细胞工程学作业.doc

1、悬浮细胞培养的同步化中，通过蔗糖浓度进行筛选的方法是（ ） 饥饿法 高温处理 抑制剂法 渗透压处理 分选法 低温处理 2、原生质体培养过程中，细胞分裂2-4次时，转入（ ）中，既可去除褐化坏死的细胞对分裂细胞的干扰，又适合细胞和细胞团贴附的特性。 C. .固体平板培养 饲养层培养 液体浅层-固体平板双层培养 看护培养 液体浅层培养 琼脂糖珠培养 3、原生质体融合过程中，利用两种原生质体的某些可见标志，如形态色泽上的差异等对融合产物进行鉴别，在其可辨特征消失之前，将融合的细胞从混合群体中挑选出来进行单独培养的方法是（ ） 抗性互补选择 间接选择 培养基选择 叶绿体缺失互补选择 机械选择 激素自养型互补选择 4、细胞脱分化调控机理中，细胞周期运行的动力主要来自于（ ） CKI CDK 细胞激素 磷酸化 蛋白水解酶 cyclin 5、原生质体融合过程中，杂种细胞通过流式细胞仪进行的鉴定方法是（ ） 抗光性互补选择； 叶绿体缺失互补选择 机械选择 抗性互补选择 激素自养型互补选择 营养缺陷型互补选择 6、通过酶标记底物，与病毒结合，底物显色的脱毒检测的方法是（ ） 指示植物鉴定 抗血清鉴定 电镜鉴定 核酸杂交分子鉴定 免疫吸附电镜鉴定 酶联免疫吸附鉴定 7、最容易引起体细胞变异的因素是（ ） 空气 温度 光照 培养时间 培养基 继代次数 8、原生质体纯化的方法中，利用相对分子质量较小的甘露醇作为渗透压调节剂，将收集的滤液低速离心，使原生质体沉降于管底的方法是（ ） 水解法 酶解法 沉降法 梯度离心法 预处理法 漂浮法 9、下列冰冻保护剂，属于非渗透型冰冻保护剂的是（ ） 甘油 二甲亚砜 PG 乙酰胺 聚乙二醇 乙二醇 10、下面那一个不能作为人工种子包被的人工种皮（ ） E. 马铃薯淀粉 Cab-O-Sil Tullanox 硅酮种衣 Elvax4260树脂 海藻酸钠 11、单细胞培养的方法中，利用愈伤组织进行吸取营养物质供单细胞生长的方法是（ ） 看护培养 细胞平板培养 双层培养基培养 双层滤纸植板培养 微室培养 细胞悬浮培养 12、脱毒检测的血清学方法中，在半固体的凝胶（如琼脂、明胶）中测定在其中扩散的抗原和抗体间的沉淀反应的方法是（ ） D. 试管沉淀反应 血清鉴定 间接鉴定 核酸杂交分子鉴定 免疫双扩散 酶联免疫吸附测定 13、利用空气为动力，带动培养容器的液体流动，达到与搅拌相似的混合效果，具有剪切力小、结构简单、避免污染等优点的一类反应器是（ ） 搅拌式反应器 固定化膜反应器 填充床式反应器 光照反应器 流化床式反应器 气动式反应器 14、水稻胚性与非胚性愈伤组织的蛋白质含量变化显示（ ） 醇溶性蛋白高于非胚性愈伤组织，胚性愈伤组织水溶性和盐溶性高于非胚性愈伤组织 胚性愈伤组织水溶性和盐溶性高于非胚性愈伤组织，醇溶性蛋白低于非胚性愈伤组织 醇溶性蛋白等于非胚性愈伤组织，胚性愈伤组织水溶性和盐溶性高于非胚性愈伤组织 胚性愈伤组织水溶性和盐溶性低于非胚性愈伤组织，醇溶性蛋白高于非胚性愈伤组织 胚性愈伤组织水溶性和盐溶性等于非胚性愈伤组织，醇溶性蛋白高于非胚性愈伤组织 胚性愈伤组织水溶性和盐溶性低于非胚性愈伤组织，醇溶性蛋白低于非胚性愈伤组织 15、动物细胞中，不能贴壁生长，呈悬浮状态生长的细胞有（ ） 骨髓细胞 表皮细胞 成纤维细胞 肌肉细胞 神经细胞 皮肤组织细胞 16、原生质体培养中，既有液体培养基又有固体培养基的方法是（ ） 固体平板培养 液体浅层 固体平板双层培养 琼脂糖珠培养 微滴培养 液体浅层培养 悬滴培养 17、通过细胞体积大小分级，直接将处于相同周期的细胞进行分选，然后将同一状态的细胞继代培养于同一培养体系中，从而可保持相同培养体系中的细胞具有较好的一致性的方法是（ ） 高温处理 渗透压处理 分选法 饥饿法 抑制剂法 低温处理 18、体细胞无性系变异中，有的组织经过几次继代培养之后，获得了一种没有外源生长素也能够生长的能力，即生长素自养能力，这是一种（ ） A. 