细胞培养用具的清洗、消毒方法.doc

. 细胞培养用品的清洗与消毒v2.0一、清洗1、玻璃类流程：浸泡刷洗和烘干浸酸冲洗要求：清洗后的玻璃器皿干净透明无油迹，水滴不成股流下具体操作： 新买：5%稀盐酸浸泡过夜1自来水冲洗洗洁精刷洗2自来水冲洗（晾干或烘干50）浸酸（一天一夜）34自来水冲洗25遍蒸馏水洗5次双蒸水洗3次（或再用单蒸水冲洗5次）干热灭菌（将温度升至150后关闭烘箱密闭3h，待冷却至常温）6待使用已用：用后马上浸入洗洁精中浸泡一天7（带毒应浸入消毒水）洗涤剂刷洗后自来水冲洗（晾干或烘干50）浸酸（一天一夜）自来水冲洗25遍蒸馏水洗5次双蒸水洗3次（或再用单蒸水冲洗5次）干热灭菌（将温度升至150后关闭烘箱密闭3h，待冷却至常温）待使用注意：1. 新的初次使用的玻璃器皿，在生产及运输过程中，玻璃表面带有大量的干固的灰尘，且玻璃表面常呈碱性及带有一些对细胞有害的物质等,用5稀盐酸液浸泡过夜，以中和其中的碱性物质2. 刷洗要适度，过度会损害器皿表面光泽度3. 清洁液对玻璃器皿无腐蚀作用，而其强氧化作用可除掉刷洗不掉的微量杂质。浸泡时器皿要充满清洁液，勿留气泡或器皿露出清洁液面4.浸泡时间：一般为过夜，不应少于6小时5. 最好用洗涤装置如用手工操作需流水冲洗十次以上，每次水须灌满及倒干净，然后用蒸馏水清洗3-5次，晾干（或烘干）备用6.或高压蒸汽灭菌（湿热法），容器水分烘干牛皮纸包内、报纸包外将容器口扎紧121，30min高压灭菌待使用7. 用后立即浸入水中，要求完全浸入，不能留有气泡或浮在液面2、塑料类具体操作：新买：一次性无菌塑料制品打开包装即可使用已用：用后立即用流水冲洗洗涤剂浸泡3小时后刷洗（用纱布或棉签）自来水冲洗5%稀盐酸浸泡过夜双蒸水煮沸23次 （10min/次）包装烘干（50）待使用3、橡胶类具体操作：新买/已用：用后立即用流水冲洗洗涤剂浸泡3小时后刷洗（用纱布或棉签）自来水冲洗5%稀盐酸浸泡过夜双蒸水煮沸23次 （10min/次）包装烘干（50）待使用4、镊子、剪刀具体操作：洗涤剂刷洗自来水冲洗56次75%医用酒精浸泡3小时酒精棉球1擦拭待使用注意：1.酒精棉球应用双蒸水配置5、不锈钢除菌滤器具体操作：洗涤剂刷洗滤器流水冲洗15min蒸馏水冲洗23次（或浸泡24h）三蒸水冲洗23次（或24小时）干燥备用6、金属滤网具体操作：自来水冲洗蒸馏水冲洗三蒸水冲洗干燥备用二、消毒1.紫外线：用于空气，操作台表面和不能使用其它法进行消毒的培养器皿。消毒时间：3060min（至少）2.高压蒸气灭菌法（湿热）：15磅，121，20min培养用液、橡胶制品 l0磅l0min布类、玻璃制品、金属器械等 15磅20min3.干烤：160，2h（适用于玻璃器皿等）注意：消毒后不要立即打开箱门，以防止冷空气骤然进入引起玻璃炸裂，影响消毒效果。4.75%酒精：主要用于操作者的皮肤，操作台表面及无菌室内的壁面处理，一般要求为70%75%的乙醇，用蒸馏水配制5. 抗生素：主要用于培养用液灭菌或预防培养物污染。常用的抗生素：青霉素（浓度是100g /ml）链霉素（100g/ml）附酸液配制：酸液配制：重铬酸钾（g）浓硫酸（ml）蒸馏水（ml）强清洁液 631000200次强清洗液 1202001000弱清洁液 （常用） 1001001000（危险！请勿单独配制此溶液）具体以配置10000ml常用清洁液为例介绍如下操作：1.先在搪瓷盆或塑料盆中加入蒸馏水8000ml，2.称取1000g重铬酸钾，用玻璃棒搅拌直至溶解（可加热以辅助溶解）,3.待重铬酸钾液冷却后，缓慢加入1000ml浓硫酸，边加边用玻璃棒搅动，以混合液温度不过快上升和不出现重铬酸钾结晶为度。4.配好后倒入洗液缸中备用。要求：1新配制的清洁液呈棕红色。当使用时间过久，清洁液的颜色变暗、发绿或混浊时，应弃去（深埋地下），配制新的。2配制、盛装清洁液的容器应防酸、耐热、有较大的开口，一般用瓷缸、玻璃制品或耐酸塑料制品。注意：1.配制时应注意安全，须穿戴耐酸手套和围裙，并要保护好