HLA基因检测课件.ppt

HLA基因检测 1 医药交流PPT TableofContents 2 医药交流PPT TableofContents 3 医药交流PPT 什么是HLAMHC HLA 亚型 关联什么是HLA分型I型 II型 III型 IV型HLA分型与疾病检测骨髓与器官移植 免疫性疾病 代谢性疾病 神经内科疾病 骨科疾病等 基本概念 4 医药交流PPT 人类白细胞抗原humanleukocyteantigen HLA MHC Majorhistocompatibilitycomplex 主要组织相容性复合体 包括HLA H 2 ChLA RhLA DLA SLA RLA GpLA B等 5 医药交流PPT 1940年代 Snell和Gorer小鼠间的肿瘤及皮肤移植试验发现 决定小鼠间移植排斥与否 即组织相容性 的基因位于17号染色体短臂命名为组织相容性 2 H 2 H 2是一个由许多紧密连锁的基因位点构成的复杂系统 6 医药交流PPT 1950年代Dausset经产妇血清进行个体之间抗体与白细胞凝集和细胞毒试验发现人的MHC 命名为HLA基因位于第6号染色体短臂 7 医药交流PPT 1960年代 Benacerraf不同品系的豚鼠对一些抗原的免疫应答能力比较发现 控制机体对不同抗原的免疫应答能力的基因 Ir基因 位于MHC基因复合体内 8 医药交流PPT Benacerraf Dausset和Snell三位科学家分别从不同角度对MHC的免疫遗传学进行的开拓性研究 荣膺1980年的诺贝尔医学和生理奖 9 医药交流PPT HLA共分为4型 I型分子包括HLA A HLA B和HLA C 广泛存在与各种组织细胞中 II型分子包括HLA DP HLA DQ和HLA DR 存在于B细胞 巨噬细胞和活化T细胞中 III型分子为补体系统 包括C2和C4位点 存在于血清中 IV型分子可能是一些分化抗原 只存在于淋巴细胞 某些细胞毒性T细胞和白细胞中 HLA分型 10 医药交流PPT HLA基因系统的多态性及一些主要基因座位的等位基因数正式命名显示多态性的HLA基因座位有31个 共2320个等位基因 图中所示为常见基因座位的等位基因数 及一些主要基因座位的等位基因数正式命名显示多态性的HLA基因座位有31个 共2320个等位基因 图中所示为常见基因座位的等位基因数 11 医药交流PPT 12 医药交流PPT HLA分型的基本检测方法 细胞学方法测抗原特异性 型 血清学方法测抗原特异性 型 微量淋巴细胞毒试验 分子生物学方法测等位基因PCR SSPPCR LuminexPCR SBTPCR 二代测序PCR 流式细胞仪 13 医药交流PPT HLA抗原和等位基因命名 用血清学及细胞学方法检测抗原特异性 HLA B27 HLA DR4 血清学方法 HLA DPw2 细胞学方法 用分子生物学方法检测等位基因 HLA DRB1 0405 HLA B 2707 14 医药交流PPT 例如HLA B27 HLA B 2701HLA B 2702HLA B 2703HLA B 2704HLA B 27051HLA B 27052HLA B 2706HLA B 2707 HLA B 2708HLA B 2709HLA B 2710HLA B 2711 HLA B 2723 15 医药交流PPT LociConsideredtobeMatched A C B DR DQ DP 4Mbp Father s Mother s HLA 无血源相关10 10同胞兄妹单倍型全相合 半相合父母亲半相合 16 医药交流PPT 17 脐血干细胞移植 外周血干细胞移植 骨髓干细胞移植 17 医药交流PPT 18 医药交流PPT 常见HLA与疾病关联疾病HLA抗原相对风险 强直性脊椎炎B2789 8Behcet综合征B5110 15多发性硬化症DR24 8乳糜泻DR310 8Grave s病DR33 7系统性红斑狼疮DR35 8类风关DR44 2胰岛素依赖型糖尿病DR3 DR425 0重症肌无力DR32 5 19 医药交流PPT 小结 HLA的三个特性使其成为热点 决定组织相容性高度多态性与疾病关联 20 医药交流PPT TableofContents 21 医药交流PPT HLA基因分型 低分辨 SSP 22 医药交流PPT rSSOLuminexbeadforclassI classII 中等分辨HLA分型 23 医药交流PPT 24 Nextgenerationsequencing 高分辨高通量HLA分型 24 医药交流PPT IlluminaSequencingbySynthesis SBS chemistry MiSeq 25 医药交流PPT PacificBiosciences Single moleculereal timesequencing 26 医药交流PPT 27 Sequencingbasedtyping SBT 高等分辨HLA分型 27 医药交流PPT Sanger测序原理 28 医药交流PPT Sanger测序原理 A T