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文档简介

BIOXL 高致病性猪蓝耳病一步法凝胶 RT-PCR 诊断试剂盒说明书（针对中国猪蓝耳病变异株检测）一，产品简介一步法突变型猪生殖与呼吸综合症病毒反转录 PCR检测临床样本和环境样本包括48 个扩增反应所需的试剂48次/盒请在使用前通读操作手册二. 试剂盒组成 25 管 扩增反应试剂球 (Reagent Sphere; 4oC 保存) 2 x 520 l PRRSV 扩增反应试剂球溶液 (Sphere Diluent; -20oC 保存) 2 x 25 l 阳性对照 (Positive control; -20oC 保存)三，保存条件试剂球需置干燥剂中保存在4oC，已融解的试剂球则需保存在零下20oC 。其它试剂亦需保存在零下20oC。使用前在冰上溶解各试剂并充分混合，不要旋涡振荡含酶的扩增反应试剂。四. 操作程序扩增反应试剂的准备1. 计算所需的反应数量 (n)2. 需要溶解的试剂球 = 0.5 x n3. 每个试剂球需要 40 l 试剂球溶液4. 在冰上溶解试剂，并轻轻扣击充分混合 (不要旋涡振荡含酶的试剂)反应的准备1. 实验中除从样本中获得的 RNA 模板外，我们还建议设置阳性和阴性（水）对照2. 按照下表准备扩增反应试剂：反应组分 每个反应体积扩增反应试剂 20 l样品 RNA 5 l总体积 25 l注意: 实验时 RNA 应放在冰上 阳性对照建议加5 l 试剂盒提供的阳性对照。 建议 PCR 过程中检测样本设置重复，以便得到可靠的实验结果 为了验证阴性实验结果不是由于样本中存有 PCR 抑制物而导致 PCR 呈阴性反应，我们建议在测试样本中加1 l 的阳性对照作为 spiking 对照 (spiking control)，同时进行 PCR 反应。PCR 循环:1 个循环 42oC 30 分钟95oC 10 分钟40 个循环 95oC 30 秒53oC 45 秒72oC 30 秒五. 实验数据分析PCR 的产物需要通过 2%琼脂糖凝胶电泳检测。野生型 PCR 产物的长度为330 b.p.相对于变种型 PCR 产物的长度为240 b.p.Spiking 对照阴性的实验结果有几个可能性：1. 样本中不存在目的片段；2. 样本中目的片段的量低于检测值；3. 样本中存有 PCR 抑制物。试剂盒中设计 spiking 对照 (spiking control) 是为了确定没有发生 PCR 抑制。如果样本中加了阳性对照以后得出阴性结果，说明样本中存
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