水质粪大肠菌群的测定多管发酵法

中 华 人 民 共 和 国 国 家 环 境 保 护 标 准HJ -201部 分 代 替 HJ/T347-2007水 质 粪 大 肠 菌 群 的 测 定 多 管 发 酵 法Water quality-Determination of fecal coliform-Manifold zymotechnics（ 征 求 意 见 稿 ）201 - - 发 布 201 - - 实 施发 布环 境 保 护 部附 件 2i目 次前 言 .i1 适 用 范 围 .12 术 语 和 定 义 .13 方 法 原 理 .14 干 扰 和 消 除 .15 试 剂 和 材 料 .16 仪 器 和 设 备 .27 样 品 .38 分 析 步 骤 .39 结 果 计 算 与 表 示 .410 精 密 度 和 准 确 度 .511 质 量 保 证 和 质 量 控 制 .512 废 物 处 理 .6附 录 A （ 资 料 性 附 录 ） 最 大 可 能 数 （ MPN） 表 .7i前 言为 贯 彻 中 华 人 民 共 和 国 环 境 保 护 法 和 中 华 人 民 共 和 国 水 污 染 防 治 法 ， 保 护 环 境 ，保 障 人 体 健 康 ， 规 范 水 中 粪 大 肠 菌 群 的 测 定 方 法 ， 制 定 本 标 准 。本 标 准 规 定 了 测 定 地 表 水 、 地 下 水 和 废 水 中 粪 大 肠 菌 群 的 多 管 发 酵 法 。本 标 准 的 附 录 A 为 资 料 性 附 录 。本 标 准 是 对 水 质 粪 大 肠 菌 群 的 测 定 多 管 发 酵 法 和 滤 膜 法 （ 试 行 ） （ HJ/T347-2007）多 管 发 酵 法 部 分 的 修 订 ， 与 原 标 准 相 比 主 要 修 改 内 容 如 下 ：在 干 扰 与 消 除 、 水 样 、 分 析 步 骤 、 结 果 计 算 与 表 示 、 精 密 度 和 准 确 度 、 质 量 控 制 和 质 量保 证 等 方 面 做 了 具 体 的 要 求 。本 标 准 首 次 发 布 于 2007 年 ， 原 标 准 起 草 单 位 为 中 国 环 境 监 测 总 站 等 单 位 。 本 次 为 第 一 次修 订 。自 本 标 准 实 施 之 日 起 ， 水 质 粪 大 肠 菌 群 的 测 定 多 管 发 酵 法 和 滤 膜 法 （ 试 行 ） （ HJ/T347-2007） 废 止 。本 标 准 由 环 境 保 护 部 环 境 监 测 司 、 科 技 标 准 司 组 织 制 修 订 。本 标 准 主 要 起 草 单 位 ： 辽 宁 省 环 境 监 测 实 验 中 心 。本 标 准 的 验 证 单 位 ： 大 连 市 环 境 监 测 中 心 、 丹 东 市 环 境 监 测 中 心 站 、 锦 州 市 环 境 监 测 中心 站 、 辽 阳 市 环 境 监 测 站 、 沈 阳 市 疾 病 预 防 控 制 中 心 、 辽 宁 北 方 环 境 检 测 技 术 有 限 公 司 。本 标 准 环 境 保 护 部 20 年 月 日 批 准 。本 标 准 自 20 年 月 日 起 实 施 。本 标 准 由 环 境 保 护 部 解 释 。1水 质 粪 大 肠 菌 群 的 测 定 多 管 发 酵 法1 适 用 范 围本 标 准 规 定 了 测 定 水 中 粪 大 肠 菌 群 的 多 管 发 酵 法 。本 标 准 适 用 于 地 表 水 、 地 下 水 和 废 水 中 粪 大 肠 菌 群 的 测 定 。本 方 法 的 检 出 限 ： 12 管 法 为 3MPN/L， 适 用 于 清 洁 的 水 样 ； 15 管 法 为 20MPN/L， 适 用于 受 到 不 同 程 度 污 染 的 水 样 。