急性白血病免疫分型课件

急性白血病免疫分型 1 医药交流课件 简介 白血病免疫分型是利用单克隆抗体 McAb 对骨髓或外周血中的白血病细胞进行免疫标记 检测其细胞膜及细胞浆抗原 分析其表型 以了解被测白血病细胞所属细胞系列及其分化程度 从而诊断白血病的类型 2 原理 造血细胞分化抗原 造血细胞分化过程中由细胞核内染色体上的基因编码的镶嵌蛋白 存在于细胞表面和 或 细胞浆内 随着分化成熟过程不断发生改变 3 原理 造血细胞分化抗原出现 增多 减少或消失与造血细胞所属系列和分化程度密切相关 因而可作为鉴别和区分造血细胞的标记 4 原理 急性白血病细胞来自造血干 祖细胞的恶性克隆性增生 既保持造血细胞的部分性质 又有其独特的生物学和免疫学特性 1 急性白血病主要表现在骨髓或外周血中原始幼稚细胞显著增多 正常细胞成分受抑制 因此免疫分型表现在带有某种抗原标志的细胞比例异常增多或减少 例如T ALL时的CD7 细胞远远超过正常人的30 而CD13 CD33 细胞的比例降低 并可能同时伴有CD34 TdT 细胞的异常增多 5 2 错位表达 即同一细胞出现异系列抗原混合表达 如AML细胞出现CD7 CD10抗原 ALL细胞出现CD33 CD14等 3 抗原非同步化表达 如CD34与分化成熟较晚期的抗原不应该同步表达 但白血病细胞有时会出现CD34 CD56 CD34 CD20等同时表达的异常现象 4 抗原丢失 如CD13 CD33是髓系最常见抗原 但少数AML却不表达或仅表达其中一项 原理 6 如何进行免疫分型 选择良好的设门方法 FSC SSC设门法 CD45 SSC设门法 目的 排除正常细胞的干扰 将不正常的细胞群孤立出来便于重点分析 7 CD45是所有白细胞的抗原 其表达量与细胞分化程度具有高度相关性 即细胞分化程度高的细胞 CD45表达量高 分化程度低的细胞 CD45表达量低 CD45表达量在成熟淋巴细胞最高 单核细胞 粒细胞 早期造血细胞依次减弱 红细胞 中 晚幼红细胞 成熟红细胞 不表达CD45 侧向角光散射 SSC 反映细胞的颗粒性 成熟粒细胞SSC最高 依次为单核细胞 淋巴细胞 早期造血细胞 红细胞 8 通过CD45 SSC散点图即可获得初步印象 若同时加上一个或二个以上其它单抗进行二 三色甚至四色分析 则很容易识别非正常细胞群的表型 通常在CD45 SSC散点图上 白血病细胞群体多出现于由淋巴细胞 单核细胞 粒细胞和红细胞围成的称为 白血病窗 的区域内 9 根据骨髓细胞CD45 SSC图中分布情况设门圈定各类细胞 R1门为成熟淋巴细胞R2门为正常单核细胞位置R3门正常粒细胞位置R4门为幼稚淋巴细胞出现位置R5门为有核红细胞或细胞碎片位置R6门为幼稚髓细胞出现位置白血病细胞通常会在R4R6两门位置处出现 10 正常骨髓经CD45 SSC射门的散点图 CD45 SSC图中可见CD45强阳性SSC低信号的细胞群为淋巴细胞褐色细胞群体中等强度的CD45表达SSC信号最强的细胞群体为粒细胞蓝色及红色细胞群体CD45表达与SSC信号介于淋巴细胞与粒细胞之间的是单核细胞群体绿色细胞群体CD45阴性SSC信号最低的有核红细胞和细胞碎片 11 单克隆抗体的选择 白血病免疫分型时尽量选用系列特异性强的单抗作为一线单抗 目前较为公认系列特异性单抗有T系的CD3 CD2 B系的CD79a CD22 CD19和髓系的MPO CD117 CD13等 一般说来胞浆比胞膜的标志特异性强 用这些特异性强的标志作为初筛 基本可确定T系 B系或髓系 随后即以二线单抗 CD14 CD36 CD41 CD34 CyIg SmIg等 做进一步的免疫分型 以确定最后亚型 12 各系列造血细胞表达的主要相关抗原 T淋巴细胞系 CD1 CD2 CD3 CD4 CD5 CD7 CD8 B淋巴细胞系 CD10 CD19 CD20 CD22 