细胞白血病移植后40天 骨髓涂片8 的幼稚细胞 2020 3 18 21 流式 未见表型异常细胞 CD34阳性细胞为幼稚B淋巴细胞 2020 3 18 22 中期分裂相的染色体分析 细胞遗传学C 2020 3 18 23 AML 50 90 的患者细胞遗传学可检出异常克隆ALL 大约60 85 的患者可检出克隆性染色体畸变 细胞遗传学C 2020 3 18 24 2020 3 18 25 2020 3 18 27 2020 3 18 28 2020 3 18 29 一些染色体有诊断价值 如重现性染色体异常 如t 8 21 inv 16 t 16 16 t 15 17 q22 q12 t 5 14 q31 q32 t 3 3 t 4 11 可直接诊断急性白血病 一些染色体和 或基因有辅助诊断价值 如5q31 CEP7 7q31 CEP8 20q CEPY P53高度疑似MDS等 有 7 5q t 3 3 t 4 11 t 9 22 复杂染色体等的急性白血病预后不好 染色体的诊断价值 细胞遗传学C 2020 3 18 30 有丝分裂相少或缺如染色体质量低劣 显带不佳染色体异常复杂如果恶性细胞不分裂 其结果是假阴性由于分析的细胞少 有部分白血病患者无染色体异常 监测残留白血病不敏感 白血病染色体分析存在的问题 细胞遗传学C 2020 3 18 31 荧光原位杂交 FISH 利用已知核酸序列作为探针 以荧光素直接标记后与靶DNA进行杂交 最后在荧光显微镜下观察杂交信号 从而对标本中待测核酸进行定性 定位和定量分析 细胞遗传学C 2020 3 18 32 2020 3 18 33 BCR ABL双色双融合探针 2020 3 18 34 BCR ABL额外信号探针 2020 3 18 35 有独立的诊断及预后价值可以检测出显微镜下人眼难以分辨的染色体异常诊断时间比染色体短与染色体分析比较 对诊断人员的经验依赖程度低对不分裂的细胞也可以分析 分析的细胞数量比染色体多 更能反映正常和恶性细胞的比例 监测残留白血病比染色体敏感可以对既往的骨髓片回顾分析 进一步明确或排除诊断探针昂贵 每次只能分析1 2种异常 只能分析已知的染色体或基因异常 FISH的优缺点 细胞遗传学C 2020 3 18 36 急性白血病按照细胞遗传学亚型的预后分级 2020 3 18 37 单体核型 monosomalkaryotype MK AML MDS中的预后价值 定义 有两条以上的常染色体为单体 或一条常染色体为单体 另一条染色体是结构异常 细胞遗传学C 2020 3 18 38 日本两个移植中心进行异基因造血干细胞移植的AML和MDS共183例患者 显示MK组患者4年的OS最短为0 细胞遗传学C 2020 3 18 39 EBMT登记的在CR1进行异基因造血干细胞移植的初发AML4119例 MK 的2yrOS 61 1 63 3 MK 的2yrOS 31 7 43 细胞遗传学C 2020 3 18 40 有独立的诊断及预后价值可以检测出染色体或FISH不能检测出的异常 联合染色体和FISH 增加了对疾病预后的判断能力 诊断时间比染色体及FISH短与染色体及FISH分析比较 对检测人员的经验依赖程度低是最敏感的监测残留白血病的指标对试验设计 试验质控要求高对无基因异常的疾病难以诊断疾病是复杂的 仅有基因异常未必完全决定预后 基因检测的优缺点 分子生物学M 2020 3 18 41 31种白血病融合基因 122种变异体 筛查 分子生物学M 2020 3 18 42 白血病的诊断与分类步骤 增加的血液细胞是良性还是恶性前体与外周 成熟 恶性淋巴瘤 白血病的区别 也就是急性和慢性白血病的区别恶性细胞的系列来源预后评估 2020 3 18 43 白血病的诊断与分类步骤 增加的血液细胞是良性还是恶性细胞形态 急性白血病原始细胞明显增加 一些白血病有明显的特征 如auer s小体 APL的异常早幼粒细胞有外浆 大量的颗粒等免疫标志异常表达 跨系表达 早晚期同时表达 罕见细胞大量存在等单克隆轻链表达 克隆性TCR基因重排 DNA异常急性白血病特有的染色体和 或基因 2020 3 18 44 恶性前体与外周 成熟 淋巴细胞疾病的鉴别 前体细胞型 ALL 淋巴母细胞淋巴瘤B 除了B细胞标志外 CD45dim CD34 TdT CD10 T 除了T细胞标志外 CD45dim CD34 TdT cCD3 sCD3 CD1a外周 成熟 细胞 无以上前体细胞标记BT 2020 3 18 45 AML危险分层指标 高危险 染色体单体异常 Inv 3 t 3 3 3个的复杂染色体异常 5 5q 7 7q T 9 22 BCR ABL 17 伴其它改变的17p异常 除t 9 11 MLL AF9以外的累及11q23 MLL基因的异常 t 1 22 p13 q13 RBM15 MKL1 t 6 9 p23 q34 DEK NUP214血WBC 100 109 LFLT3 ITD基因突变同时合并以下指标至少一种 TET2 DNMT3A MLL PTD突变或 8染色体异常 3年总生存率为14 5 无FLT3 ITD突变 但有TET2 ASXL1 PHF6和 或MLL PTD突变混合型 2020 3 18 46 AML危险分层指标 低危险AML 染色体正常且无FLT3 ITD基因突变 但有NPM1 及IDH1或IDH2突变者无c KIT基因突变及 Y的t 8 21 q22 q22 AML1 RUNX1 AML1 ETO AML inv 16 p13q22 t 16 16 p13 q22 CBF MYH11AML中等危险AML 不符合以上 2020 3 18 47 摘自 PatelJP 2012 2020 3 18 48 治疗后白血病缓解 用形态学方法检测不出 其它部位也无肿瘤浸润 但用更敏感的技术仍可检测到白血病细胞 称为微小残留肿瘤 MRD 检测MRD的方法主要包括