2 术 语 和 定 义下 列 术 语 和 定 义 适 用 于 本 标 准 。2.1 粪 大 肠 菌 群 fecal coliforms又 称 耐 热 大 肠 菌 群 。 44.5 培 养 24h， 能 发 酵 乳 糖 产 酸 产 气 的 需 氧 及 兼 性 厌 氧 的 革 兰 氏 阴性 无 芽 孢 杆 菌 ， 是 总 大 肠 菌 群 的 一 部 分 。2.2 最 大 可 能 数 most probable number,MPN微 生 物 检 验 常 用 发 酵 法 ， 又 称 稀 释 法 ， 是 一 种 利 用 统 计 学 原 理 定 量 检 测 微 生 物 浓 度 的 方法 。 它 根 据 不 同 稀 释 度 一 定 体 积 水 样 中 被 检 微 生 物 存 在 与 否 的 频 率 ， 查 表 求 得 水 样 中 微 生 物的 浓 度 ， 与 直 接 报 告 菌 落 数 的 平 板 计 数 法 不 同 ， 它 最 终 报 告 的 是 水 样 中 最 有 可 能 存 在 的 目 标微 生 物 浓 度 ， 这 个 以 最 大 可 能 存 在 的 浓 度 ， 就 被 称 为 最 大 可 能 数 （ mostprobablenumber， 缩写 为 MPN） 。3 方 法 原 理将 一 定 量 的 水 样 ， 以 无 菌 操 作 方 式 接 种 到 含 有 乳 糖 培 养 基 的 试 管 中 ， 在 特 定 的 温 度（ 44.5 ） 培 养 24h， 当 细 菌 生 长 繁 殖 时 ， 产 酸 使 培 养 液 pH 值 降 低 ， 溴 甲 酚 紫 由 紫 色 变 为 黄色 ， 指 示 产 酸 ； 脱 氢 酶 分 解 底 物 产 生 气 体 ， 利 用 倒 管 指 示 产 气 。 通 过 指 示 剂 的 颜 色 变 化 和 倒管 中 有 无 气 体 判 断 是 否 产 酸 产 气 ， 从 而 确 定 是 否 存 在 粪 大 肠 菌 群 ， 并 通 过 查 MPN 表 ， 以 MPN表 示 粪 大 肠 菌 群 浓 度 值 。4 干 扰 和 消 除氯 具 有 氧 化 性 ， 较 高 浓 度 的 重 金 属 离 子 具 有 毒 性 ， 它 们 都 能 破 坏 微 生 物 细 胞 内 酶 的 活 性 ，最 终 导 致 细 胞 死 亡 。 可 分 别 加 入 硫 代 硫 酸 钠 和 乙 二 胺 四 乙 酸 二 钠 排 除 氯 或 重 金 属 的 干 扰 。5 试 剂 和 材 料除 非 另 有 说 明 ， 分 析 时 均 使 用 符 合 国 家 标 准 的 分 析 纯 化 学 试 剂 。25.1 乳 糖 蛋 白 胨 培 养 液成 分 ：蛋 白 胨 10g牛 肉 浸 膏 3g乳 糖 5g氯 化 钠 5g1.6%溴 甲 酚 紫 乙 醇 溶 液 1ml制 法 ： 将 蛋 白 胨 、 牛 肉 浸 膏 、 乳 糖 、 氯 化 钠 加 热 溶 解 于 1000ml 蒸 馏 水 或 去 离 子 水 中 ， 调节 pH 值 到 7.2 7.4， 再 加 入 1.6%溴 甲 酚 紫 乙 醇 溶 液 1ml， 充 分 混 匀 ， 分 装 于 含 有 倒 置 小 玻 璃管 的 试 管 中 ， 115 高 压 蒸 汽 灭 菌 20min， 储 存 于 冷 暗 处 备 用 。乳 糖 蛋 白 胨 培 养 液 可 选 用 市 售 成 品 培 养 基 。5.2 三 倍 乳 糖 蛋 白 胨 培 养 液 ： 按 上 述 配 方 比 例 三 倍 （ 除 蒸 馏 水 或 去 离 子 水 外 ） ， 配 成 三 倍 乳糖 蛋 白 胨 培 养 液 ， 制 法 同 上 。