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进度记录范文 进度记录试验方法牡丹组织与内生真菌的选取 （1）取材从洛阳牡丹园和安徽凤凰山牡丹园分别采集3-5年生完整牡丹植株，洛阳牡丹园采样凤丹2株，安徽凤丹采样1株，采集时，挖起牡丹植株周围泥土，深刨，使牡丹植株完整根系全部显露，接着拔起牡丹植株，除去根部大块的泥土，带回实验室。 （2）把带回来的牡丹植株清洗干净，清洗时，顺着牡丹根系的生长方向（以防损失牡丹根系的最外层），把粘附在上面的泥土清洗干净，用流水冲洗35遍，直至最后一次清洗时，自来水保持清澈，才算把根系清洗干净。 （3）将清洗干净的牡丹植株晾干表面水分，将牡丹植株分为根部、多年生茎部、一年生嫩茎3部分，分别装入密封袋放入冰箱冷藏室储存备用。 （4）选择植物表面无病斑的健康植株用于内生真菌分离，每种植物选择3一6株。 首先用自来水冲去整株植物样品表面的泥上，用蒸馏水冲洗干。 每株植物选择6一10块组织，然后分别用灭菌纱布包扎，进行表面消毒。 表面消毒的程序为首先用体积分数为70%的乙醇浸泡30s；再用有效氯含量为1%的次氯酸钠溶液浸泡叶、花3min，茎、种、根5min，最后用灭菌的去离子水冲洗2次每次1min。 收集表面消毒过程中使用的去离子水接种于新制的马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA培养基）表面，培养观察30d，看该培养基表面是否有真菌生长，以此来检验表面消毒的效果。 （5）将表面消毒完好的植物组织叶子切成长宽各1cm的方块，嫩茎切成0.5cm厚度的段接种于新制的马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA培养基），培养30d，观察长出的菌落分离纯化，若培养的菌落仍未纯化，继续分离培养直至菌种纯化，然后扩大培养。 光学显微镜真菌的处理方法挑取长势良好的菌丝，用棉兰乳酸酚作为悬浮液载剂，观察菌丝形态、分生孢子形态、分生孢子梗的形态，将培养的真菌制成孢子悬浮液，将其滴加于载玻片上面，盖上盖馍片，在光学显微镜上面用低倍镜和高倍镜观察并记录分生孢子形态。 光学显微镜牡丹材料的处理方法将表面消毒的新鲜植物茎部材料切成厚度为0.1cm的薄片、叶子切为长宽各1cm大小的切片后放在载玻片上，滴加棉兰乳酸酚后在酒精灯上徐徐加热至蒸气出现。 如此处理数次使组织透明，冷却后加盖玻片，在光学显微镜下观察。 当观察到的组织中的真菌与分离的真菌的形态相似时，拍照记录并和分离纯化的真菌比较差异。 扫描电子显微镜的真菌处理方法挑去长势良好的菌丝，在2%戊二醛PBS缓冲液中过夜固定，然后分用PBS缓冲液冲洗5次，时间分别为5min，10min，15min，20min，30min；然后用丙酮梯度脱水具体为10%，30%，50%，70%，100%脱水，每次20min，然后100%梯度脱水2次；然后用醋酸异戊酯置换2次，每次30min，处理完的样品放入干燥箱干燥，然后通过导电胶粘附于试样观察台上，电镀，放入扫描电子显微镜观察。 扫描电子显微镜牡丹材料的处理方法牡丹材料的扫描电子显微镜切片的处理方法与扫描电镜的真菌处理方法类似将光学显微镜下找到的含有内生真菌的牡丹组织切片放入2%戊二醛PBS缓冲液中过夜固定，然后分用PBS缓冲液冲洗5次，时间分别为5min，10min，15min，20min，30min；然后用丙酮梯度脱水具体为10%，30%，50%，70%，100%脱水，每次20min，然后100%梯度脱水2次；然后用醋酸异戊酯置换2次，每次30min，处理完的样品放入干燥箱干燥，然后通过导电胶粘附于试样观察台数据处理将拍好的光学显微镜下的菌丝照片与牡丹组织中真菌的照片比较；再将扫描电子显微镜下的菌丝照片与牡丹组织中的真菌照片作比较；还有洛阳凤丹与安徽凤丹的光学显微镜与电子显微镜的比较。 上，电镀，放入扫描电子显微镜观察。 3.3光学显微镜的观察结果在光学显微镜下培养的真菌与牡丹材料中的真菌样本，洛阳凤丹和安徽凤丹内生真菌形态图片图11光学显微镜真菌形态（J1-2）图12光学显微镜牡丹组织中内菌丝形态（洛阳凤丹凤丹）图13光学显微镜下牡丹组织中内生真菌形态（洛阳凤丹脱色）图14光学显微镜下牡丹组织中内生真菌形态（洛阳凤丹）图15光学显微镜下牡丹组织中内生真菌形态（安徽凤丹）3.4扫描电子显微镜的观察结果图16800X扫描电子显微镜菌丝图173000X扫描电子显微镜菌丝图181