外遗传变异 B. 染色体变异 代谢紊乱 激素胁迫 遗传变异 嵌合性 19、花粉培养方法中，不经花药预培养，但在培养基中添加花药提取物后，再接种花粉进行培养获得再生植株的方法是（ ） 哺育培养 预培养 饲养层培养 看护培养 平板培养 直接培养 20、子房培养是否成功，除选择适宜的基因型外，其胚囊所处的发育时期对胚状体的诱导频率起着关键性的作用。大麦子房培养试验证明，（ ）的子房培养具有较高的诱导频率。 大孢子四分体 成熟极核 成熟胚 四核胚囊 单核胚囊 八核胚囊和成熟胚囊 21、大规模细胞培养体系中，介于成批培养和连续培养之间的培养方式是（ ） F. 半连续培养 发酵罐培养 细胞培养装置培养 连续培养 生物反应器培养 成批培养 22、原生质体融合方法中，利用Na+或Ca2+进行融合的方法是（ ） 自发融合 离子诱导和电融合结合 离子诱导融合 高pH，高钙法 电融合 PEG诱导融合 23、在通常情况下不分裂，但在受到外界刺激后可重新启动分裂的一类细胞称为（ ） G0细胞 导管细胞 茎尖细胞 S期细胞 周期细胞 终端分化细胞 24、超低温保存的方法中，通过藻酸钠进行包被后保存的方法是（ ） 逐级冰冻法 玻璃化法 包埋法 慢速冷冻法 快速冷冻法 两步法 25、在花药花粉培养中，选择小孢子发育的时期最好在（ ） 三核早期 三核晚期 单核中晚期 单核早期 双核晚期 四分孢子期 多项选择题 26、在下列培养方式中，（ ）会产生单倍体植株，（ ）容易引起体细胞变异。 细胞培养 花药培养 成熟的胚培养 繁殖体培养 茎尖培养 植株的培养 27、植物组织培养中，进行材料的离体无菌操作的实验室是（）；对离体材料进行控制条件下的培养的实验室是（） 准备室 接种室 培养室 生化分析实验室 细胞学实验室 温室大棚 28、在下列选项中，生长素是（ ）；细胞分裂素是（ ）。 PEG 6-BA MS NAA TE EO 主观题29、超低温保存 参考答案：-80以下低温下，活细胞的物质代谢和生命活动几乎完全停止，而恢复到常温后，植物仍能进行正常的生命活动的离体保存方式称为超低温保存。 30、细胞工程 参考答案：细胞工程是应用细胞生物学和分子生物学方法，借助工程学的实验方法和技术，在细胞水平上研究改造生物遗传特性和生物学特性，以获得特定的细胞、细胞产品或新生物体的有关理论和技术方法的学科。 31、愈伤组织 参考答案：愈伤组织（Callus）是指外植体在受伤后于其伤口表面形成的一团薄壁细胞。 32、细胞分化 参考答案：细胞分化是指导致细胞形成不同结构、引起功能改变或潜在发育方式改变的过程。 33、人工种子 参考答案：任何一种繁殖体，无论是在涂膜胶囊中包裹的、裸露的或经过干燥的，只要能够发育成完整的植株，均可称之为人工种子。 34、细胞质杂种 参考答案：细胞融合过程中，两种来源不同的核外遗传成分（细胞质基因或细胞器）与一个特定的核基因组结合在一起形成的杂种称为细胞质杂种。 35、影响花粉雄核发育的因素有哪些？ 参考答案：影响雄核发育的因素有：（1）供体植物的基因型；（2）供体植株的生理状态；（3）花粉发育的时期；（4）预处理；（5）培养基成分；（6）活性炭；（7）花药壁因子；（8）温度和光照。 36、目前体细胞杂交技术需要解决的问题有哪些？ 参考答案：体细胞杂交技术需要解决的问题有：（1）原生质体再生程序效率极低，重复性较差，并且具有基因型的依赖性，需要更加深入地研究植物细胞的分化、脱分化和再分化等发育（2）目前获得的体细胞杂种植株仍限于少数物种；（3）由于难以控制供体和受体基因组有丝分裂和减数分裂中的重组行为，转移期望基因和性状的概率较小。（4）大多数种间体细胞杂种不育，或育性较低，或花粉活力较低。 