5.3 EC 培 养 液 成 分 ：胰 胨 20g乳 糖 5g胆 盐 三 号 1.5g磷 酸 氢 二 钾 （ K2HPO4） 4g磷 酸 二 氢 钾 （ KH2PO4） 1.5g氯 化 钠 5g制 法 ： 将 上 述 成 分 或 含 有 上 述 成 分 的 市 售 成 品 加 热 溶 解 于 1000ml 蒸 馏 水 或 去 离 子 水 中 ，然 后 分 装 于 有 玻 璃 倒 管 的 试 管 中 ， 115 高 压 蒸 汽 灭 菌 20min， 灭 菌 后 pH 值 应 为 6.9。5.4 无 菌 水 ： 新 制 备 的 蒸 馏 水 或 去 离 子 水 经 121 高 压 蒸 汽 灭 菌 20min， 备 用 。5.5 硫 代 硫 酸 钠 （ Na2S2O35H2O） 。5.6 乙 二 胺 四 乙 酸 二 钠 （ C10H14N2O8Na22H2O） 。5.7 硫 代 硫 酸 钠 溶 液 ： （ Na2S2O35H2O） =0.10g/ml称 取 硫 代 硫 酸 钠 10g， 溶 于 适 量 蒸 馏 水 或 去 离 子 水 ， 定 容 至 100ml， 现 配 。5.8 乙 二 胺 四 乙 酸 二 钠 溶 液 ： （ C10H14N2O8Na22H2O） =0.15g/ml称 取 乙 二 胺 四 乙 酸 二 钠 15g， 溶 于 适 量 蒸 馏 水 或 去 离 子 水 中 ， 定 容 至 100ml， 此 溶 液 保质 期 为 30d。6 仪 器 和 设 备6.1 采 样 瓶 ： 500ml 带 螺 旋 帽 或 磨 口 塞 的 广 口 玻 璃 瓶 。6.2 高 压 蒸 汽 灭 菌 器 ： 121 、 101.3kpa。6.3 隔 水 式 恒 温 培 养 箱 ： 温 度 偏 差 0.5 。6.4 pH 计 ： 准 确 到 0.1pH 单 位 。6.5 接 种 环 ： 直 径 3mm。6.6 一 般 实 验 室 常 用 仪 器 和 设 备 。3注 ： 玻 璃 器 皿 及 采 样 器 具 试 验 前 要 按 无 菌 操 作 要 求 包 扎 ， 121 高 压 蒸 汽 灭 菌 20min 备 用 。7 样 品7.1 样 品 采 集与 其 他 项 目 一 同 采 样 时 ， 先 单 独 采 集 微 生 物 水 样 。 采 样 瓶 不 得 用 水 样 冲 洗 ， 按 无 菌 操 作要 求 采 集 水 样 于 灭 菌 的 采 样 瓶 中 。 清 洁 水 的 采 样 量 不 低 于 400ml， 其 余 水 体 采 样 量 不 低 于 100ml。 瓶 内 须 留 下 足 够 的 空 间 ， 用 以 摇 匀 水 样 。采 集 江 、 河 、 湖 、 库 等 地 表 水 水 样 时 ， 可 握 住 瓶 子 下 部 直 接 将 带 塞 采 样 瓶 插 入 水 中 ， 距水 面 10 15cm 处 ， 瓶 口 朝 水 流 方 向 ， 拔 瓶 塞 ， 使 水 样 灌 入 瓶 内 然 后 盖 上 瓶 塞 ， 将 采 样 瓶 从 水中 取 出 。 如 果 没 有 水 流 ， 可 握 住 瓶 子 水 平 前 推 。 水 样 采 好 后 ， 迅 速 扎 上 无 菌 包 装 纸 。从 水 龙 头 采 集 样 品 时 ， 不 要 选 用 漏 水 的 龙 头 ， 采 水 前 可 先 将 水 龙 头 打 开 至 最 大 ， 放 水 35min， 然 后 将 水 龙 头 关 闭 ， 用 火 焰 灼 烧 约 3min 灭 菌 ， 开 足 龙 头 ， 再 放 水 1min， 以 充 分 除 去水 管 中 的 滞 留 杂 质 。 采 样 时 控 制 水 流 速 度 ， 小 心 接 入 瓶 内 。采 集 地 表 水 、 废 水 样 品 及 一 定 深 度 的 水 样 时 ， 可 使 用 灭 菌 过 的 专 用 采 样 装 置 采 样 。