CDC_ATP论文医疗器械清洗效果评价方法的研究.doc

医疗器械清洗效果评价方法的研究研究生：邢书霞导 师：张流波 李新武中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所摘 要本研究通过蓝光试验、潜血试验和ATP生物荧光法等几种方法的比较，将ATP生物荧光法引入到医疗器械清洗效果评价方法中，提出医疗器械清洗合格的ATP相对光单位（RLU）。主要结果如下：1. 蓝光试验评价医疗器械清洗效果的研究：1.1 2.510-5的血液稀释液用蓝光试验可100%测出，1.2510-5的血液稀释液用蓝光试验可80%测出。1.2 蓝光试验测定细菌残留不灵敏。2. 潜血试验评价医疗器械清洗效果的研究：2.1 510-6的血液稀释液经潜血试验可100%测出，2.510-6的血液稀释液经潜血试验可80%测出；2.2 潜血试验测定超声波清洗器清洗前后血液残留量：2.2.1当血液污染物浓度小于10-3 血液稀释液时，相同清洗条件下，医疗器械初始污染物浓度越低，潜血试验阳性率越低；并且相同污染物污染医疗器械，清洗液作用时间越长，潜血试验阳性率越低；2.2.2相同污染物污染医疗器械，当血液污染物浓度在10-3 10-5范围内时，清洗液清洗5min水洗1 min潜血试验阳性率显著低于水洗6min；当血液污染物浓度为 10-5时，清洗液清洗2min水洗1 min潜血试验阳性率显著低于水洗3min。2.3潜血试验测定细菌残留不灵敏。3.ATP生物荧光法评价医疗器械清洗效果的研究：3.1血液稀释10-2-10-9范围内，血液浓度越低，RLU也越低，血液浓度的对数值与RLU的对数值之间呈正相关关系（R2= 0.9803），用ATP生物荧光法可测知的血液残留量为10-9血液稀释液。3.2 ATP生物荧光法测定超声波清洗器清洗前后血液残留量：3.2.1相同清洗条件，医疗器械初始污染物浓度越低，其RLU值越低；3.2.2相同浓度污染物污染医疗器械，清洗时间越长，RLU值越低；并且清洗液清洗组RLU显著低于水洗组RLU。 3.3金黄色葡萄球菌和大肠杆菌菌量在102108cfu范围内时，菌量对数值与RLU的对数值之间呈线性关系（金黄色葡萄球菌R2=0.9778，大肠杆菌R2=0.9840 ），表明ATP生物荧光法可对102108cfu范围内的菌量进行定量测定。 3.4 ATP生物荧光法测定超声波清洗器清洗前后细菌残留量：ATP生物荧光测定值RLU可与传统的菌落计数值相对应，ATP生物荧光法可快速反映清洗前后的细菌残留量。4.几种评价方法对清洗后医疗器械清洗效果评价结果的比较：4.1 ATP生物荧光法较潜血试验、目测和放大镜下观察更灵敏，且可定量测定。4.3 预洗去除污染团块，对保证医疗器械的清洗效果非常重要。5. 参考国际标准，考虑我国实际国情，采用ATP生物荧光法评价医疗器械的清 洗效果时，建议RLU2000作为评价医疗器械清洗合格的判定标准。采用ATP生物荧光法可以快速评价医疗器械清洗效果，只需几分钟即可出结果，十分快速、方便，适合临床实际工作需要。关键词：医疗器械清洗；ATP生物荧光法；RLU；潜血试验；蓝光试验；细菌计数 前 言由于医疗器械清洗和消毒不严而造成医源性感染，已成为当前一个重要的临床问题1。医疗器械使用后进行彻底的清洗，去掉附着在上面的血液、脓液及其他体液等有机物，是保证医疗器械清洗效果，控制医院感染的关键环节。国内外的研究证明手术器械上污染的血液、脓液、其他体液和非水溶性的污物经常与微生物混合存在，在微生物表面形成一层保护层，妨碍消毒灭菌因子与微生物的接触或延迟其作用，严重影响消毒剂和物理灭菌方法对微生物的杀灭作用2。而且，有机物的残留有利于微生物的滋生繁殖。