MRD检测在急性白血病分层治疗中的意义解读.ppt

微量残留病检测在急性白血病分层治疗中的意义 MRD TheleukemicpopulationundectablebymorpglogicmethodshasbeendefinedasMRD MinimalResidualDisease MRD MRDisatermusedwhenthereisevidence immunophenotypic molecular orcytogenetic thatleukemiccellsremainintheBMbutthereareinsufficientcellstobedetectedbyroutineexaminationunderthemicroscope MRD检测的方法 MRD监测的临床意义 MRD检测在分层治疗中的意义 FCM MRD检测的结果 MRD检测方法 PCR 基因 定性 定量 RQ PCR b 多参数FCM 免疫标志 发病时寻找免疫标志和基因标志进行检测 目的基因 融合基因 BCR ABL AML1 ETO PML RAR 基因重排 IgH TCR 10 4 10 5 基因突变 FLT3 ITD NPM1 10 5 基因表达增加 WT1 PRAME 10 3 优点 灵敏度高 10 5 10 6 5copes 10 5特异性强缺点 1 融合基因 应用范围有限 ALL 10 30 AML 30 50 2 IgH TCR 90 操作复杂 费时 需要基因测序 特异引物 探针 每例患者特异 3 容易污染 出现假阳性 RQ PCR检测MRD特点 优点 灵敏 ALL 10 4 AML 10 3 10 4 获取细胞相关 定量单位 细胞 快速 检测当天即可知结果操作简便应用范围广 90 缺点 表型的变化 假阴性受前体B细胞 Hematogones 的干扰 形态幼稚 表达CD34 TDT在小儿 化疗后 SCT后比例增加 5 需要较高的分析水平和技能应用不够广泛 需要建立标准化操作 FCMMRD检测的特点 定义 正常骨髓 PB中不表达或表达比例较低的免疫表型 白血病相关的免疫表型 LAIP LeukemiaAssociatedImmunoPhenotype FCM MRD 白血病细胞的特异抗原 NG2 7 1 IM MRD检测的抗原CD34 CD33 正常分化抗原 表达于正常细胞的不同系列 分化阶段 非白血病细胞所特异 交叉系列抗原 B T 髓 NK细胞抗原非同期抗原共表达 CD15 CD117CD34 CD64抗原表达量异常 表达强度过高 过低或不表达异常的光散射信号 FSC和SSC LAIP的分类 基础 熟悉正常细胞不同分化阶段抗原出现的顺序和表达量的规律 Cytometry communicationsinClinicalcytometry 38 139 152 1999 诱导缓解后MRD水平与累计复发率 Coustan SmithE BLOOD 2000 96 2691 JohnsHopkins MostinformationdisplaysNo ofcases ACD19 CD45 CD20 CD10 N 82 CD45vsCD1048 59 FSCvsCD1013 16 FSCvsCD2011 13 CD10vsCD204 5 76 93 BCD19 CD45 CD9 CD34 N 77 CD45vsCD3427 35 FSCvsCD3417 22 CD34vsCD916 21 72 94 A B81 99 Leukemia 1999 13 558 567 AChildren sOncologyGroupStudy FCM MRD Blood 2008 111 5477 诱导缓解后MRD检测的意义 D29 N 2134 诱导后MRD水平对早期和晚期复发的影响 Relapse freesurvival Years NCISR伴好遗传学特性患者MRD与EFS关系 Years Years 4 10 8天PBMRD的意义 多变量分析 鉴别预后非常好的一组患者 NCI SR DTTEL AML1 MRD D8andD29 12 成人 ALL FCM Blood 2003 10 4695 CD7 CD5 CD3CD4 CD8 CD3CD7 CD2 CD3CD7 CD34 CD38 Spain MRD水平与RFS 11 76 n 12 102 Day14MRD 0 03 RFSOF90 at5years 对RFS的多变量分析 Statusofminimalresidualdiseaseafterinductionpredictsoutcomeinbothstandardandhigh riskPh negativeadultacutelymphoblasticleukaemia ThePolishAdultLeukemiaGroupALL4 2002MRDStudyN 116 BritishJournalofHaematology 2008 142 227 CD7 CD2 CD3CD7 CD5 CD3CD7 CD38 CD34CD7 CD4 CD8TDT CD7 Ccd3CD7 CD1a CD3cCD3 CD7 CD3 CD10 CD20 CD19CD34 CD22 CD19CD34 CD38 CD19CD45 CD34 CD19TDT CD10 CD19CD58 CD52 CD19CD33 CD13 CD19CD15 CD117 CD19CD65 CD56 CD19CD7 CD2 CD10 B ALL T ALL 诱导缓解后MRD与复发关系 诱导后MRD状态与治疗的关系 对复发率和leukaemiafree survival的多变量分析 Riskandresponse basedclassificationofchildhoodB ALL Children sOncologyGroup COG Blood 2007 109 926 935 Retrospective CCG 1988 1995 POG 1986 1999 N 6238 Age 1 22y COGriskclassificationscheme Riskfactors Age 10yWBC 50000 LCytogenetics TEL AML1 Trisomies 4 10 17 BCR ABL MLL Day 14marrowresponse M125 blastDay 29MRD FCMCNS TD ChildhoodB Precursor ALL Age 10 WBC 50000 L HighRisk StandardRisk TEL Tris D8 15 29BM D29MRD CNSorTD MLL M1 M1 0 1 n LowRisk M1 M1 0 1 n D15M2 3 0 1 1 0 SR HR