在 同 一 采 样 点 进 行 分 层 采 样 时 ， 应 自 上 而 下 进 行 ， 以 免 不 同 层 次 的 搅 扰 。如 果 采 集 的 是 含 有 余 氯 或 经 过 加 氯 处 理 的 水 样 ， 需 在 采 样 瓶 灭 菌 前 加 入 硫 代 硫 酸 钠 溶 液（ 5.7） ， 以 除 去 余 氯 对 细 菌 的 抑 制 作 用 （ 每 125ml 容 积 加 入 0.1ml 的 硫 代 硫 酸 钠 溶 液 ） ； 如 果采 集 的 是 重 金 属 离 子 含 量 较 高 的 水 样 ， 则 在 采 样 瓶 灭 菌 前 加 入 乙 二 胺 四 乙 酸 二 钠 溶 液 （ 5.8） ，以 消 除 干 扰 （ 每 125ml 容 积 加 入 0.3ml 的 乙 二 胺 四 乙 酸 二 钠 溶 液 ） 。注 ： 10mg 硫 代 硫 酸 钠 可 保 证 去 除 水 样 中 1.5mg 余 氯 ， 硫 代 硫 酸 钠 用 量 可 根 据 水 样 实 际 余 氯 量 调 整 。7.2 样 品 保 存采 样 后 2h 内 检 测 ， 否 则 ， 需 10 以 下 冷 藏 并 不 得 超 过 6h。 实 验 室 接 样 后 ， 不 能 立 即 开展 检 测 的 ， 应 将 样 品 放 入 0 4 冰 箱 并 2h 内 测 定 。8 分 析 步 骤8.1 样 品 稀 释当 接 种 水 样 量 为 10ml 或 1ml 时 ， 充 分 混 匀 后 备 用 。当 接 种 水 样 量 小 于 1ml 时 ， 水 样 应 制 成 稀 释 样 品 后 使 用 。 接 种 量 为 0.1ml、 0.01ml 时 ，分 别 制 成 1:10 稀 释 样 品 、 1:100 稀 释 样 品 。 其 他 接 种 量 的 稀 释 样 品 依 次 类 推 。1:10 稀 释 样 品 的 制 作 方 法 为 ： 吸 取 10ml 水 样 ， 注 入 盛 有 90ml 无 菌 水 的 试 管 中 ， 混 匀 ，制 成 1:10 稀 释 样 品 。 其 他 稀 释 度 的 稀 释 水 样 同 法 制 作 。8.2 接 种将 水 样 充 分 混 匀 后 ， 对 于 清 洁 的 水 样 ， 在 2 支 装 有 已 灭 菌 的 50ml 三 倍 乳 糖 蛋 白 胨 培 养 液的 大 试 管 中 （ 内 有 倒 管 ） ， 以 无 菌 操 作 各 加 入 水 样 100ml， 在 10 支 装 有 已 灭 菌 的 5ml 三 倍 乳糖 蛋 白 胨 培 养 液 的 试 管 中 （ 内 有 倒 管 ） ， 以 无 菌 操 作 各 加 入 水 样 10ml， 共 计 12 管 两 个 稀 释 度 。对 于 较 清 洁 水 样 ， 接 种 量 为 10ml、 1ml、 0.1ml； 对 于 受 到 污 染 的 水 样 ， 接 种 量 为 1ml、 0.1ml、40.01ml 或 0.1ml、 0.01ml、 0.001ml 等 ， 共 计 15 管 三 个 稀 释 度 ， 水 样 接 种 量 参 考 表 见 表 1。表 1 水 样 接 种 量 参 考 表水 样 种 类 接 种 量 （ ml）10 1 0.1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6湖 水 、 水 源 水 河 水 生 活 污 水 医 疗 机 构 排 放 污 水 （ 处 理 后 ） 畜 禽 养 殖 业 等 排 放 废 水 8.3 初 发 酵 试 验将 已 充 分 混 匀 的 水 样 以 无 菌 操 作 分 别 接 种 到 盛 有 乳 糖 蛋 白 胨 培 养 液 的 试 管 中 ， 在37 0.5 下 培 养 24 2h。