另外有机物中的某些成分可腐蚀器械的表面镀层，使器械受到锈蚀。因此，医疗器械彻底清洗是保证医疗器械消毒灭菌效果的前提，WHO对器械的清洗消毒推荐原则中指出，对污染器械进行初步清洁是消毒的必要步骤3。尤其随着克雅氏病的出现，清洗显得更为重要。对不同的医疗器械应该选择不同的清洗方法，对结构复杂的器械，如各种内镜必须手工清洗，结构精细的金属医疗器械可用超声波清洗器进行清洗，一般的医疗器械主要用自动清洗器进行清洗。但是，在医疗器械的清洗消毒工作中，究竟何为“清洗合格”，到目前为止国际上尚无统一的标准，原因是评价医疗器械的清洗效果缺乏统一、简单、广泛接受的测试污染物。在医疗器械清洗效果的评价方法中，细菌计数是最早采用的的方法之一，但是它仅能检测微生物残留量，不能检出可能存在的其他污染物，并且需要48h才可以知道结果。国外医院主要采用目测、潜血试验、蓝光试验、生物膜和A0值的方法评价医疗器械的清洗效果，近几年有人将ATP生物萤光法引入内镜清洗前后残留物检测4，但国外有关这几种方法的报道较少，国内未见有关这几种方法的系统报道。国内医院目前主要采用目测方法、蓝光试验和潜血试验进行评价医疗器械清洗效果。目测方法操作相对简单，容易施行，但是，人为的判断差异大，并且只能观察到粒径50m的污染物5，有资料报道，医疗器械清洗后，经目测认为合格的医疗器械中，潜血试验阳性率为39.6%57.5%6。蓝光试验和潜血试验只对血源性污染具有监测意义，潜血试验可检测出5mg/L以上的血量7，但不能测出非血源性污染物。因此，本课题拟将ATP生物萤光法用于评价医疗器械的清洗效果，并且通过目测、潜血试验、蓝光试验和ATP生物萤光法等几种方法的的比较，提出医疗器械清洗效果实验室评价方法，为判定临床医疗器械清洗后的洁净度提供参考依据，同时也为制定清洗液标准提供实验室依据。并且至今为止，国内无有关清洗效果的实验室评价方法，通过该研究填补该方面的空白，以此来持续推动清洗方法的改进和清洗质量的提高。现将研究结果分为四部分报告：1) 蓝光试验评价医疗器械清洗效果的研究；2) 潜血试验评价医疗器械清洗效果的研究；3) ATP生物荧光法评价医疗器械清洗效果的研究；4) 目测、放大镜下观察、潜血试验和ATP生物荧光法对清洗后医疗器械清洗效果评价结果的比较。第一部分 第二部分 第四部分略第三部分 ATP生物荧光法评价医疗器械清洗效果的研究ATP生物荧光法的测定原理：荧光素酶在Mg2、ATP、O2的参与下，催化荧光素氧化脱羧，产生激活态的氧化荧光素，并放出光子，产生560nm的荧光：ATP广泛存在于各类生物体中，是生物体的能量来源，含量较为稳定8,9,10。细菌或细胞裂解后释放的ATP参与上述酶促反应，用荧光检测仪可定量测定反应的发光值，从而获知ATP的含量，再以ATP量与细菌计数或血液含量的对应关系，推算医疗器械清洗后细菌或血液的残留量，从而快速评价清洗效果。试验一 ATP生物荧光法与细菌计数法的相关性研究 材料与方法1 试验菌金黄色葡萄球菌ATCC6538（6代-8代，由国家微生物菌种保存中心提供）大肠杆菌8099（6代-8代，由国家微生物菌种保存中心提供）2 主要器材2.1 二级生物安全柜（Bilogical Safety Cabinet Class ，美国 NUAIRE 公司)2.2 隔水式恒温培养箱（美国Heraeus）2.3 JZ3002型天平（上海天平仪器厂）2.4 电动混合器（博威科技发展有限公司）2.5 刻度吸管（1.0ml 、5.0ml、10.0ml）,试管2.6 一次性无菌平皿（青岛阿尔法医疗器械有限公司）2.7 微量可调移液器（法国Gilson）2.8 HEV-500型压力蒸汽灭菌器（日本HIRAYAMA公司）2.9 量筒（250ml、1000ml）、量杯（1000ml） 2.10 微波炉2.11 荧光光度计（英国Hygiena公司）3 主要试剂及配制3.1 磷酸盐缓冲液 （PBS，0.03mol/L，pH7.2）无水磷酸氢二钠 2.83g磷酸二氢钾 1.36g蒸馏水加至 1000ml将各成分加入到 1000ml 蒸馏水中，待完全溶解后，调 pH 至 7.27.4，于 121 压力蒸气灭菌 20min备用。