还原糖含量的测定课件.ppt

实验六还原糖和总糖含量的测定 3 5 二硝基水杨酸比色法 1 2020 3 21 目的 通过本次实验 掌握还原糖定量测定的基本原理 学习比色定糖法的基本操作 熟悉分光光度计的使用方法 2 2020 3 21 原理 还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类 单糖都是还原糖 双糖和多糖不一定是还原糖 乳糖和麦芽糖是还原糖 蔗糖和淀粉是非还原糖 还原糖的测定是糖定量测定的基本方法 其基本原理是用比色法对还原性的单糖进行测定 再分别求出样品中还原糖和总糖的含量 还原糖以葡萄糖含量计 3 2020 3 21 在碱性条件下 还原糖与3 5 二硝基水杨酸试剂 DNS 共热 3 5 二硝基水杨酸被还原为3 氨基 5 硝基水杨酸 棕红色物质 还原糖则被氧化成糖酸及其他产物 在一定范围内 还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度成一定的比例关系 在540nm波长下测定棕红色物质的吸光值 查对标准曲线并计算 就可以分别求出样品中还原糖和总糖的含量 4 2020 3 21 5 2020 3 21 操作步骤 1 绘制葡萄糖标准曲线 6 2020 3 21 将以上各管上下颠倒几次使溶液混匀后 按顺序倒入比色杯中 在540nm波长条件下进行比色测定 用0号管溶液调零点 分别记录各管吸光值 然后以葡萄糖浓度为横坐标 吸光值为纵坐标 绘制出标准曲线 7 2020 3 21 2 测定样品中还原糖和总糖含量 1 提取样品中的还原糖 准确称取1g食用面粉放置于100ml三角瓶中 加少量蒸馏水调成糊状 再加入50ml蒸馏水 摇匀 置于50 水浴条件下20分钟 使还原糖浸出 在4000rpm 5分钟条件下进行离心 得到的上清液倒入100ml容量瓶中 用蒸馏水定容至刻度 上下颠倒几次将溶液混匀 作为还原糖待测液 8 2020 3 21 2 提取样品中的总糖 准确称取0 1g食用面粉放置于100ml三角瓶中 加入10ml6mol LHCl及15ml蒸馏水 沸水浴30分钟 注意不能把水烧干 用滴管吸取1 2滴水解液于白瓷板上 加1滴I KI溶液 如显示出蓝色说明水解不完全 可适当延长沸水浴时间 若不显蓝色 则说明水解完全 9 2020 3 21 待水解液冷却至室温后加入1滴酚酞指示剂 用6mol LNaOH中和至微红色 在4000rpm 5分钟条件下离心 得到的上清液转移到100ml容量瓶中 用蒸馏水定容至刻度 上下颠倒几次混匀溶液 作为总糖待测液 10 2020 3 21 3 显色和比色 按下表操作 11 2020 3 21 结果处理 以1 2号管的吸光值 分别在标准曲线上查出相应的还原糖毫克数 按下列公式计算出样品中还原糖和总糖的百分含量 12 2020 3 21 注意事项 1 标准曲线制作与样品含糖量测定应尽量同时进行 一起显色和比色 2 实验过程中所有的试管要洁净 加入各种试剂量要准确 3 试剂不可倒出试剂瓶 必须用干净的移液管吸取 用后盖好瓶塞 放回原处 4 移液管使用 有色看外边缘 无色看中间凹处 5 沸水浴 须等水沸腾后 才能将要加热的物品放入锅中 时刻注意锅内的水 防止烧干 6 每组同学离开实验室时 必须经实验老师检查并同意后 方可离