植物组织培养试题2016硕士.doc答案.doc

一、名词解释（30分）1、细胞全能性:在一个有机体内每一个活细胞均具有同样的或基本相同的成套的遗传物质，而且具有发育完整有机体或分化为任何细胞所必需的全部基因。2、植物组织培养: 是指通过无菌和人工控制的环境条件下，利用适当的培养基，对离体的植物器官、组织、细胞及原生质体进行培养，使其再生细胞或完整植株的技术。3、胚状体在自然界或组织培养过程中，由非合子细胞分化形成的胚状结构。4、愈伤组织培养是指将母体植株上的外植体，接种到无菌的培养基上，进行愈伤组织诱导、生长和发育的一门技术。5、器官培养包括离体的根、茎、叶、花器和果实的培养6、玻璃化现象：在长期的离体培养繁殖时，有些试管苗的嫩茎、叶片呈现半透明水渍状，这种现象称为玻璃化。7、继代培养：愈伤组织在培养基上生长一段时间以后，由于营养物质枯竭，水分散失，以及代谢产物的积累，必须转移到新鲜培养基上培养。这个过程叫做继代培养8、外植体：由活体（in vivo)植物体上切取下来的，用于组织培养的各种接种材料。包括各种器官、组织、细胞或原生质体等9、植板率：是指已形成细胞团的单细胞与接种总细胞数的百分数10、原生质体融合：也称体细胞杂交（somatic hybridization），就是使分离下来的不同亲本的原生质体，在离体条件下通过诱导发生的质膜融合进而细胞核融合，像性细胞受精作用那样互相融合成一体的现象。二、简答题（共50分）1、单细胞培养的主要方法有哪些？指出它们优缺点。单细胞培养：看护培养；微室培养；平板培养 （1） 看护培养法：指用一块活跃生长的愈伤组织块来看护单个细胞，并使其生长和增殖的方法。 优点：简便易行。效果好，易于成功。 缺点：不能在显微镜下直接观察细胞的生长过程。 （2）微室培养：即将细胞培养在很少量的培养基中。 优点： 在培养过程中，可以连续进行显微观察一个细胞的生长、分裂和形成细胞团的全部过程 缺点：培养时间较短 （3）平板培养法：把单细胞悬浮液与融化的琼脂培养基均匀混合，平铺一薄层在培养基底上的培养方法。 优点：可以定点观察；分离单细胞系容易； 缺点：培养细胞气体交换不畅。 2、茎尖培养脱毒的原理是什么？接种时应注意什么？病毒在植物体内分布不均匀，越接近顶端分生组织，病毒浓度越稀；病毒DNA分子与细胞分装蛋白质合成竞争，在迅速合成的植物细胞中正常合成的蛋白质占优势；病毒的复制赶不上细胞分裂的速度。 关键：通常茎尖培养脱毒的效果与茎尖的大小呈负相关，与成活率呈正相关。操作程序：外植体表面灭菌，在解剖镜下，经无菌操作切取小茎尖，接种到备用培养基土培养，并及时观察记录培养结果。3、简述植物组织培养大致步骤？1）准备阶段查阅相关文献，根据已成功培养的相近植物资料，结合实际制订出切实可行的培养方案。然后根据实验方案配制适当的化学消毒剂以及不同培养阶段所需的培养基，并经高压灭菌或过滤除菌后备用。2）外植体选择与消毒选择合适的部位作为外植体，采回后经过适当的预处理，然后进行消毒处理。将消毒后的外植体在无菌条件下切割成一定大小的小块，或剥离出茎尖，挑出花药，接种到初代培养基上。3）初代培养接种后的材料置于培养室或光照培养箱中培养，促使外植体中已分化的细胞脱分化形成愈伤组织，或顶芽、腋芽直接萌发形成芽。然后将愈伤组织转移到分化培养基分化成不同的器官原基或形成胚状体，最后发育形成再生植株。4）继代培养分化形成的芽、原球茎数量有限，采用适当的继代培养基经多次切割转接。当芽苗繁殖到一定数量后，再将一部分用于壮苗生根，另一部分保存或继续扩繁。进行脱毒苗培养的需提前进行病毒检测。5）生根培养刚形成的芽苗往往比较弱小，多数无根，此时可降低细胞分裂素浓度或不加，提高生长素浓度，促进小苗生根，提高其健壮度。6）炼苗移栽选择生长健壮的生根苗进行室外炼苗，待苗适应外部环境后，再移栽到疏松透气的基质中，注意保温、保湿、遮荫，防止病虫危害。当组培苗完全成活并生长一定大小后，即可移向大田用于生产。4、为什么花药培养比常规杂交育种的选择效率高？花药培养后代选择的群体是常规育种的1/51/2，而选择的效率是常规育种的332倍。育种目标涉及的基因位点比较少，多数基因位点的目的基因稳定时，花药培养育种比常规育种更有成效。花药培养育种能使各种配子类型在植株水平较充分地显现出来，避免显性基因位隐性基因的上位性作用，使隐性基因控制的性状显现出来，出现纯合目的基因的慨率也大大高于常规育种。5、简述植物原生质体纯化的方法。原生质体的纯化 降法：应用原生质体的比重大于溶液的性质而使原生质体沉于底部。 漂浮法：应用渗透剂含量较高的洗涤液使原生质体漂浮于液体表面。 梯度离心法：选两种不同渗透浓度的溶液，其中一种溶液密度大于原生质体的密度，另一种溶液小于原生质体的密度。6、什么是褐变？简述褐变的预防措施。褐变是指在组培过程中，由培养材料向培养基中释放褐色物质，致使培养基逐渐变成褐色，培养材料也随之慢慢变褐而死亡的现象7、试述细胞悬浮培养的概念及其用途。细胞悬浮培养：是使离体的植物细胞悬浮在液体培养基中进行的无菌培养。用途1）植物有用物质的生产：在植物组织培养研究中，发现培养细胞中含有各种特殊的代谢产物。 2）、诱发和筛选突变体：在细胞培养过程中会产生一些突变体，常采用不同培养基来进行选择，也就是把悬浮细胞培养于缺少某种营养物质或生长因子，或是添加某种抑制剂的培养基里，使突变细胞和正常细胞区别开来 3）、原生质体培养和细胞分离：利用细胞悬浮培养方法，对细胞原生质进行分离，在适宜的培养基上进行培养，使之生成完整植株，或对原生体的生理特性进行观察、研究。 4）、食品生产：