3.2 稀释液(TPS)胰蛋白胨 10g 氯化钠 8.5g 蒸馏水 1000ml将各成分加入到 1000ml 蒸馏水中，加热溶解后调pH至 7.27.4，于121 压力蒸汽灭菌20min备用。3.3 标准硬水(硬度342mg/L) CaCl2 0.034g MgCl26H2O 0.139g 蒸馏水加至 1000ml。于121 压力蒸汽灭菌20min备用。3.4 营养琼脂培养基蛋白胨 10g 牛肉膏 5g 氯化钠 5g 琼脂 15g 蒸馏水 1000ml除琼脂外其他成份溶解于蒸馏水中，调pH 至 7.27.4，加入琼脂，加热溶解，分装，于121 压力蒸汽灭菌 20min备用。3.5 胰蛋白胨大豆肉汤培养基（TSB）胰蛋白胨 1.5%大豆蛋白胨 0.5%氯化钠 0.5%用蒸馏水配制而成，调节pH为7.20.2，经121压力蒸汽灭菌后使用。3.6 荧光素酶3.7 裂解液4 方法与步骤：4.1细菌计数菌数4.1.1 取37培养18-24h的金黄色葡萄球菌（ATCC6538）或大肠杆菌8099,以胰蛋白胨大豆蛋白胨（TSB）洗菌，制成菌悬液，室温备用；4.1.2 将菌悬液作系列梯度稀释：原液、10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6和10-74.1.3 选择适宜稀释度试管（以预计生长菌落数每平板为 15cfu300cfu 者为宜），吸取混合均匀的悬液 1.0ml 加于无菌平皿内。每一稀释度接种 2个平皿；4.1.4 将冷至4045的熔化营养琼脂培养基，每平皿15ml20ml倾注于已加入样液的平皿中；4.1.5 将平皿盖好，轻轻摇动混匀，平放于台上。待琼脂凝固后，翻转平皿，置37温箱内培养；4.1.6 观察细菌生长情况，培养至 48h，计数最终菌落数。4.2 ATP生物荧光法RLU测定4.2.1 取4.1.2中制备的菌悬液各50ul，加入无菌离心管中；4.2.2 再加入50l裂解液，混匀后室温下放置10s；4.2.3 加入400l荧光素酶，迅速混匀后立即用荧光光度计测定RLU；4.2.4 将各个稀释度菌悬液的菌落计数值与RLU之间的关系进行曲线标定；4.3 上述试验重复五次。结 果1金黄色葡萄球菌（ATCC6538）测定结果：随着细菌悬液浓度的降低，RLU逐渐降低（见表6），对金黄色葡萄球菌的细菌菌数和其RLU作统计学分析，发现细菌悬液菌数的对数值与RLU的对数值之间呈线性关系（R2= 0.9778，P0.001）(图1)表6 金黄色葡萄球菌菌落计数与RLU的对应关系菌落计数相对光单位cfulog（cfu）RLULog(RLU)2.791088.4545829016.662.781077.4423217006.372.761066.446999315.852.811055.45810964.912.751044.4481603.912.821033.459852.992.821022.451762.252.75101.441202.08表中cfu和RLU值均为5次试验结果的平均值图1 金黄色葡萄球菌菌数对数值与RLU对数值的线形关系2大肠杆菌（8099）测定结果：随着细菌悬液浓度的降低，RLU逐渐降低（见表7 ），对大肠杆菌的细菌菌悬液菌数和其RLU作统计学分析，发现细菌悬液菌数的对数值与RLU的对数值之间呈线性关系（R2=0.9840, P0.001）(图2)表7 