苹果、梨以及香蕉中所含可溶性糖和蛋白质的比较测定和探讨.doc

苹果、梨以及香蕉中所含可溶性糖和蛋白质的比较测定和探讨姓名：赵云霞 同组者：辛芝红 指导教师：郝雪峰（太原师范学院 生物系112班 学号2011131229）摘要 本文用考马斯亮蓝法、蒽酮法分别对苹果、梨和香蕉提取液中蛋白质含量、可溶性糖含量进了测定。结果表明：等质量的香蕉、苹果、梨中，香蕉含糖量最高，苹果次之、梨最低；香蕉含蛋白质量最高、其次为梨、苹果最少。Abstract this paper by Coomassie brilliant blue,anthrone colorimetry respectively on apple, pear and bananaextracts.Protein content, soluble sugar content in the determination of. The results show that: the quality of banana,apple, pear, banana and sugar content of apples, pears was the second highest, lowest; Banana containing proteinIs the highest, followed by the least, apple pear关键词 苹果、梨、香蕉、可溶性蛋白质、可溶性糖Key words apple, pear, banana, soluble protein, soluble sugar引言 苹果和梨、香蕉是我们生活中最常见也是最多糖是单糖缩合的多聚物。水果多糖作为天然植物多糖中的一类，虽然早就引起了人们的注意，但早期的研究主要是为了搞清其作为结构物质在水果质构方面的作用及在水果贮藏与加工过程中的变化与控制，以改善和保持水果及其加工制品的感官品质。近年来随着天然活性多糖研究的深入，对水果多糖的研究重点也逐步转向了以开发利用为目的的水果多糖的提取分离、结构、化学和生物活性及应用研究，已有人对苹果果肉中多糖蛋白质进行过测定（刘杰超，焦中高 2009），但还没有人对三叶草体内多糖做过相关的研究，也未对其叶和茎中所含多糖进行过对比。本实验的目的在于学习测定水果多糖的原理与方法，蛋白质是细胞中最重要的含氮生物大分子之一，承担着各种生物功能。一、蒽酮法测定苹果、梨、香蕉中可溶性糖的含量1、实验原理总糖是指样品中的还原单糖及在本法测定条件下能水解成还原糖的蔗糖、麦芽糖、和可部分水解为葡萄糖的淀粉。蒽酮比色法是测定样品中总糖量的一个灵敏、快速、简便的方法。 游离的己糖或多糖中的己糖基、戊糠醛及己糖醛酸在浓硫酸的作用下脱水生成糠醛衍生物，糠醛衍生物与蒽酮缩合成蓝色的化合物，在620nm处有最大吸收，在一定糖浓度范围（200ug/ml）溶液吸光度值与糖溶液的浓度成线性关系。用酸将植物组织中没有还原性的多糖和寡糖彻底水解成具有还原性的单糖，或直接提取植物组织中的还原糖，即可对植物组织中的总糖和还原糖进行定量测定。2、实验材料和方法2.1 材料实验材料苹果、梨、香蕉；分光光度计；电子天平 ，大试管；试管架,试管夹；漏斗；漏斗架；容量瓶；刻度 水浴锅；研钵；离心机、离心管2.2 试剂葡萄糖标准液（l00ug/ml）。蒽酮试剂 ：0.2g 蒽酮溶于100 ml浓中当日配制使用 2.3 方法（1） 葡萄糖标准曲线的制作 取 7 支大试管,按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液： 管号1234567葡萄糖标准液（ ml ）0蒸馏水（ ml ） 葡萄糖含量（ ug ）0102030406080蒽酮试剂（ml）10101010101010迅速浸于冰水浴中冷却,各管加完后一起浸于沸水浴中,管口加盖玻璃球,以防蒸发.