CD23 CD24 CD79 粒 单核细胞系 CD11b c CD13 CD14 CD15 CD33 CD64 CD65w CD117及MPO 巨核细胞系 CD41 CD42 CD61 CD62 CD36 红细胞系 CD71 CD36 血型糖蛋白A Glycophorin 其它 造血干祖细胞共同抗原CD34 CD38及末端脱氧核糖核苷酸转换酶 TdT 人类主要组织相容性抗原HLA DR 白细胞共同抗原CD45等 13 CD45 SSC设门中白血病细胞群表面标志阳性判断标准 阳性率 阴性对照的20 对于MPO只需要 3 即可 14 ANLL的免疫分型 急性非淋巴细胞性白血病 ANLL 的分型主要依靠形态学 包括细胞化学染色 来区分 尤其是FAB分型中的M1 M2与M4 M5之间尚无明确的免疫标志划分 但对一些形态学难于分类或特殊类型的ANLL 如M0 M6 M7 细胞免疫学分析对临床确诊ANLL可提供重要信息 15 ANLL的免疫分型 CD34是造血干细胞的特征性标记 与AML的分型有一定关系 CD34 的AML与低分化的FAB亚型M1及原始细胞比较高的M2a有明显的相关性 而在分化程度较成熟的M3 M2b及M5b等白血病细胞则缺乏或极少有CD34抗原的表达 且随着分化程度渐趋成熟 CD34的表达量逐渐减少 16 ANLL的免疫分型特点 FAB M1 M2的免疫表型特点 CDl3 CD15 CD33 HLA DR CD34 其中CD34在M1中的表达强于M2 而CD15在M2的表达较强 17 ANLL的免疫分型特点 FAB M3典型的免疫表型是CDl3 CD15 CD33 CD9 CD38 CD34 HLA DR 部分病人可能出现CD2 CD56 18 ANLL的免疫分型特点 FAB M4 M5的免疫表型特点 HLA DR CD15 CD14 CD64 CD33 CD13 CD34 CD11b c 19 ANLL的免疫分型特点 FAB M6免疫表型特征为HLA DR CD36 血型糖蛋白A或B Gly A B 是阳性 CD34 髓系抗原也可以表达 20 ANLL的免疫分型特点 FAB M7特征性的抗原表达是CD41 CD42 CD61 部分也可表达CD36 21 ALL的免疫分型 从70年代开始进行免疫学分型 22 1986年前五分法 五分法 Common型未分化型T细胞型前B细胞型B细胞型表型DR CD9 CD10 复杂CD2 CD5 CyIg SmIg 发生率 国外60 70 30 15 25 2 3 2 3 国内50 30 20 0 5 1 5 预后 儿童最好次之再次最次最次成人次之再次最好最次最次 23 1986年后两大类九分法 ALL免疫分型 两类九型法 非T亚型HLA DRCD9CD10CD20 链SmIg发生率 I 5II 15III 30IV 50V 5VI 2 24 1986年后两大类九分法 T亚型CD7CD5CD2CD3CD4CD8CD1a发生率I 55II 25 90 90 25III 20 25 1994年四型21类法 4型21类法 这是1994年法国国际白血病欧洲协作组在过去白血病分型的基础上 对ALL免疫学分型提出的新方法 首先 根据每个CD抗原特异性强弱 确定其相应的积分 并在此基础上将ALL分为4型 裸型 此型中每个系列 T淋巴细胞系 B淋巴细胞系 髓细胞系 积分均 2 纯型 此型要求T B 髓细胞某一系列积分 2 而其它细胞系列积分为0 变异型 此型要求某一系列积分 2 其它系列积分 2 多表型 此型要求2个或2个以上系列积分 2 26 ALL的免疫学分类 EGIL 1994年 1 B ALL早期前B ALL earlyPre B ALL 普通型B ALL common B ALL 前B ALL Pre B ALL 成熟B ALL mature B ALL 2 T