大肠杆菌菌落计数与RLU的对应关系菌落计数相对光单位cfulog（cfu）RLULog(RLU)7.021088.8546634856.676.991077.8421136426.336.871066.846663695.826.901055.841049565.027.011044.8594023.976.921033.8412423.096.891022.841382.146.99101.84291.46表中cfu和RLU值均为5次试验结果的平均值图2 大肠杆菌菌数对数值与RLU对数值的线形关系 试验三 ATP生物荧光法测定超声波清洗器清洗前后血液残留量材料与方法1 主要器材1.1 刻度吸管（1.0ml 、5.0ml、10.0ml） ,试管1.2 微量可调移液器（法国Gilson）1.3 HEV-500型压力蒸汽灭菌器（日本HIRAYAMA公司）1.4 量筒（250ml、1000ml）、量杯（1000ml） 1.5 医用止血钳截断，取其轴至齿端部分，脱脂清洗，经压力蒸汽灭菌后，烤干备用。1.6 荧光测定仪（由英国Hygiena公司）1.7 KQ100型超声波清洗器（昆山市超声波仪器厂生产，频率为28KHZ,功率为100w）1.8 专用生物荧光测试管 （由英国Hygiena公司）2 主要试剂及配制2.1 清洗液（由美国鲁沃夫公司生产）2.2 标准硬水(硬度342mg/L) CaCl2 0.034g MgCl26H2O 0.139g 蒸馏水加至 1000ml。于121 压力蒸汽灭菌20min备用。3 ATP生物荧光法测定医疗器械经超声波清洗器清洗后血液残留量3.1取第二部分试验三3.6和3.7中的样本分别用专用生物荧光测试管中棉拭子采样，横向往返涂擦10遍，纵向往返涂擦3遍，每涂擦一遍，将棉拭子转动一次，然后将棉拭子放入生物荧光测试管中，快速挤入裂解液和萤光素酶，利用荧光光度计测定RLU。3.2取第二部分试验三中3.8中2件未作任何处理的污染有血液的样本，用ATP生物荧光法测其RLU，作为清洗前对照；3.3同时用ATP生物荧光法测定无菌硬水的RLU，作为ATP生物荧光法阴性对照。3.4 试验重复三次。结 果超声波清洗器中，清洗液清洗+水洗后的RLU较单纯水洗下降更显著，随着污染物量的减少，RLU逐渐降低（测定结果见表9）。表9 不同血液浓度，不同清洗条件，ATP生物荧光法测定结果血液浓度清洗液清洗5min水洗1min水洗6min清洗液清洗2min水洗1min水洗3min清洗前对照血液原液143854163201178731196234588464710-1稀释液95687111956136528158968358974210-2稀释液47164626686731095614284647910-3稀释液1319442481287417755598947910-4稀释液212724982700266214466010-5稀释液10221339117113611185410-6稀释液3844406307152287 阴性对照为16、18、17、19和15。试验四 细菌计数、ATP生物荧光法测定超声波清洗器清洗前后细菌残留材料与方法1 试验用菌株金黄色葡萄球菌ATCC6538（6代-8代，由国家微生物菌种保存中心提供）2主要器材2.1 二级生物安全柜（Bilogical Safety Cabinet Class ，美国NUAIRE 公司)2.2 隔水式恒温培养箱（美国Heraeus）2.3 JZ3002型天平（上海天平仪器厂 ）2.4 电动混合器（博威科技发展有限公司）2.5 刻度吸管（1.0ml 、5.0ml、10.0ml） ,试管2.6 一次性无菌平皿（青岛阿尔法医疗器械有限公司）2.7 