产 酸 和 产 气 的 试 管 表 明 试 验 阳 性 。 如 在 倒 管 内 产 气 不 明 显 ， 可 轻 拍 试 管 ， 有 小 气 泡 升 起的 为 阳 性 。8.4 复 发 酵 试 验轻 微 振 荡 在 初 发 酵 试 验 中 显 示 为 试 验 阳 性 的 试 管 ， 用 接 种 环 将 培 养 物 转 接 到 EC 培 养 液中 。 在 （ 44.5 0.5） 下 培 养 24 2h。 接 种 后 所 有 试 管 必 须 在 30min 内 放 进 培 养 箱 中 。培 养 后 立 即 观 察 ， 倒 管 中 产 气 证 实 为 粪 大 肠 菌 群 阳 性 。9 结 果 计 算 与 表 示9.1 结 果 计 算根 据 不 同 接 种 量 的 阳 性 发 酵 管 数 量 ， 查 表 A.1 或 表 A.2（ 参 见 附 录 A） 。 接 种 12 份 水 样 时 ，查 表 A.1 可 得 每 升 粪 大 肠 菌 群 MPN 值 。 接 种 15 份 水 样 时 ， 查 表 A.2 得 到 MPN 值 ， 再 经 公 式（ 1） 换 算 成 每 升 水 样 中 粪 大 肠 菌 群 MPN 值 。C=10 M f （ 1）式 中 ： C 每 升 水 样 中 粪 大 肠 菌 群 MPN 值 ， MPN/L；10 将 MPN 值 的 单 位 MPN/100ml 转 换 为 MPN/L；M 查 表 得 到 的 MPN 值 ， MPN/100ml；f 水 样 稀 释 倍 数 。9.2 结 果 表 示测 定 结 果 保 留 两 位 有 效 数 字 ， 大 于 等 于 100 时 以 科 学 计 数 法 表 示 ， 结 果 的 单 位 为 MPN/L。平 均 值 以 几 何 平 均 计 算 。510 精 密 度 和 准 确 度10.1 精 密 度6 个 实 验 室 对 低 浓 度 （ 约 50MPN/L） 、 中 浓 度 （ 约 5.0 104 MPN/L） 和 高 浓 度 （ 约 3.5 107MPN/L） 三 个 不 同 浓 度 粪 大 肠 菌 群 的 实 际 水 样 和 有 证 标 准 样 品 （ 浓 度 为 3670MPN/L， 可 接 受范 围 为 330 7710MPN/L） 进 行 了 测 定 ， 实 验 室 内 相 对 标 准 偏 差 范 围 分 别 为 2.3% 3.8%，2.0% 11%， 1.1% 5.4%和 5.1% 17%； 实 验 室 间 相 对 标 准 偏 差 分 别 为 3.4%， 11%， 1.6%和5.4%； 实 验 室 间 95%置 信 区 间 见 表 2。表 2 实 验 室 间 95%置 信 区 间低 浓 度 （ MPN/L） 中 浓 度 （ MPN/L） 高 浓 度 （ MPN/L） 有 证 标 准 样 品 （ MPN/L）均 值 95%置 信 区间 均 值 95%置 信 区间 均 值 95%置 信 区间 均 值 95%置 信 区间54 47 62 2.7 104 9.6 1037.9 104 2.8 107 2.2 1073.6 107 3725 2413575110.2 准 确 度6 家 实 验 室 对 粪 大 肠 菌 群 有 证 标 准 样 品 （ 浓 度 为 3670MPN/L， 可 接 受 范 围 为 370MPN/L7710 MPN/L） 进 行 测 定 ， 实 验 室 内 相 对 误 差 范 围 为 -6.2% 8.4%； 相 对 误 差 最 终 值 为-1.7% 11%。注 ： 微 生 物 检 测 数 据 为 偏 态 分 布 ， 其 测 定 结 果 全 部 经 以 10 为 底 对 数 转 换 后 进 行 计 算 。