37、体细胞杂交技术的应用在那些方面？ 参考答案：体细胞杂交技术的应用有：（1）通过体细胞杂交合成新物种；（2）通过体细胞杂交培育作物新种质和新品种；（3）通过体细胞杂交转移细胞质基因控制的性状。 38、体细胞杂交中杂种细胞的选择方法有那些？ 参考答案：体细胞杂交中杂种细胞的选择方法有：（1）互补选择法：两个具有不同生理或遗传特性的亲本，在形成杂种细胞时能产生互补作用，根据这一特性进行杂种细胞选择的方法称为互补选择法。 激素自养型互补选择；叶绿体缺失互补选择；营养缺陷型互补选择；抗性互补选择；抗光性互补选择。（2）机械选择法：利用两种原生质体的某些可见标志，如形态色泽上的差异等对融合产物进行鉴别，在其可辨特征消失之前，将融合的细胞从混合群体中挑选出来进行单独培养，这一方法称为机械选择法。利用天然颜色标记分离杂种细胞；利用荧光素标记分离杂种细胞；应用荧光激活细胞分选仪自动分离杂种细胞；应用流式细胞仪分离杂种细胞。（3）组织培养筛选法：植物细胞对培养基成分和培养条件的要求与反应不同也可作为选择杂种细胞的依据。因此，可以利用这种特性，或人为地造成杂种细胞生长和分化能力的差异进行杂种细胞的选择。研究发现，融合细胞与未融合细胞对组织培养的反应不同，主张用组织培养筛选法结合形态学观察去鉴别和筛选杂种。 39、花药和花粉培养中雄核发育有哪些途径？ 参考答案：花药和花粉培养中雄核发育的途径有：（1）营养细胞发育途径；（2）生殖细胞发育途径；（3）小孢子发育途径；（4）生殖细胞和营养细胞共同发育途径。 40、体细胞变异的特点有那些？ 参考答案：体细胞变异的特点是：（1）大多数离体培养物具有遗传稳定性的，离体培养下的变异是无性变异；（2）就单个变异体来说，离体培养中变异的性状往往是单一的，或者是少数几个性状的变异；（3）体细胞突变性状具有一定局限性；（4）嵌合性是离体培养中变异的一特点；（5）体细胞变异除了可遗传变异，还有非遗传变异，包括外遗传变异和生理适应性变异）；（6）影响体细胞遗传与变异的因素是：供体植物，培养基及培养方式，继代次数。 41、简述影响体细胞胚发生的因素 参考答案：外源激素对体细胞胚发生的调控生长素对体细胞胚发生具有重要的调控作用。尽管NAA和2，4-D在离体培养中诱导体细胞胚形成均有报道，但现有研究显示，2，4-D是应用最为广泛的生长素。首先是在较高浓度下诱导胚性细胞的形成，然后在降低2，4-D的浓度下产生早期胚胎，一般在球形胚形成后，除去生长素则有利于体细胞胚的继续发育。一般单子叶植物使用的浓度高于双子叶植物，造成这种差异的原因目前还不清楚。外源生长素并不能直接调控细胞的发育动态，而是通过一系列细胞内外的信号转导途径介导完成调控作用。细胞分裂素对体细胞胚发育的影响报道较少，但几乎所有的有关体细胞胚发生的培养基配方中，均有细胞分裂素的配合使用。不难理解，细胞分裂素在促进细胞分裂、维持细胞活跃生长中具有重要的生理功能。而要完成体细胞胚胎发育，细胞分裂是基本前提。培养基及培养条件对体细胞胚形成的影响一些研究证明，培养基中的氮源亦会显著影响离体条件下的胚胎发生。只有当培养基含有低浓度的NH4C1时，才能形成体细胞胚。如果在愈伤组织诱导阶段培养基中同时含有KNO3和NH4C1，那么，无论分化培养基中是否含有NH4C1，愈伤组织都能形成胚。在NH4+和NO3-(15：34)的培养基中，每个外植体的体细胞胚可达10个以上，而培养基只有NH4+或NO3-时，体细胞胚发生频率很低。一些体细胞胚规模生产模式的试验还发现，球形胚形成后，如果降低培养基的无机盐浓度，可以显著促进体细胞胚的进一步发育。在一些试验中还发现，体细胞胚发育后期降低蔗糖浓度，也有利于胚的继续发育和提高体细胞胚的成苗率。此外，还有一些试验表明，培养基中加入一定浓度的水解酪蛋白、活性炭等附加成分，或改善气体交换状况，亦有利于体细胞胚胎发生。