微量可调移液器（法国Gilson）2.8 HEV-500型压力蒸汽灭菌器（日本HIRAYAMA公司）2.9量筒（250ml、1000ml）、量杯（1000ml） 2.10 医用止血钳截断，取其轴至齿端部分，脱脂清洗，经压力蒸汽灭菌后，烤干备用2.11 微波炉2.12 荧光光度计（由英国Hygiena公司）2.13 KQ100型超声波清洗器（昆山市超声波仪器厂产，频率为28KHZ,功率为100w）3 主要试剂及配制3.1 稀释液(TPS)胰蛋白胨 10g 氯化钠 8.5g 蒸馏水 1000ml将各成分加入到 1000ml 蒸馏水中，加热溶解后调pH至 7.27.4，于121 压力蒸汽灭菌20min备用。3.2 营养琼脂培养基蛋白胨 10g 牛肉膏 5g 氯化钠 5g 琼脂 15g 蒸馏水 1000ml除琼脂外其他成份溶解于蒸馏水中，调 pH 至 7.27.4，加入琼脂，加热溶解，分装，于121 压力蒸汽灭菌 20min备用。3.3 胰蛋白胨大豆肉汤培养基（TSB）胰蛋白胨 1.5%大豆蛋白胨 0.5%氯化钠 0.5%用蒸馏水配制而成，调节pH为7.20.2，经121压力蒸汽灭菌后使用。3.4 清洗液（美国鲁沃夫公司）3.5 荧光素酶3.6 裂解液4 方法与步骤：4.1 取37培养18-24h的金黄色葡萄球菌（ATCC6538）,以胰蛋白胨大豆蛋白胨（TSB）洗菌，制成菌悬液，置20备用。4.2 用定量无菌移液器，取10l菌悬液液滴染于止血钳齿部，涂匀，置37恒温箱内干燥备用。4.3 取2000ml无菌硬水加入超声波清洗器中，同时加入7.5ml清洗液，混匀，开启超声波清洗器；4.4 在开启超声波清洗器10分钟后放入污染有菌液的止血钳；4.5 分别在作用至2min和5min时，取出样本，沥去水分，再放入盛有2007.5ml无菌硬水的超声波清洗器中清洗1分钟后，沥干水分，投入含5.0mTPS试管中，用电动混合器混合20s后，取50l稀释液进行生物荧光测定，同时取稀释液做10倍系列稀释，选择适宜稀释度，吸取1.0ml接种平皿，每管接种2个平皿，做活菌培养计数。4.6 取2007.5ml的无菌硬水加入到超声波清洗器中，在开启超声波清洗器10分钟后，将污染有菌液的止血钳，放入超声波清洗器中，分别在作用至3min和6min时，取出样本，沥干水分，投入含5.0mTPS试管中，进行细菌计数和ATP生物荧光法测定。4.7 另取2个污染有菌液的止血钳，不作任何处理，按以上方法同时进行细菌计数和ATP生物荧光法测定作为阳性对照。4.8 另取无菌硬水分别进行细菌计数和ATP生物荧光法测定，作为阴性对照。4.8 试验重复三次。结 果在超声波清洗器中水洗与清洗液清洗后，细菌计数法和ATP生物荧光法测定结果如表10所示，经统计学分析发现，清洗液清洗组的RLU和细菌菌数与水洗组相比较，均存在显著性差异（P0.05）。表10 细菌计数法和ATP生物荧光法测定结果组别ATP生物荧光法（RLU）细菌计数法（cfu）清洗液清洗2min水洗1min162207清洗液清洗5min水洗1min131152水洗3min349325水洗6min136157阳性对照291091105阴性对照：细菌计数为0cfu, ATP生物荧光法测定RLU为14。根据金黄色葡萄球菌菌数对数值与RLU对数值的线形关系y=1.3199x0.8317，计算出不同清洗条件下残留菌数的RLU理论值，与实验测得的实际值相比（如表11），统计分析表明，二者无显著性差异。