柱色谱分离实验ppt.ppt

柱色谱ColumnChromatography 了解 1 柱色谱法分离有机物的原理 2 固定相和流动相的选择原则 掌握 1 色谱柱的填充方法 2 柱色谱分离的基本操作 一 实验目的 色谱法简介 色谱法亦称色层法 层析法等 是分离 纯化和鉴定有机化合物的重要方法之一 还可定量分析 色谱法分类 操作形式 柱色谱法 columnchromatography 二 实验原理 柱色谱分离示意图 二 实验原理 二 实验原理 吸附剂的性质 均匀 表面积大 不反应 吸附能力不同 影响分离效果主要因素 2020 3 19 21 可编辑 和 和 在氧化铝柱子上若分离下列各组混合物 哪一个组分先被洗脱下来 三 实验内容 干法 10g硅胶 乙醇 柱色谱操作 实验步骤 吸附剂装填紧密 排除气泡 最终应使吸附剂的上端平整 无凹凸面 无断层 干法装柱湿法装柱 装柱 三 实验内容 装柱时应该注意均匀 不能有气泡 裂缝 否则样品可能顺缝隙流动而不吸附 影响样品的分离 应用质软的物体如吸耳球等轻轻敲击柱身 促使吸附剂装填紧密 排除气泡 最终应使吸附剂的上端平整 无凹凸面 样品为液体 可直接加样 样品为固体 可选择合适溶剂溶解为液体再加样 加样时 要沿管壁慢慢加入至柱顶部 勿使样品搅动吸附剂表面 加样 三 实验内容 洗脱 在柱顶不断加入洗脱剂 使洗脱剂永远保持有适当的量 不要让洗脱剂表面流干 使流动相流速适当 三 实验内容 洗脱时应注意 1 向柱内加入95 乙醇溶液洗脱 可以通过注射器沿管壁或安装滴液漏斗 在恒压或加压条件下进行洗脱 控制流出速度1滴 秒 逐渐出现色层带分离 2 第一色层带到达色谱柱底部时 立即用锥形瓶收集第一色层的溶液 直到其完全被洗出 注意 洗脱时切勿使溶剂流干 3 然后 改用水溶液作为洗脱剂 当第二色层带到达色谱柱底部时 立即收集第二色层的的溶液 直到其完全被洗出 4 用量筒分别量取所分离出来的两种溶液的体积后 倒入指定的回收瓶中 5 分离结束后 应先让溶剂尽量流干 然后倒置 用吸耳球从活塞向管内挤压空气 将吸附剂从柱顶挤压出 使用过的吸附剂倒入垃圾桶里 试样有色 在层析柱上可直接观察 洗脱后分别收集各个组分 收集 试样无色 收集洗脱液时 多采用等份收集 每份洗脱剂的体积随所用吸附剂的量及试样的分离情况而定 收集的每份洗脱剂的体积越小 分离效果越好 三 实验内容 三 实验内容 玻砂防堵塞装柱需紧密加压不可大溶剂勿流干 四 注意事项 色谱法在有机化学中的应用 分离混合物精制提纯化合物利用比移值 Rf 鉴定化合物跟踪反应进程 小结 色谱法的特点 分离效率高复杂混合物 同系物 异构体等 灵敏度高可以检测出 g g 1 10 6 级甚至ng g 1 10 9 级的物质量 分析速度快几分钟或几十分钟内可以完成一个试样分析 小结 柱色谱法分离甲基橙和甲基蓝 实验原理 甲基橙和亚甲基蓝均为指示剂 它们的结构式如下所示 甲基橙 亚甲基蓝 由于甲基橙和亚甲基蓝的结构不同 极性不同 吸附剂对它们的吸附能力不同 洗脱剂对它们的解析速度也不同 极性小 吸附能力弱 解析速度快的亚甲基蓝先被洗脱下来 而极性大 吸附能力强 解析速度慢的甲基橙后被洗脱下来 从而使两种物质得以分离 本实验以硅胶为吸附剂 95 乙醇作为洗脱剂 先洗出亚甲基蓝 再用蒸馏水作洗脱剂把甲基橙洗脱下来 三 实验内容 干法 10g硅胶 乙醇 柱色谱操作 实验步骤 仪器和试剂 1 仪器锥形瓶 玻璃漏斗 色谱柱2 试剂柱层析硅胶 脱脂棉 乙醇 95 甲基橙 亚甲基蓝 H2O 95 乙醇 1 1 A液 0 2mol L 1HCl 95 乙醇 1 1 B液 装置图 装柱 洗脱 实验步骤 装柱 1 装色谱柱 1 取一支色谱柱 在柱子的收缩部塞一小团脱脂棉花将色谱柱垂直固定在铁架台上 2 关闭活塞 向柱中倒入蒸馏水 也是洗脱剂 至柱体积的1 2 3 填吸附剂 称取10g硅胶于小烧杯中 加入15mL蒸馏水 用玻璃棒调好通过漏斗慢慢装入玻璃柱 使其逐渐沉入底部 用洗耳球敲打柱身使硅胶装填紧密 打开活塞 用小锥型瓶承接 控制滴速为1滴 秒 装完后在上面加一层脱脂棉 操作时要注意吸附剂始终不能露出液面 实验步骤 续 加样 当液面刚好流至脱脂棉平面相切时 立刻关闭活塞 加入5mL左右的A液 当硅胶面又将要露出时 关紧活塞 用量筒准确加入0 50mL以A液做溶剂的混合液 含甲基橙和亚甲基蓝各为0 400g L 1 洗脱 待此混合液将要渗入柱内时 立即用A液洗脱 此时可以观察到有鲜明的黄 蓝两条色带形成 黄色的甲基橙色带随洗脱剂的加入不断下移 而其顶部蓝色带不移动 当黄色带到达柱底部时 更换接受