A G C T A G T G A A C G T C A G T 3 5 T A T C G A 5 3 A C G T A C G dNTP ddNTP Dyes A T A G C T A G T G A A C G T C A G T 3 5 T A T C G C A 5 3 T A T A G C T A G T G A A C G T C A G T 3 5 T A T C G C A 5 3 T T G A T A G C T A G T G A A C G T C A G T 3 5 T A T C G C A 5 3 T G C T G A A C A C G T A C G T 29 医药交流PPT Sanger测序原理 A T A G C T A G T G A A C G T C A G T 3 5 T A T C G A 5 3 A T A G C T A G T G A A C G T C A G T 3 5 T A T C G C A 5 3 T A T A G C T A G T G A A C G T C A G T 3 5 T A T C G C A 5 3 T G A T A G C T A G T G A A C G T C A G T 3 5 T A T C G C A 5 3 T G C T G A A C 30 医药交流PPT HLA分型模板的扩增 LongPCR each HLA A B C DR DQ DP MICA 2 Amplicons PCR exon loci 31 医药交流PPT LongPCRtoamplifythetargetgene www pnas org cgi doi 10 1073 pnas 1206614109 32 医药交流PPT AssemblyandAlignment 33 医药交流PPT Problemsinsequenceassembly 34 医药交流PPT Amplicons HLACoverage HLA A HLA B HLA C HLA DQB1 HLA DPB1 HLA DQA1 HLA DRB1 HLA DRB3 HLA DRB4 HLA DRB5 HLA DPA1 4 1kb 2 6kb 4 2kb 10 3kb 9 7kb 7 3kb 7 1kb 4 1kb 35 医药交流PPT TableofContents 36 医药交流PPT 37 医药交流PPT AS的病因 基因有关 HLA B27的转基因大鼠成功地培育出强直性脊柱炎的动物模型 目前已发现包括B27在内的3种基因与此病相关 并且有明显家族发病倾向 免疫有关 MHC T Cells感染有关 相关学说认为 来自尿道 前列腺 精囊的抗原经Batson循环到达骶髂关节 脊柱和眼睛等部位而发生相关病变 解释了男性好发的原因 38 医药交流PPT 39 医药交流PPT AS的经典检查 体征 骶髂关节炎检查 4 字试验 骶髂关节压迫试验 髂棘推压试验 骨盆挤压试验附着点炎检查 坐骨结节 肋软骨 肋胸关节 耻骨联合等压痛脊柱和胸廓检查 Schober试验 指地距 枕墙距 胸廓活动度等 40 医药交流PPT 骶髂关节 AS的经典检查 41 医药交流PPT B27测序的AS检查 42 医药交流PPT HLA B27与AS 43 医药交流PPT 患病率 0 3 20 30岁 男女比例10 1 有家族倾向 主要侵犯 中轴关节 骶髂关节 脊柱骨突 脊柱旁软组织 可伴发外周关节及关节外表现 严重者发生脊柱畸形和关节强直B27检测可作为有相关症状或高危人群AS早期的筛选方法 AS不是RA的一种特殊类型 44 医药交流PPT HLA基因座位的等位基因和真正的疾病易感基因处于紧密连锁不平衡 而HLA基因本身并不是引起疾病的真正基因 仅仅是遗传标志 连锁不平衡学说分子模拟学说关节源性肽假说其他 T细胞受体库假说超抗原假说B27修饰因子假说Cys67模型 B27抗原与某些G 菌之间存在类似的分子结构 能发生分子模拟或交叉反应 机体免疫系统把B27当作病原体抗原产生免疫应答 对机体产生免疫损害 认为关节源性肽只存在于关节组织中 特异性地由HLA B27提呈 正常情况下递呈水平低 反应T细胞处于耐受状态 当某些具有同源结构蛋白的病毒或细菌感染时 则可致敏耐受的T细胞 从而识别以低水平递呈的关节源性肽 引起自身免疫反应而损伤组织 45 医药交流PPT 长沙能润医学公司的优势 长沙能润医学成立于2010年 专注于 基因资源与基因检测 肿瘤基因研究与转化 免疫细胞治疗和存储 为医疗机构 制药与健康体检公司提供特色精准医学解决方案 集团旗下拥有以下业务版块 基因检测 细胞治疗 生物培训 生物双创项目投资 精准医疗科研 集团还参股投资了免疫诊断试剂国家工程实验室 国家基因检测技术示范中心 智慧医院工程建设公司燕通生物 海南乐城合家精准医疗医院等机构 与中科院 中南大学湘雅医学院 湖南师大医学院及斯坦福 犹他 华盛顿 UAB 耶鲁等大学教授合作共建实验室 在未来 集团将以 基因科技服务健康 为宗旨 以