过氧化氢酶 课件.ppt

H202 过氧化氢 过氧化氢酶 1 21 03 2020 2 21 03 2020 过氧化氢酶的简介及来源过氧化氢酶的制备过氧化氢酶活性的测定过氧化氢酶的应用过氧化氢酶的展望 3 21 03 2020 过氧化氢酶 是催化过氧化氢分解成氧和水的酶 存在于细胞的过氧化物体内 过氧化氢酶是过氧化物酶体的标志酶 约占过氧化物酶体酶总量的40 过氧化氢酶存在于所有已知的动物的各个组织中 特别在肝脏中以高浓度存在 简介 4 21 03 2020 几乎所有的生物机体都存在过氧化氢酶 其普遍存在于能呼吸的生物体内 主要存在于植物的叶绿体 线粒体 内质网 动物的肝和红细胞中 其酶促活性为机体提供了抗氧化防御机理 过氧化氢酶的来源 5 21 03 2020 称取新鲜小麦叶片或其它植物组织0 5g置研钵中 加入2 3ml4 下预冷的PH7 0磷酸缓冲液和少量石英砂研磨成匀浆后 转入25ml容量瓶中 并用缓冲液冲洗研钵数次 合并冲洗液 并定容到刻度 混合均匀将量瓶置5 冰箱中静置10min 取上部澄清液在4000r min下离心15min 上清液即为过氧化氢酶粗提液 5 下保存备用 过氧化氢酶的提取 6 21 03 2020 过氧化氢酶的提取 得到酶粗液后 利用硫酸铵分级沉淀 加入固体硫酸铵至30 饱和度 4 冰箱静置2h后 12000r min离心30min 弃沉淀 量上清液 取再加入硫酸铵至40 饱和度 12000r m离心30min 弃上清 留沉淀 沉淀用0 05mol L的磷酸缓冲液 pH7 2 溶解 4 用0 05mol L pH7 2的磷酸缓冲液透析过夜 再进行离子交换层析 凝胶过滤柱层析 最后是过氧化氢酶活性的测定 7 21 03 2020 过氧化氢酶活性的测定 分光光度法 荧光测定 同位素标记法 电化学法 8 21 03 2020 H2O2在240nm波长下有强烈吸收 过氧化氢酶能分解过氧化氢 使反应溶液吸光度 A240 随反应时间而降低 根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性 紫外吸收法 过氧化氢酶活性的测定 HMB是一种快速测定过氧化氢酶含量的方法 检测板放置在白水中一定时间后取出 不要接触检测板的表面 将其放在检测试管中 试管中装有一定量的稀释液和反应物 向试管中滴加10滴HMB50R试剂 HMB50R是一种强氧化剂 放置15min 然后将试管放在HMB测定仪中读取数据 该方法可用于工厂中直接测量过氧化氢酶的含量 HMB法 9 21 03 2020 过氧化氢分解酶随pH值和温度的改变 其活力随之变化 在pH 7左右和30 40 活性最大 过氧化氢浓度增大 会加快分解反应速度 但必须注意当浓度大于一定量时 酶的作用将减弱 这样过多的残留H2O2对纤维和染料是不利的 所以不能因为有了H2O2分解酶 就能任意地加大H2O2的用量 使用时 通常要注意H2O2分解酶对常用表面活性剂和H2O2稳定剂的相容性 实际生产应用pH为6 8 温度20 55 酶用量5 10KCLU 升 时间10 20min 此技术已慢慢地被国内所认识和接受 它对提高活性染料色泽鲜艳度很有利 过氧化氢酶的工艺要求 10 21 03 2020 应用 11 21 03 2020 实验室中还常常被用作了解酶对反应速率影响的工具 应用 食品工业中被用于除去用于制造奶酪的牛奶中的过氧化氢 过氧化氢酶也被用于食品包装 防止食物被氧化 纺织工业中 过氧化氢酶被用于除去纺织物上的过氧化氢 以保证成品是不含过氧化物的 美容业中的使用 一些面部护理中加入了该酶和过氧化氢 目的是增加表皮上层的细胞氧量 隐形眼镜的清洁上 眼镜在含有过氧化氢的清洁剂中浸泡后 使用前再用过氧化氢酶除去残留的过氧化氢 医学上 也可作为工具酶 用于检验尿糖和血糖 现代医学上认为机体衰老与氧化有关 例如染色体 酶等的氧化 所以 一些有还原性功能的物质可以在某种程度上抗衰老 如过氧化物酶体 维生素C E也有抗衰老作用 12 21 03 2020 过氧化氢分解酶 能将过氧化氢分解成水和氧气 而对纤维和染料没有影响 因而漂白后染色前 通过H2O2分解酶去除漂白织物上和染缸中残留的过氧化氢 以避免纤维的进一步氧化和染色时染料的氧化 同时能缩短加工时间 减少水洗用水 降低废水量 尤其对纱线 筒子纱和针织物更为适用 过氧化氢酶的应用原理 13 21 03 2020 未来的研究重点 1 通过菌种筛选 获取高产和能耐受高pH 高温度的过氧化氢酶的菌株 通过野生菌发酵过程控制与优化 提高发酵产量 同时对编码耐高温 高碱过氧化氢酶的基因进行鉴定 2 从高温高碱过氧化氢酶基因出发构建工程菌 结合现代在线控制与分析技术 进行过氧化氢酶发酵过程优化与控制研究 提高产酶水平 3 通过