不同基因型间体细胞胚形成能力的差异体细胞胚的产生在不同类型的植物间具有明显差异。在已成功获得体细胞胚的植物中，以自然条件下容易产生无融合生殖胚的植物为多，且培养条件相对较为简单，如咖啡属植物、芸香科植物等。即使是同类植物的不同基因型，在体细胞胚诱导的难易、形成时间以及单个外植体产生体细胞胚的数量上也存在明显差异。 42、一个成功的植物基因转化受体系统需要什么条件？ 参考答案：一个成功的植物基因转化受体系统需要的条件是：（1）高效稳定的再生能力；（2）较高的遗传稳定性；（3）具有稳定的外植体来源；（4）具有抗生素敏感性；（5）具有农杆菌敏感性。 43、简述真核生物细胞周期调控的分子机理 参考答案：真核生物细胞中存在有复杂的调节细胞周期的关键分子，它们通过相互制约或偶联形成复杂而精确的细胞周期调控网络。在这些关键分子中，cyclin(细胞周期蛋白)和CDK(cyclin-dependent kinase，周期蛋白依赖激酶)是两类主要的调控分子。细胞周期运行的动力主要来自CDK，其活性则主要通过cyclin调节。CDK的活性还受另外一类蛋白质的负向调节，这类蛋白质被称为CKI(cydin-dependent kinase inhibitor，周期蛋白依赖激酶抑制子) 。因此，科学家形象地把CDK比作引擎，而cyclin则是油门，CKI是刹车(吴家睿，2002)。植物细胞周期的调控主要有两类CDK(CDK-a、CDK-b)和两类细胞周期蛋白(CycB、CycD) 。在环境或激素等外界条件作用下，CycD基因首先表达生成CycD，在相关调节因子的帮助下，CycD与CDK-a结合形成CDK-a-CycD复合体使CDK-a活化，进而对Rb(G1期限制点调控分子)磷酸化，使细胞通过“限制点”进入分裂周期。当细胞进入分裂周期后，则由CDK-b与CycB以及相关的调节蛋白完成从S期到M期的调控。植物激素是离体培养中所必需的条件，因此，与植物激素相关的基因表达被认为是启动细胞脱分化的关键。在细胞脱分化和促进细胞分裂的过程中，PSK可能介导了与生长素和细胞分裂素密切相关的信号转导途径。 44、如何提高细胞悬浮培养中细胞次生产物的产量？ 参考答案：提高细胞次生产物产量的方法有：（1）选择适宜的起始材料：选择高效合成目的产物的植物种类，自然状态下能够积累次生产物部位的细胞。（2）培养基成分的影响：满足植物细胞的生物量的增长，并使细胞能合成和积累次生产物。（3）前体的应用：针对合成的关键生化过程，适当的添加前体物质，使次生产物产量增加。（4）激发子的应用：激发子促进次生产物的积累，但需适宜的种类和浓度。（5）培养技术的选择：选择有利于次生产物合成的细胞培养技术（反应器的选择和培养方式的选择） 45、离体繁殖中培养物的增殖方式有哪些?各有何特点？ 参考答案：离体繁殖中培养物增殖有4种方式：（1）芽增殖：培养方法简单，能高度保持遗传稳定性，能长期继代繁殖；（2）不定芽增殖：繁殖系数高，有较好的遗传稳定性；（3）胚状体增殖：增长率高，胚的双极性免去了生根环节，但胚状体休眠的诱导和解除还难以把握，其成苗率还不高。（4）愈伤组织增殖：成功率高，繁殖系数大，但遗传稳定性较差。 46、 植物脱毒和快速繁殖有何意义？ 参考答案：植物脱毒和快速繁殖的意义：（1）能够有效保持优良品种特性；（2）生产无病毒种苗，防止品种退化；（3）快速繁殖新品种，加速优良品种推广；（4）节约耕地，提高农产品商品产出率；（5）便于运输。 47、简述体细胞无性系变异的应用 参考答案：突变体除了可以直接为育种程序利用外，近年来，体细胞突变体还在许多基础研究中得以广泛应用。创造育种中间材料或直接筛选新品种据统计，诱导突变已被用来改良如小麦、水稻、大麦、棉花、花生和菜豆这些种子繁殖的重要作物。在全世界50多个国家中，已培育出1 000多个由直接突变获得的或由这些突变体杂交而衍生的品种。