D8 15BM D29BM MRD CNSorTD MLL M1 M1 0 1 n D15M2 3 0 1 0 HR HR Randomized Augmented Augmented BCR ABL MLL SER DI1 0 D43 M2 3 MRD 1 0 VHR Riskandresponse basedclassificationofchildhoodB ALL Blood 2007 109 926 935 PediatricOncologyGroup POG Children sCancerGroup CCG Riskandresponse basedclassificationofchildhoodB ALL IgHTCR基因的阳性率和敏感性 TFlohr Leukemia 2008 22 771 782 AIEOP BFMALL2000 PCRMRD指导的危险度分层 AIEOP BFMALL2000化疗流程 MRD指导的分层标准 HR PPR NR BCR ABL MLL AF4 QR PCR检测MRD流程 Event freesurvival cumulativeincidenceofrelapse Blood 2010 115 3206 MolecularresponsetotreatmentredefinesallprognosticfactorsinchildrenandadolescentswithB cellprecursoracuteLymphoblasticleukemia resultsin3184patientsoftheAIEOP BFMALL2000study TEL AML1 favorableDNAindex 1 16and 1 6 PCR MRD对预后好患者的影响 PCR MRD对Ph 患者的影响 SR IR HR PCR MRD对Ph 患者的影响 多变量分析 CML欧洲白血病网 ELN 最新推荐 伊马替尼400mg d初始治疗失败的定义 3个月未达到CHR 6个月未达到任何CyR 12个月未达到PCyR 18个月未达到CCyR 任何时间 丢失之前达到的CCyR或CHR疾病进展或出现耐药的Abl激酶突变推荐采用第二代TKI尼洛替尼治疗 慢性期 加速 急变期 NCCN最新版治疗指南推荐 对于伊马替尼400mg d初始治疗患者 出现以下事件推荐患者接受尼洛替尼治疗 3个月未达到血液学反应或者血液学复发 6个月未达到任何CyR 12个月未达到PCyR或者细胞遗传学复发 18个月未达到CCyR或者细胞遗传学复发 CML患者CCR后BCR ABLmRNA动态变化与imatinib应用 QinYZ LiuYR ZhuHH etal IntJLabHematol2008 30 317 CCR Ph 其中1例患者由CCR进展至急变期 BCR ABL升高2 5log 但未检测出Ph染色体 QinYZ LiuYR ZhuHH etal IntJLabHematol2008 30 317 CML患者CCR后的BCR ABLmRNA水平提示复发 空心 CCR 实心 Ph 正常B细胞的分化规律 北京大学人民医院血液病研究所 CD10CD34CD19与CD45关系 CD22CD20CD19与CD45关系 CD38CD58CD19与CD45关系 I CD34 CD10 cIg sIg Com B ALL II CD34 CD10 cIg sIg pre B ALL III CD34 CD10 cIg sIg matureB ALL Note noCD19 CD10 CD34 Pro B ALL 成人与儿童B ALL各亚型中LAIP发生率 363 403 90 1 236 262 90 1 127 141 90 1 总 8 15 53 3 e 8 12 69 2 c 0 3 0 a 成熟 59 75 78 7 d 35 46 76 1 b 24 29 82 8 Pre 238 255 93 3 148 159 93 1 90 96 93 8 Com 58 58 100 45 45 100 13 13 100 Pro 总 成人 儿童 CD34 CD10 B ALL 亚型 中国实验血液学杂志2006 14 853 Campana Cytometry38 139 152 1999 MRD 0 1 CD45 CD10st CD34s 分析全部CD19 的细胞 以Hematogones作为内对照观察每个双参数的图形 无僵硬设门优点 避免表型改变所致假阴性不依赖于发病时的IM缺点 不易掌握 4色FCM检测B ALLMRD的临床意义 98例 儿童78 成人20 671份标本 6 8次 人 10 8月 人 3 1月 次 中国血液学杂志2006 27 302 两组四色抗体 通用 CD34 CD10 CD45 CD19个体化 CD38 CD123 CD13 CD33 CD58 CD20 CD45 CD19无IM CD20 CD22 CD45 CD19orCD20 CD38 CD45 CD19 连续监测 间隔 3M 如MRD 需要证实时 在 2W 发病1 3个月MRD 和MRD 患者累计复发率 P 0 001 12岁女Pro B ALL连续检测结果 MRD 0 45 7色 FCM MRD B ALL CD10 CD34 CD123 CD38 CD58 CD45 CD19 CD19 CD10 CD10 CD34 CD38 CD10 CD58 CD34 CD45 CD45 CD123 CD123 CD10 CD45 CD45 SSC SSC AMLMRD检测 NBM CD34 细胞亚群分析 CD7 CD56 CD3 CD33 CD38 CD15 CD1b CD13 CD19 HLA DR CD117 HLA DR CD34 正常骨髓CD34 SSClowCD117 SSClow细胞中的抗原表达 x SD 中华血液学杂志2008 29 121 610例AML和正常骨髓中LAIP细胞的表达差异 中华血液学杂志2007 28 731 19种抗体 四色组合 LAIP 86 诊断时AMLM2患者 特点 SSC小CD117 CD33 CD13 HLA DR LAIP CD117 CD34 CD33 HLA DR 和CD117 CD34 CD33 CD13 诊断后23个月 CR MRD 0 25 诊断后27个月 CR MRD 0 80 AML治疗后MRD 和MRD 患者RFS 3 4M 1 2M 5 6M 中国实验血液学杂志2009 17 551 N 95AML601份BMLAIP MRD 0 33 7色 FCM MRD AML CD56 CD19 CD33 CD34 CD117 CD45 CD34 CD38 CD56 CD117 CD34 CD56 CD19 CD19 CD33 CD33 CD33 CD33