说明清洗液清洗2min水洗1min、清洗液清洗5min水洗1min、水洗2min、水洗5min和阳性对照的菌量对数值与RLU对数值的对应关系符合直线回归方程，即可用RLU可以反映实际菌量，此结果与文献报道一致11,12表11 细菌计数法和ATP生物荧光法测定结果组别RLU理论值（log10）RLU实测值（log）清洗液清洗2min水洗1min2.382.32清洗液清洗5min水洗1min2.282.18水洗3min2.532.51水洗6min2.292.20阳性对照4.414.46讨 论 1、ATP生物荧光法对室温下不同稀释度的血液进行了测定，分析结果显示，血液稀释到10-2-10-9时，随着血液稀释度的增加，RLU逐渐降低，对采自同一个人的血液，血液稀释倍数的对数值与RLU的对数值之间成直线关系（R2=0.9803），说明通过测定RLU可以确定血液含量，最低可以测到稀释10-9的血液，这也表明ATP生物荧光法可比潜血试验和蓝光试验更灵敏地定量测定血液含量。2、血液是医疗器械使用后最常见沾染性污染物，且一般认为与医疗器械的清洁度具有较高的卫生学关联性。医疗器械上任何有机污物的存在，都会起到保护微生物的作用，影响消毒灭菌效果24。在实际应用中，沾染在医疗器械上的有机污物，可以通过ATP生物荧光法测出25,26。而且，ATP生物荧光法不仅比潜血试验和蓝光试验更灵敏，并且可测出的有机物范围更广，用它来判定医疗器械的清洗效果更为科学。3、ATP生物荧光法测定超声波清洗器清洗前、后血液残留3.1相同清洗条件，医疗器械初始污染物浓度越低，其RLU值越低；3.2相同浓度污染物污染医疗器械，相同清洗时间，清洗液清洗组RLU显著低于水洗组RLU，二者之间有显著性差异（P0.05），这可能因为清洗液有松解有机物的作用，能使其从器材表面脱落有关；3.3相同浓度污染物污染医疗器械，清洗时间越长，RLU值越低。4.金黄色葡萄球菌和大肠杆菌分属革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌，在室温下对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌不同稀释度菌液的RLU进行测定，结果显示，在102-108cfu范围内，菌数的对数值与RLU的对数值之间成线性关系（R20.90，P0.01），这与Siragusa等的报道13,14,15一致，说明两种试验菌都可以通过测定RLU确定细菌数量。并且细菌菌数越多，RLU值越大，这是因为细菌菌数多，ATP总量就高，其RLU值也大16ATP广泛存在于各类生物体内，含量较为稳定，可作为有机体存在的标志物。ATP生物反应技术已广泛应用于各种食品产业，如乳品活菌数计算17；设备清洁度评估18,19,20;畜产品污染评估21; 果汁业菌数计算22; 制酒和饮料工业23。ATP生物荧光法测定的全过程仅需要几分钟就可得到结果。5、细菌计数、ATP生物荧光法测定超声波清洗器清洗前后细菌残留5.1 通过细菌计数和ATP生物荧光法测定结果可以发现，在超声波清洗器中清洗液清洗2min+水洗1min和单纯水洗3min相比，清洗液对去除细菌残留有增强清洗效果的作用，清洗液清洗组和水洗组之间的细菌数和RLU皆有显著性差异。5.2 通过超声波清洗器清洗前后细菌计数菌数与标定的菌量和RLU曲线关系相比较所得到的RLU对数值，与实际测得的RLU对数值相比较，二者之间无显著性差异，说明可以用ATP生物荧光法测定RLU代替细菌计数，反映清洗前后的细菌残留。此结果与文献报道用ATP生物荧光法代替细菌计数来评价医疗器械清洗效果的结果相一致27,28,29。6、ATP生物荧光法测定的影响因素 有资料报道30，次氯酸盐、季铵盐、0.1%过氧化氢、0.25%三氯新对RLU测定并无明显影响, 但在其他研究中发现31,乳酸、磷酸三钠、1%过氧化氢和0.5%三氯新可降低所有ATP源的RLU值。因此，医疗器械清洗中使用的清洗剂残留对ATP生物荧光法测定是否有影响，还值得我们进行深入一步的研究。