这些品种的主要特性包括品质改良、增强抗病性和抗逆性等。品质性状改良是体细胞变异应用较为普遍的一个方面。抗病性是保证作物高产稳产的重要性状。不少研究者以特殊的化学药剂和某种病原菌致毒素为选择剂，筛选出许多抗病突变体。世界上大面积的盐渍土需要耐盐的作物品种，通过高盐胁迫筛选体细胞变异系被认为是培育耐盐品种的有效途径。此外，还在大豆、油菜等重要作物中筛选出抗除草剂的细胞系，有的也已用于大田生产。随着淡水资源的越来越贫乏，抗旱农作物品种的选育已越来越重要。冻害和冷害不仅影响作物产量，也影响作物的分布，采用与抗旱突变体筛选类似的策略筛选耐寒和耐冷体细胞突变体，我国在水稻、柑橘等作物中也取得一定进展。基因克隆及其功能鉴定突变体作为基因克隆和标记筛选具有独特的优点。因为突变一旦发生，即可在表型上与供体显著不同，通过差异显示或分子杂交筛选，即可快速获得突变位点的DNA序列，经过测序与功能鉴定，就可能获得与突变性状相关的基因。即使通过分析不能获得功能基因，这些DNA序列也可作为与突变性状相关的分子标记，用于相关遗传研究。突变体用于基因克隆和功能鉴定早已成为模式植物如拟南芥等的常规方法，也已开始广泛用于其他作物中。特别是与转座子标签插入突变技术相结合，更显现出这一途径的高效性。发育生物学研究由于分子生物学研究技术和体细胞变异相结合，利用体细胞突变策略对植物发育的基因调控研究取得突破性进展。特别是利用拟南芥和金鱼草等模式植物，已分离出一大批不同发育阶段和组织类型的突变体，包括顶端分生组织、根、开花转变、花序、花分生组织、胚胎发育等的一系列突变体。通过对这些突变体的研究，不仅建立器官发育模式，而且分离鉴定出一大批与发育有关的基因，包括维持正常发育状态的基因、促进发育进程的基因，以及相关修饰基因。生化代谢途径研究突变体作为代谢活动调控研究的工具，具有十分便利和高效的优势。体细胞突变技术的不断成熟，使多细胞生物大群体突变的建立成为可能。我们可以根据需要建立某一代谢途径中每一个调节点的突变体，也可以根据需要与基因工程相结合，对一些关键调控过程进行修饰和改造，使代谢过程按照人类需要进行。因此而发展起来的新型学科领域称之为代谢工程。 48、目前人工种子生产中需要研究解决的主要技术问题有那些？ 参考答案：人工种子生产中需要研究解决的主要技术问题是：真正实现人工种子的实际应用，还取决于两个关键技术的成熟程度，即繁殖体生产技术和人工种皮材料的研制。人工胚乳及人工种皮材料的研制，仍是人工种子研究的重要课题。此外，人工种子的贮藏技术也是目前还没有完全解决的问题。相信随着研究的深入，人工种子将会在更多植物中得以应用，并促使细胞工程技术在植物生产产业中发挥更大的作用。 49、通过哪些途径可以进行原生质体的遗传饰变？ 参考答案：原生质体作为遗传物质的一种受体，不仅可以摄取DNA、染色体和质粒等核酸大分子，而且还可以通过吞噬或融合作用来摄取细胞器和细菌、病毒等微生物，从而为利用原生质体进行细胞遗传物质的饰变提供有利条件。摄取外源遗传物质的原生质体，其遗传结构和功能有可能发生相应的改变，经培养再生的植株会出现一些新的性状，从而为植物优良性状的导人和遗传改良提供基础。遗传饰变途径有：（1）细胞核移植；（2）叶绿体移植；（3）染色体的摄取；（4）外源DNA的摄取；（5）微生物移植。 50、利用茎尖分生组织培养脱除植物病毒有哪几种原理？ 参考答案：基本原理：早在1934年，White发现烟草花叶病毒(TMV)在烟草根中的分布是不均匀的，越靠根尖(root tip)区病毒含量越低，在根尖的顶端(生长点)不含病毒。推测，病毒在烟草茎中的分布也可能存在与根部组织同样的情况，茎尖分生组织(apical meristem)也应不带病毒。研究证实，根尖和茎尖分生组织并不是完全没有病毒。