最新常用抗凝剂的配制和使用.doc

精品文档常用抗凝剂的配制及用法在医学实验中常需动物的全身抗凝，采出的全血或血浆有的也需加入适当的抗凝剂抗凝。对抗凝剂的要求是：用量少、溶解度大、不带进干扰实验的杂质。一、肝素 （1）肝素抗凝作用原理 肝素的抗凝作用很强,作死亡复苏等实验时,常用它作动物全身抗凝剂，肝素的抗凝作用主要是抑制凝血致活酶的活力，阻止血小板凝聚以及抑制抗凝血酶等作用，从而使血液不发生凝固。注意事项：做全血DNA提取的时候抗凝剂不能采用肝素！因为肝素是聚合酶链式反应的抑制剂！（2）配制和用量纯的肝素10mg能抗凝65125 ml血液(按lmg等于125U，1020U能抗1 ml血液计)。但由于肝素制剂的纯度高低以及其保存时间长短不等，因而其抗凝效果也不相同。一般可配成1肝素生理盐溶液，用时取01毫升于试管内，100烘干，每管能抗凝510ml血液。也可将抽血注射器用配好肝素湿润一下管壁，直接抽血至注射器内而使血液不凝。在动物实验作全身抗凝时，一般剂量为：大白鼠2530mg/200300g体质量，兔10mgkg体质量，狗510mgkg体质量。肝素可改变蛋白质等电点，因此当用盐析法分离蛋白质作蛋白质各部分的测定时，不可采用肝素。市售的肝素钠溶液每毫升含肝素12500U，相当于100mg。二、草酸盐合剂 （1）原理草酸胺能使血细胞略为膨大，而草酸钾能使血细胞微缩小，因此草酸铵与草酸钾按3：2比例配置，可使血细胞体积保持不变；加福尔马林则能防止微生物在血中繁殖。此抗凝剂最适于作红细胞比积测定。（2）配制方法及用量草酸铵12g、草酸钾08g、福尔马林10ml、蒸馏水加至100ml每毫升血加草酸盐合剂01ml(即相当草酸铵12mg，草酸钾08mg)。根据取血量将计算好的草酸盐剂量加入玻璃容器内烤干备用。如取05ml于试管，烘干后每管可使5ml血不凝固。（3）注意事项草酸的作用在于能够沉淀血凝过程中所必需的钙离子，而达到抗凝目的。用时注意加的量应适中，不能过多，以免妨碍去蛋白质血滤液的制取。不适用于血液内钙或钾的测定，也不能用于血液非蛋白氮测定。三、枸櫞酸钠常配成35%水溶液。也可直接加粉剂，每毫升血加35mg，即可达到抗凝目的。枸櫞酸钠可使钙失去活性，防止凝血。但其抗凝作用较差，碱性较强，不宜作化学检验之用。仅可用于红细胞沉降速度测定。急性血压测定实验所用枸櫞酸钠为56溶液。四、草酸钾 （一）原理和注意事项 草酸钾为最常用的抗凝剂。其与血液混合后可迅速与血液中的钙离子结合，形成不溶解的草酸钙，使血液不凝固。常用于非蛋白氮测定，但不适用于测定钾和钙。草酸盐能抑制乳酸脱氢酶、酸性磷酸酶和淀粉酶的活性，故应注意。（二）配制及使用方法取草酸钾10g，加蒸馏水少许使溶解，再加蒸馏水至100ml。配制成10水溶液，如每管加0.1ml则可使510ml血不凝。一般如作微量检验，用血量较少，可配制成2溶液，如每管加01ml可使12ml血液不凝。五、乙二胺四乙酸二钠盐（EDTA）EDTA对血液中钙离子有很大的亲和力，能与钙离子络合而使血液抗凝。每0.8mg可抗凝1ml血液。除不能用于血浆中钙、钠及含氮物质之测定外，适用于多种抗凝。六、（酸性）柠檬酸葡萄糖溶液B（ACD）（用于新鲜抽提或者是冻存的血样品，实验室常用）柠檬酸钠：1.32%（M/V）柠檬酸：0.48%（M/V）葡萄糖：1.47%（M/V）ACD抗凝剂为：柠檬酸0.48g、柠檬酸钠1.32g、葡萄糖1.47g，加水至100ml，灭菌后备用一般20ML新鲜血液中加入3.5ML ACD抗凝剂。比例依次类推！血液可以在0度条件下保存数天，或者是零下70度条件下无限期保存！注意事项：做全血DNA提取的时候抗凝剂不能采用肝素！因为肝素是聚合酶链式反应的抑制剂！从全血中制备基因组DNA，ACD做为抗凝剂要优于EDTA，因为他更加能保存高分子质量的DNA，然而，血样常常被收集于用定量EDTA作为抗凝剂的小管中。在大多数美国的医院中，收集血样的小管均用颜色标明是否含有抗凝剂，紫色顶管盖的小管一般含有抗凝剂，通常是EDTA的干粉。黄色顶盖的小管不含抗凝剂。在分子克隆实验中，前者一般用于收集血样用于制备基因组的DNA，后者用于收集血样作为用EB病毒的永生化淋巴细胞的来源。这些永生化的细胞可以作为可更新的来源来制备大量的DNA以备后用，如进行遗传学的研究等等！阿氏液配方： 葡萄糖 2.05克 柠檬酸钠 0.8克 柠檬酸 0.055克 氯化钠 0.42克 加蒸馏水至100毫升，调PH值至6.1，115度，10分钟灭菌。4度保存。PBS 1L配方pH7.4：磷酸二氢钾(KH2PO4)：0.28g， 磷酸氢