自水浴重新煮沸起,准确煮沸 l0min 取出用流水冷却,室温放置 10min ,在 620 nm 波长下比色.以准葡萄糖含量（ug) 作横坐标,以吸光值作纵坐标,作出标准曲线. 标准葡萄糖含量（ug)0102030406080吸光度值0.0000.0620.1150.1850.2220.3380.480 (2 )水果样品中可溶性糖的提取： 分别取苹果1g、梨1g、香蕉1g,置于研钵中，用5ml蒸馏水研磨成匀浆，然后转入20ml试管中，用5ml蒸馏水洗涤研钵，洗液一并转入到刻度试管中，置沸水浴中加热煮沸20分钟，冷却后在离心机（4000r/min）中离心10分钟，滤液收集到大试管中，并稀释到100ml。 （3）测定： 分别吸取l.0ml已稀释的三种不同水果提取液于大试管中,加入5.0ml蒽酮试剂,以下操作同标准曲线制作。重复操作三次，比色波长620nm ,记录吸光度,取平均值，在标准曲线上查出葡萄糖的含量（ug）。查表所得糖含量（ug）稀释倍数3 实验结果（1）由表中标准葡萄糖含量及其吸光值，可绘制葡萄糖的标准曲线，其方程为：y = 0.0059x-0.0006。线性关系良好。 可溶性糖的标准曲线Standard curve of soluble sugars样品苹果梨香蕉可溶性糖吸光度0.5470.3890.687结果计算： 可溶性糖含量（%）=从标准曲线查的糖的量（ug）提取液体积（mL）稀释倍数/测定用样品液的体积（mL）样品重量（g）100 糖含量 (ug) 稀释后总体积(ml)提取液体积（mL）苹果835001009.0梨640491009.7香蕉1002001008.6 由表可知，等质量的香蕉、苹果、梨中，香蕉含糖量最高，苹果次之、梨最少。二、考马斯亮蓝法苹果、梨、香蕉中可溶性蛋白质的含量1 实验原理考马斯亮蓝G-250（coomassie brilliant blue，G-250）法是利用蛋白质染料结合的原理，定量地测定微量蛋白质浓度的快速、灵敏的方法。考马斯亮蓝G-250存在着两种不同的颜色形式，红色和蓝色，它和蛋白质通过范德华瓦尔键结合，在一定蛋白质浓度范围内，蛋白质和染料结合复符合比尔定律。在一定蛋白质浓度范围内(11000g)，蛋白质与色素结合物在595nm波长下的吸光度与蛋白质含量成正比，故可用于蛋白质的定量测定。考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合反应十分迅速，约2min即可反应完全，呈现最大吸光度，其结合物可在室温下1h内保持稳定。此法灵敏度高（比Lowry法灵敏4倍），易于操作，干扰物质少，是一种较好的定量法，其缺点是在蛋白质含量提高时线性偏低，且不同来源的蛋白质与色素结合状况有一定差异。2 材料和方法 2.1 材料 实验材料为苹果、梨、香蕉 分光光度计；离心机；研钵；烧杯；量瓶；移液管；试管等。2.2 试剂 标准蛋白质溶液（l00ug/ml牛血清蛋白）：称取牛血清蛋白25mg，加水溶解并定容至100mL，吸取上述溶液40mL，用蒸馏水稀释至100ml。考马斯亮蓝试剂：称取100mg考马斯亮蓝G-250，溶于50mL90%乙醇中，加入100mL85%（W/V)的磷酸，再用蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中，常温下可保存一个月。2.3 方法（1）标准曲线的绘制取7支试管，按规定加入试剂，摇匀，像各管中加入5mL考马斯亮蓝试剂，摇匀，并放置5min左右，以0号试管为空白对照，在595nm下比色测定吸光度。