病毒在植物体内分布不均匀性的机理目前还不十分清楚，但根据病毒及分生组织的特性，学者们提出一些假说，主要有以下几种：能量竞争：病毒核酸和植物细胞分裂时，DNA合成均需要消耗大量的能量。分生组织细胞本身很活跃，其DNA合成是自我提供能量自我复制。而病毒核酸的合成要靠植物提供的能量来实现自我复制，这就产生细胞分裂与病毒复制对能量的竞争。病毒可能得不到足够的能量来进行核酸复制，所以导致在分生组织中没有病毒或病毒含量低。而分生组织以下的细胞分裂不活跃，主要是生长，因此病毒可以在这些细胞中获得足够的能量用于复制。传导抑制：认为病毒在植物体内的传播主要是通过维管束实现的，但在分生组织中，胞间连丝(plasmodesma)和维管组织还不健全，可能抑制病毒粒子(virus particle)向分生组织的传导。激素抑制：在分生组织中，生长素和细胞分裂素水平均很高，因而阻滞病毒的侵入，或者这种高水平的激素浓度抑制病毒活性，但这一假说还没有充分的事实证明。酶缺乏：认为病毒合成可能需要酶的参与，但在分生组织中缺乏或还没建立起病毒复制所需的酶系统，因而病毒无法在分生组织中复制。这种说法亦尚待证明。抑制因子：认为在分生组织中病毒含量低是因为分生组织自然地存在某种抑制因子，这种抑制因子也可能是有性繁殖种子通常不带病毒的原因。这种解释也还没有直接的证据。 51、体细胞杂交中杂种植株的鉴定方法有那些？ 参考答案：杂种植株的鉴定方法有：（1）形态学鉴定；（2）细胞学鉴定；（3）生化分析；（4）分子生物学方法。 52、人工种子对繁殖体有什么特殊要求？ 参考答案：人工种子对繁殖体的要求是：作为种子使用的繁殖体，首先必须要有较高程度的一致性。这种一致性除了遗传学上的一致性外，还包括生理上的一致性。因为人工种子一旦商业化，它与自然种子一样即是特殊的商品，它需要有生产出整齐一致的农产品的能力。其次需要有足够的数量，以满足农业生产的需要。因此，相对于一般离体培养技术来讲，人工种子繁殖体的培养技术需要更高的成熟度和可批量化的生产技术，在保证繁殖体数量的同时，还需维持繁殖体遗传上的稳定性和发育上的同步性。 53、植物器官发生的影响因素有那些？ 参考答案：器官发生的影响因素有：（1）起始材料对器官分化的影响：母体植株的遗传基础、外植体的类型。（2）激素对器官分化的影响：生长素与细胞分裂素在离体器官分化调控中占主要地位。（3）光照对器官分化的影响：光照时间、光质。（4）基因调控：同源框基因的调控。 54、离体繁殖中培养物的增殖方式有哪些?各有何特点？ 参考答案：离体繁殖中培养物增殖有4种方式：（1）芽增殖：培养方法简单，能高度保持遗传稳定性，能长期继代繁殖；（2）不定芽增殖：繁殖系数高，有较好的遗传稳定性；（3）胚状体增殖：增长率高，胚的双极性免去了生根环节，但胚状体休眠的诱导和解除还难以把握，其成苗率还不高。（4）愈伤组织增殖：成功率高，繁殖系数大，但遗传稳定性较差。 55、悬浮细胞的同步化方法有那些？ 参考答案：同步化的方法有4种：（1）分选法：特点是操作简单，分选细胞维持了自然生长状态，没有其他处理带来对细胞活力的影响。（2）饥饿法：特点是导致细胞分裂受阻，使细胞不能合成DNA或不能进行细胞分裂。（3）抑制剂法：特点是使细胞滞留在DNA合成前期。（4）低温处理：特点可提高细胞同步化程度。后3种或多或少会对细胞活力造成一定影响。 56、植物细胞工程的概念、研究范畴、作用与应用领域。 参考答案：答：细胞工程（Cell engineering）是应用细胞生物学和分子生物学方法，借助工程学的实验方法或技术，在细胞水平上研究改造生物遗传特性和生物学特性，以获得特定的细胞、细胞产品或新生物体的有关理论和技术的学科。根据研究对象不同，高等生物的细胞工程可分为动物细胞工程和植物细胞工程。动物细胞工程包括细胞培养技术（包括组织培养、器官培养），细胞融合技术，胚胎工程技术（核移植、胚胎分割等），克隆技术（单细胞克隆、器官克隆和个体克隆）。