11 质 量 保 证 和 质 量 控 制11.1 培 养 基 检 验更 换 不 同 批 次 培 养 基 时 要 进 行 阳 性 和 阴 性 菌 株 检 验 ， 以 确 保 其 符 合 要 求 。11.2 培 养 基 保 存配 制 好 的 培 养 基 不 宜 保 存 过 久 ， 以 少 量 勤 配 为 宜 。 存 放 时 应 避 免 阳 光 直 射 ， 并 且 要 避 免杂 菌 侵 入 和 水 分 蒸 发 。 当 培 养 液 颜 色 变 化 ， 或 体 积 变 化 明 显 时 废 弃 不 用 。11.3 空 白 试 验每 次 试 验 都 要 用 无 菌 水 做 实 验 室 空 白 测 定 ， 培 养 后 的 试 管 中 不 得 有 任 何 颜 色 反 应 。 否 则 ，该 次 样 品 测 定 结 果 无 效 ， 应 查 明 原 因 后 重 新 测 定 。11.4 阳 性 及 阴 性 对 照粪 大 肠 菌 群 测 定 的 阳 性 菌 株 （ 如 大 肠 埃 希 氏 菌 Escherichiacoli） ， 阴 性 菌 株 （ 如 产 气 肠 杆菌 Enterobacteraerogenes） 。 将 标 准 菌 株 配 成 浓 度 为 300 3000 个 /ml 的 菌 悬 液 ， 分 别 取 相 应水 量 的 菌 悬 液 按 “ 8.2 接 种 ” 要 求 接 种 于 试 管 中 ， 然 后 按 “ 8.3 初 发 酵 试 验 ” 和 “ 8.4 复 发6酵 实 验 ” 要 求 培 养 ， 阳 性 菌 株 应 呈 现 阳 性 反 应 ， 阴 性 菌 株 应 呈 现 阴 性 反 应 。 否 则 ， 该 次 样 品测 定 结 果 无 效 ， 应 查 明 原 因 后 重 新 测 定 。12 废 物 处 理使 用 后 的 器 皿 及 废 弃 物 须 经 121 高 压 蒸 汽 灭 菌 20min 后 ， 器 皿 方 可 清 洗 ， 废 弃 物 作 为一 般 废 物 处 置 。7附 录 A（ 资 料 性 附 录 ）最 大 可 能 数 （ MPN） 表表 A.1 12管 法 最 大 可 能 数 （ MPN） 表10ml 水 量 的 阳 性 管 数 100ml 水 量 的 阳 性 瓶 数0 1 21L 水 样 中 粪 大 肠 菌 群 数 1L 水 样 中 粪 大 肠 菌 群 数 1L 水 样 中 粪 大 肠 菌 群 数0 3 4 111 3 8 182 7 13 273 11 18 384 14 24 525 18 30 706 22 36 927 27 43 1208 31 51 1619 36 60 23010 40 69 230注 ： 接 种 2 份 100ml 水 样 ， 10份 10ml 水 样 ， 总 量 300ml。表 A.2 15管 法 最 大 可 能 数 （ MPN） 表各 接 种 量 阳 性 份 数 MPN/100ml 95%置 信 限 各 接 种 量 阳 性 份 数 MPN/100ml 95%置 信 限10ml 1ml 0.1ml 下 限 上 限 10ml 1ml 0.1ml 下 限 上 限0 0 0 2 3 0 0 8 1 190 0 1 2 0.5 7 3 0 1 11 2 250 0 2 4 0.5 7 3 0 2 13 3 310 0 3 5 3 0 3 160 0 4 7 3 0 4 200 0 5 9 3 0 5 230 1 0 2 0.5 7 3 1 0 11 2 250 1 1 4 0.5 11 3 1 1 14 4 340 1 2 6 0.5 15 3 1 2 17 5 460 1 3 7 3 1 3 20 6 600 1 4 9 3 1 4 230 1 5 11 3 1 5 270 2 0 4 0.5 11 3 2 0 14 