全 文 结 论本研究通过蓝光试验、潜血试验和ATP生物荧光法等几种方法的比较，拟将ATP生物荧光法引入到医疗器械清洗效果评价方法中，提出医疗器械清洗合格的ATP相对光单位。主要结果如下： 1 蓝光试验评价医疗器械清洗效果的研究：2.510-5的血液稀释液用蓝光试验可100%测出，1.2510-5的血液稀释液用蓝光试验可80%测出；蓝光试验测定细菌残留不灵敏。2 潜血试验评价医疗器械清洗效果的研究：2.1 510-6的血液稀释液用潜血试验可100%测出，2.510-6的血液稀释液用潜血试验可80%测出；2.2 潜血试验测定医疗器械经超声波清洗器清洗后血液残留；2.2.1相同清洗条件下，当血液污染物浓度小于10-2 血液稀释液时，医疗器械初始污染物浓度越低，潜血试验阳性率越低；2.2.2相同污染物污染医疗器械，当血液污染物浓度在10-3 10-5范围内时，清洗液清洗5min水洗1 min潜血试验阳性率显著低于水洗6min；当血液污染物浓度为 10-5时，清洗液清洗2min水洗1 min潜血试验阳性率显著低于水洗3min；2.2.3当血液污染物浓度在10-3 10-5 时，相同污染物污染医疗器械，清洗液作用时间越长，潜血试验阳性率越低；2.2.4 当血液污染物浓度在10-4 10-5 时，相同污染物污染医疗器械，清洗作用时间越长，潜血试验阳性率越低。2.3潜血试验测定细菌残留不灵敏。3 ATP生物荧光法评价医疗器械清洗效果的研究：3.1 血液稀释10-2-10-9时，随着血液稀释倍数的增加，其RLU随之降低，且血液稀释倍数的对数值与RLU的对数值之间呈直线关系（R2= 0.9803），说明可以用ATP生物荧光法定量测定稀释10-9的血液。3.2 污染有不同血液稀释液的医疗器械分别经不同作用时间清洗后，进行ATP生物荧光法测定发现，对相同污染物污染污染医疗器械，清洗时间越长，RLU越低；清洗液清洗组的RLU低于相同作用时间的水洗组；相同清洗条件，初始污染物量越低，其RLU越低。3.2细菌数在1102cfu1108cfu范围内，菌数的对数值与RLU的对数值之间成线性关系（R20.90，P0.01），说明可以用ATP生物荧光法测定细菌数。 3.3ATP生物荧光法测定清洗后细菌残留：相同清洗时间，清洗液清洗组的细菌数和RLU皆低于相同作用时间的水洗组；并且可以用ATP生物荧光法测得的RLU反映实际细菌残留。 4 目测、放大镜下观察、潜血试验和ATP生物荧光法的比较：4.1目测认为合格的样本，其放大镜下观察阳性率为29.17%；目测认为合格的样本中，潜血试验阳性率为82.5%；与潜血试验阳性率为27.50%相对应的ATP生物荧光法测定组，RLU最小值为877。说明测定血液残留时，几种方法的灵敏度顺序为：ATP生物荧光法潜血试验放大镜下观察目测。4.2预洗对去除血液污染是非常重要的一步。5 关于用何种方法评价医疗器械的清洗效果最准确，ATP生物荧光法测得RLU具体为多少作为判定医疗器械清洗合格的标准，还值得我们更深入一步的研究。本研究认为，利用ATP生物荧光法，既可比传统的细菌菌落计数法快速测定清洗前后的细菌残留，又可比潜血试验、蓝光试验更灵敏的定量测定清洗前后的血液残留，并且对任何含有ATP的污染物，都可定量测定。因此，可以用ATP生物荧光法测定医疗器械清洗效果，结合我国国情，参考国际标准，建议在采用本研究中使用的荧光测定仪和试剂的条件下，RLU2000作为医疗器械清洗干净的判定标准。参考文献1. 胡云霞 多酶清洗液在胃镜清洗中的应用J南方护理学报，2005，12（5）;562. 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