植物细胞工程包括植物组织、器官培养技术，细胞培养技术，原生质体融合与培养技术，亚细胞水平的操作技术等。细胞工程的作用与应用领域是：（1）在植物育种上的应用：（a）快速获得特殊倍性材料；（b）克服远缘杂交不亲和；（c）克服杂种胚早期夭折；（d）导入外源基因；（e）突变体筛选；（f）种质资源保存。（2）种苗脱病毒与快速繁殖。（3）细胞培养生产有用次生产物。（4）在细胞生物学和发育生物学研究中的应用。（5）在植物遗传、生理生化以及植物病理等基础研究中的应用。 57、影响植物基因转化频率的因素有哪些，且如何调控？ 参考答案： 58、 如果有一品质和产量不好的植物，希望通过转基因的方法转入能改良其品质和产量的基因，请根据细胞工程中农杆菌介导的方法阐述其转基因的原理、方法、步骤及可能出现的问题等。 参考答案：可以通过转基因方法（农杆菌介导的方法）转入改良品质和产量的基因，整合表达，获得具优良品质和高产的转基因植株。农杆菌介导法原理：构建带有目的基因的载体，转入农杆菌，利用农杆菌的毒性，侵染植株，使目的基因进入植株细胞内，与核基因进行遗传物质重组，并获得性状表达。方法：组织培养、农杆菌介导法（遗传转化）。实验步骤：（1）构建载体，转入筛选好的农杆菌，同时做农杆菌敏感试验；（2）遗传转化：外植体预培养，农杆菌侵染，共培养，筛选培养，分化培养，生根培养，移栽；（3）鉴定及基因功能表达的观察等。 可能出现的问题：（1）转化频率低，周期太长；（2）基因沉默，没有表达；（3）功能表达很低，需要细微的比较检测。 59、参照动物细胞研究分类类型，植物细胞可分为那几类？ 参考答案：植物细胞可分为3类：第一类是茎尖、根尖及形成层细胞。这类细胞始终保持分裂能力，从一个周期进入另一个周期，为周期细胞。第二类是筛管、导管、气孔保卫细胞等特化细胞。这类细胞是永久失去分裂能力的细胞，为终端分化细胞。第三类是表皮细胞及各种薄壁细胞。这类细胞在通常情况下不分裂，但在受到外界刺激后可重新启动分裂，称为G0细胞。 60、现有一繁殖率低，死亡率高，品质差的动物，为了提高繁殖率，改良品种，请运用细胞工程的知识设计其高品质和高产量的子代的方法和步骤，并说明使用的原理和理论知识，并论述其使用技术的应用价值和意义。 参考答案：要获得高品质和高产量的子代，需要使用动物细胞工程的方法。利用动物细胞核移植技术，即将动物的一个带有优良品质性状和高产基因的细胞的细胞核，移入目标动物的一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成为具有高品质和高产量的动物个体。也可极性动物胚胎体外培养、体外受精，筛选品质优良的胚胎，移植入动物子宫，最后生出品质佳的后代；还可使用动物细胞培养技术，即从动物机体内取出相关的组织， 将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。筛选出优良的多胚胎，进行胚胎移植到动物子宫内，生产出既能改良品种，又能高产的子代，获得很高的繁殖率。动物细胞核移植技术的应用价值和意义表现在：改良农畜品种；动物克隆技术应用潜力大；可生产医用蛋白质及为组织器官的移植提供供体。动物细胞培养技术的应用价值和意义表现在：生产蛋白生物制品：病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等；获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮；用于检测有毒物质；用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据。 61、现有小鼠及其骨髓瘤细胞、破伤风杆菌抗原，设计一个实验无限生产破伤风杆菌单克隆抗体，并说明其实验中使用的技术的应用价值及意义。 参