病毒感染实验室诊断与防治原则医学PPT.ppt

病毒感染实验室诊断与防治原则 医学病毒学 MedicalVirology 1 目录 1 2 病毒感染实验室诊断 病毒感染防治原则 2 1 病毒感染实验室诊断 病毒感染标本采集与送检 尽早采集标本 发病初期 急性期 易检出病毒 注意无菌操作 杂菌污染可影响检测效果 采集合适部位标本 不同疾病及病程采集不同标本 标本尽快送检 病毒离开活体后室温下易死亡 标本低温暂存 70 病变组织保存于50 甘油缓冲盐水 可抑制杂菌生长 鼻咽分泌液 粪便等标本加抗生素 血清标本采集 尽量采取急性期与恢复期双份血清 4 暂存或 20 保存 血清学试验前需灭活补体 3 1 病毒感染实验室诊断 病毒标本直接镜检 光学显微镜检查 病理标本或含有脱落细胞及针吸细胞的标本可检查病毒包涵体 少用 荧光显微镜检查 荧光标记抗体染色镜检 常用 透射电镜检查 很少用 A 正常细胞 B 病毒感染细胞 狂犬病毒内基小体 A B 4 1 病毒感染实验室诊断 病毒分离培养 细胞培养 鸡胚接种 动物接种法 细胞培养法 原代 二倍体 传代细胞培养 不同病毒选择不同细胞进行分离培养 5 1 病毒感染实验室诊断 病毒在培养细胞内增殖的检查与鉴定 细胞病变效应 CPE 一些病毒增殖后引起细胞折光性下降 圆缩或肿胀 聚集或融合 脱落和死亡 6 1 病毒感染实验室诊断 红细胞吸附 流感病毒和某些副粘病毒感染细胞膜上可出现病毒的血凝素 能吸附豚鼠 鸡及人红细胞 抗血清或抗体可抑制红细胞吸附现象发生 称为红细胞吸附抑制试验 可作为此类病毒增殖及初步鉴定指标 腮腺炎病毒感染细胞吸附红细胞 7 1 病毒感染实验室诊断 干扰现象 一种病毒感染细胞后可以干扰另一种病毒在该细胞中的增殖 风疹病毒 人胚肾细胞病毒增殖 CPE 埃可病毒 人胚肾细胞病毒增殖 CPE 埃可病毒 风疹病毒感染细胞风疹病毒不增殖 CPE 细胞代谢改变 如病毒感染细胞后可使培养液pH发生改变 可作为初步判断病毒增殖的指标 8 1 病毒感染实验室诊断 鸡胚接种法 不同病毒分别接种鸡胚绒毛尿囊膜 尿囊腔 羊膜腔或卵黄囊等部位 常用于流感和腮腺炎病毒等分离培养 但很多病毒鸡胚中不能增殖 9 1 病毒感染实验室诊断 动物接种法 常用小鼠或大鼠 根据不同病毒组织亲嗜性差异 分别鼻内 脑内 腹腔或静脉等途径接种 如流感病毒通常鼻内接种 嗜神经病毒常用脑内接种 接种后观察动物发病和死亡情况 10 1 病毒感染实验室诊断 病毒数量与感染性测定 空斑形成单位 PFU 单个病毒颗粒增殖后所形成的局限性细胞感染病灶 中性红染色后出现因感染细胞死亡裂解而未着色的空斑 50 致死量 LD50 50 组织细胞感染量 TCID50 使50 鸡胚或动物死亡 50 细胞发生病变最小病毒量 病毒感染细胞后形成的孔斑 11 1 病毒感染实验室诊断 病毒抗原检测 免疫荧光法 IFA 使用荧光素标记抗体检测病毒抗原 具有快速 特异的优点 使用较广 酶免疫技术 EIA 多用ELISA 胶体金免疫层析法 GICA 快速 简便 但灵敏度和特异性不是很高 仅用于初筛或初步鉴定 化学发光免疫法 CLIA 具有简便 快速 敏感 特异 廉价 稳定等优点 是近年发展起来的新技术 目前临床上用于检测甲型和乙型肝炎病毒 12 1 病毒感染实验室诊断 病毒核酸检测 PCR 检测DNA病毒 如常规PCR 套式PCR和实时荧光定量PCR RT PCR 检测RNA病毒 如常规RT PCR 套式RT PCR和实时荧光定量RT PCR 核酸杂交 特异性标记探针检测病毒核酸 基因芯片 可同时检测多种DNA或RNA病毒不同片段 具有高通量 高敏感性和特异性等优点 13 1 病毒感染实验室诊断 病毒感染血清学诊断 IgM出现早 消失快 故可用于病毒现行感染的血清学诊断 IgG出现晚 维持时间长 一般仅用于调查人群对某些病毒的免疫水平以及检测预防接种效果 常用方法 补体结合试验 血凝抑制试验 使用双份血清标本的ELISA 第二份血清效价较第一份血清升高4倍及以上 其中lgM捕捉ELISA 广泛用于各种病毒感染性疾病的早期诊断 14 2 病毒感染防治原则 病毒感染的预防 人工主动免疫 接种疫苗 目前使用的疫苗有全病毒灭活疫苗 如乙型脑炎和狂犬病疫苗 减毒活疫苗 如脊髓灰质炎疫苗 基因工程疫苗 乙肝rHBsAg疫苗 人工被动免疫 注射含特异性抗体的免疫血清 纯化免疫球蛋白抗体 细胞因子 干扰素 胸腺肽 转移因子 等细胞免疫制剂 15 2 病毒感染防治原则 病毒感染的药物治疗 抗病毒化学制剂 核苷类药物 被细胞磷酸激酶作用后掺入子代病毒DNA中使病毒不能复制和转录 如治疗病毒性疱疹的阿昔洛韦 治疗乙肝的拉米呋啶 治疗爱滋病的司他夫定 非核苷类似物 抑制病毒DNA或RNA逆转录酶活性 如治疗病毒性疱疹和乙肝的膦甲酸钠 治疗爱滋病的奈韦拉平 蛋白酶抑制剂 能与病毒蛋白酶结合而抑制其活性 如治疗爱滋病的沙喹那韦 其它抗病毒药物 阻断甲型流感病毒吸附或脱壳的金刚烷胺 抑制流感病毒神经氨酸酶活性的扎那米韦 16 2 病毒感染防治原则 干扰素和干扰素诱生剂 干扰素 主要用于乙型和丙型肝炎病毒 人呼吸道合胞病毒等感染的治疗 干扰素诱生剂 如PolyI C等 中草药