以蛋白质含量为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线。标准溶液蛋白质含量（ug)020040060080010001200吸光度值0.0000.0650.1320.2530.3370.4300.485(2)样品中蛋白质的提取 分别称取梨、苹果、橘子鲜样1.0g，用10mL蒸馏水或冲研磨成匀浆后，转移到离心管中5000r/min离心10min，上清液备用，并准确量取提取液体积。(3)测定 吸取样品提取液1.0mL(视蛋白质含量适当稀释)，放入试管中（每个样品重复两次），加入5mL考马斯亮蓝，摇匀，放置2min后在595nm下比色，测定吸光度，并通过标准曲线查得蛋白质量。3 实验结果（1） 由上表标准蛋白含量及其吸光值，可绘制蛋白质的标准曲线如下，其方程为：y=0.0005x+0.0254。线性关系良好。 蛋白质的标准曲线 Protein standard curve样品苹果梨香蕉可溶性蛋白质吸光度0.2320.4370.660式中：C查标准曲线值，ug。提取液总体积，mL。样品鲜重， Vs 测定时加样量，mL。蛋白质含量(ug)提取液总体积ml测样时加样量ml样品鲜重g苹果3305.64.01.00.5梨730.5香蕉930.5讨论本实验以生活中最常见的水果苹果、梨和香蕉为材料，做了其果肉中多糖含量和蛋白质含量的对比。得出在等量的苹果、梨、香蕉中多糖含量和蛋白质含量香蕉最高，苹果含糖量高于梨，梨的蛋白量高于苹果。据中国农业科学院郑州果树研究所研究表明，每100克苹果中含糖量在10%15%之间，是低糖类水果，本实验所用的苹果中的多糖含量达8%，低于15%，其原因可能与地区气候有关，昼夜温差大，与实验操作失误有关。苹果和梨、香蕉都属于低蛋白质水果，曾经有人测过苹果中的蛋白质（许淑芳 朱江 考马斯亮兰G-250法测定苹果浓缩汁生产中的蛋白含量 2005），其结果表明蛋白质含量较低。据美国读者文摘报道苹果被列为健康水果之最。梨也是人们所受欢迎的水果也被列入健康水果之列。 苹果、香蕉和梨中含有少量多糖。多糖是水果中一类重要的功能因子, 多糖的免疫调节、抗肿瘤、抗氧化、抑菌、抗病毒和降血糖等生物活性。近年来多糖类药物研究迅速发展，许多发达国家已经充分认识到多糖类药物具有广阔的前景并能带来巨大的经济效益。目前全球从植物中提取的糖类药物的年销售额达近百亿美元，成为新药研究特别是抗癌药物开发的焦点目标。由于水果多糖具有多种生物活性，因此可以选择部分药理作用明确、活性强的高纯度水果多糖进行临床实验，开发成各种胶囊、针剂等，用于治疗癌症、糖尿病等（刘杰超 2008）。再者苹果和梨是我国最普遍的也是最廉价的提取糖类物质的材料。苹果和梨是种植很普遍的水果，资源量比较大，很有利用发展前景，可以作为一个产业来做。 蛋白质是细胞中最重要的含氮生物大分子之一，蛋白质含量和种类也是衡量农产品等营养价值的指标之一。在苹果和梨中虽然量比较少但是这两种资源特普遍资源量大我们可以利用相关科学技术提取出蛋白质供人们所利用。本实验旨在对比测定苹果、香蕉和梨中含多糖和蛋白质并对这三种常见的水果的营养价值和食用价值加以对比，就其这三种水果本身价值来讲苹果要比梨有营养价值，其体内不仅含有三大营养物质，更重要的是含有大量的蛋白质、脂肪、碳水化合物、维生素A、维生素B1、维生素B2、维生素C、胡萝卜素以及钙、镁、磷、铁、锌、钾、硒、苹果酸、柠檬酸、酒石酸、鞣酸、烟酸、果酸胶、纤维素等。尤其是苹果被称为是水果之王。可以降低感冒机率也可以降低心脏病发病率，还可以减肥，是现代女性最理想的减肥水果。本实验为其探究和利用这三种特普通水果提供一定的理论依据。此外香蕉几乎含有所有的维他命、和矿物