色谱技术基础难点.docx

1.二元泵与四元泵的区别？二元有两个泵，泵后混合，气体的溶解度随压力的增大而增大，所以二元高压混合不会产生气泡。并且其混合精度和重现性也要高于四元泵，更适合做梯度。但二元泵仅有两个流露，溶剂选择少，如果实验所需的流动相含有两种以上的溶剂时，二元泵很难实现。四元只一个泵（另外一个是辅泵），有四个流路，通过比例阀来控制各流路的通量。在泵前实现混合，在常压下进行的，两种液体混合时，会降低气体在混合溶液中的溶解度，通常会有气泡产生，所以四元低压梯度系统一定要配在线真空脱气机。2.质谱离子源有哪些？硬电离：电子轰击电离（EI）软电离：化学电离CI电喷雾电离ESI大气压化学电离APCI大气压光喷雾电离APPI快原子轰击FAB基质辅助激光解吸电离MALDI场解吸FD和场电离（FI）EI源是呈气态的试样分子在较高真空和较高温度的电离室内，热阴极发射的电子经加速后与试样分子作用，气态的分子失去一个电子而生成带有正电荷的自由基，即分子离子，当分子离子具有的剩余能量大于其某些化学键的键能时，分子离子便发生碎裂，生成碎片离子。EI源是目前发展最成熟的离子源，也有相应的谱库如NIST谱库可以查询。CI：化学电离样品分子与电离电子不直接作用，而是引入大量的反应气，反应气被电子轰击后离子-分子反应产生一些活性反应离子，这些离子再与样品分子发生离子-分子反应，使样品分子实现电离。ESI：通常认为电喷雾可以用两种机制来解释。（1）小分子离子蒸发机制：在喷针针头与施加电压的电极之间形成强电场,该电场使液体电,带电的溶液在电场的作用下向带相反电荷的电极运动,并形成带电的液滴,由于小雾滴的分散，比表面增大，在电场中迅速蒸发,结果使带电雾滴表面单位面积的场强极高，从而产生液滴的“爆裂”重复此过程，最终产生分子离子。(2)大分子带电残基机制：首先也是电场使溶液带电，结果形成带电雾滴&带电的雾滴在电场作用下运动并迅速去溶，溶液中分子所带电荷在去溶时被保留在分子上，结果形成离子化的分子。一般来讲,电喷雾方法适合使溶液中的分子带电而离子化。离子蒸发机制是主要的电喷雾过程,但对质量大的分子化合物,带电残基的机制也会起相当重要的作用。电喷雾也可测定中性分子,它是利用溶液中带电的阳离子或阴离子吸附在中性分子的极性基团上而产生分子离子。APCI：APCI与ESI的不同主要在于雾滴的形成以及后续的离子形成过程。在气流的作用下，使液体雾化，然后使用外加放电的模式，使微粒带电。适合做小分子且极性较小的化合物。APPI：APPI基本原理是化合物通过接受质子并释放电子的过程形成分析物离子。现在已经成为了继ESI和APCI后又一成功的商品化接口设计并在多个领域得到了较为广泛的应用。而双离子接口APCI/APPI和ESI/APPI则进一步拓宽了LC-MS的范围，使得LC-MS开始在组合化学和新药开发中发挥独特的作用。APPI另一诱人的特性就是其受磷酸缓冲盐和表面活性剂的干扰很小，因此为毛细管电泳质谱联用技术长期得不到较好解决的接口设计提供了良好的前景。MALDI：MALDI离子化方式的原理是使用固体基质，用脉冲激光束轰击样品和基质的共结晶，能量由基质传给样品，使样品一起汽化并离子化。常用TOF检测器检测，广泛用于多肽、蛋白质、低聚核苷酸和低聚糖。FI：场电离是气态分子在强电场的作用下发生电离。当样品蒸汽临近或接触带高正电位的金属探针时，由于高曲率半径的针端处产生很强的电位梯度，样品分子可被电离为正离子。场电离要求样品分子处于气态，灵敏度较低，因为应用逐渐减少。FD：场解吸的原理与场电离相同，但是对样品没有气化要求，而是被沉积在电极上直接送入；离子源得到准分子离子，因而场解吸适合于难气化、热不稳定的样品，如肽类化合物、糖类、高聚物、有机酸盐、有机金属化合物等。4.LC/MS 、GC/MS的区别？LC/MSGC/MS适宜对象小分子、易挥发、热稳定、能气化的化合物热不稳定、不挥发性；极性化合物；大分子量化合物（包括蛋白、多肽、多聚物等）谱库用电子轰击方式（EI）得到的谱图，可与标准谱库对比没有商品化的谱库可对比查询、仪器公司提供的谱图有限，只能自己建库或自己解析谱图离子化方式EI源CI源 大气压电离（API）电喷雾电离ESI大气压光喷雾电离APPI大气压化学电离APCI基质辅助激光解吸电离MALDI3.样品前处理的区别？样品前处理方法固相萃取SPE技术基于液-固相色谱理论，采用选择性吸附、选择性洗脱的方式对样品进行富集、分离、净化，是一种包括液相和固相的物理萃取过程；也可以将其近似地看作一种简单的色谱过程固相微萃取SPME是在固相萃取技术上发展起来的一种微萃取分离技术，是一种集采样，萃取，浓缩和进样于一体的无溶剂样品微萃取新技术。与固相萃取技术相比，固相微萃取操作更简单，携带更方便，操作费用也更加低廉;另外克服了固相萃取回收率低、吸附剂孔道易堵塞的缺点。因此成为目前所采用的样品前处理技术中应用最为广泛的方法之一液液萃取指利用化合物在两种互不相溶（或微溶）的溶剂中溶解度或分配系数的不同，使化合物从一种溶剂内转移到另外一种溶剂中。经过反复多次萃取，将绝大部分的化合物提取出来的方法索氏提取利用溶剂回流及虹吸原理，使固体物质连续不断地被纯溶剂萃取，既节约溶剂萃取效率又高加速溶剂萃取选择合适的溶剂、通过增加温度和压力来提高萃取过程的效率，溶剂用量少，效率高、样品基体影响小高速离心转速一般20000RPM过滤、超滤使用0.22m滤膜过滤，超滤则是可以根据不同分子量把分子、细胞及病毒等分为不同的馏份，除去小分子样品中的大分子蛋白，脱盐衍生反应衍生化反应中的一些特殊要求，决定了进行衍生化反应操作的