4 348续 表各 接 种 量 阳 性 份 数 MPN/100ml 95%置 信 限 各 接 种 量 阳 性 份 数 MPN/100ml 95%置 信 限10ml 1ml 0.1ml 下 限 上 限 10ml 1ml 0.1ml 下 限 上 限0 2 1 6 0.5 15 3 2 1 17 5 460 2 2 7 3 2 2 20 6 600 2 3 9 3 2 3 240 2 4 11 3 2 4 270 2 5 13 3 2 5 310 3 0 6 0.5 15 3 3 0 17 5 460 3 1 7 3 3 1 21 7 630 3 2 9 3 3 2 240 3 3 11 3 3 3 280 3 4 13 3 3 4 320 3 5 15 3 3 5 360 4 0 8 3 4 0 21 7 630 4 1 9 3 4 1 24 8 720 4 2 11 3 4 2 280 4 3 13 3 4 3 320 4 4 15 3 4 4 360 4 5 17 3 4 5 400 5 0 9 3 5 0 25 8 750 5 1 11 3 5 1 290 5 2 13 3 5 2 320 5 3 15 3 5 3 370 5 4 17 3 5 4 410 5 5 19 3 5 5 451 0 0 2 0.5 7 4 0 0 13 3 311 0 1 4 0.5 11 4 0 1 17 5 461 0 2 6 0.5 15 4 0 2 21 7 631 0 3 8 1 19 4 0 3 25 8 751 0 4 10 4 0 4 301 0 5 12 4 0 5 361 1 0 4 0.5 11 4 1 0 17 5 461 1 1 6 0.5 15 4 1 1 21 7 631 1 2 8 1 19 4 1 2 26 9 781 1 3 10 4 1 3 311 1 4 12 4 1 4 361 1 5 14 4 1 5 421 2 0 6 0.5 15 4 2 0 22 7 671 2 1 8 1 19 4 2 1 26 9 781 2 2 10 2 23 4 2 2 32 11 919续 表各 接 种 量 阳 性 份 数 MPN/100ml 95%置 信 限 各 接 种 量 阳 性 份 数 MPN/100ml 95%置 信 限10ml 1ml 0.1ml 下 限 上 限 10ml 1ml 0.1ml 下 限 上 限1 2 3 12 4 2 3 381 2 4 15 4 2 4 441 2 5 17 4 2 5 501 3 0 8 1 19 4 3 0 27 9 801 3 1 10 2 23 4 3 1 33 11 931 3 2 12 4 3 2 39 13 1101 3 3 15 4 3 3 451 3 4 17 4 3 4 521 3 5 19 4 3 5 591 4 0 11 2 25 4 4 0 34 12 931 4 1 13 4 4 1 40 14 1101 4 2 15 4 4 2 471 4 3 17 4 4 3 541 4 4 19 4 4 4 621 4 5 22 4 4 5 691 5 0 13 4 5 0 41 16 1201 5 1 15 4 5 1 481 5 2 17 4 5 2 561 5 3 19 4 5 3 641 5 4 22 4 5 4 721 5 5 24 4 5 5 812 0 0 5 0.5 13 5 0 0 23 7 702 0 1 7 1 17 5 0 1 31 11 892 0 2 9 2 21 5 0 2 43 15 1102 0 3 12 3 28 5 0 3 58 19 1402 0 4 14 5 0 4 76 24 1802 0 5 16 5